运用差异显示技术分离水花生在干旱胁迫下表达上调的基因

干旱发生时,水花生的须根将转变成又长又粗的肉质根,这有利于保水和从土壤深处汲取水分以减轻旱害.本研究中采用差异显示技术克隆干旱发生时与水花生根形态发生相关的基因,为进一步通过转基因提高农作物抗旱性奠定基础;共使用15对引物组合,回收到20个可能的在干旱诱导后表达上调的带,其中有一个能被反向northern所证实;而后对其进行了克隆和测序;同源性比对表明它可能是一个新基因的片段.半定量RT-PCR分析进一步证明该基因在干旱和盐胁迫下表达上调.     

mRNA差异显示技术在分离水稻抗性基因中的应用

mRNA差异显示技术从问世至今,在分离水稻抗性基因中得到了广泛的应用,通过对差异表达基因进行分析,能够进一步阐明水稻的抗性机理.对近年来mRNA差异显示法分离水稻抗性基因的研究做了总结,并从引物改进、PCR退火温度、dNTP浓度的改进、胶浓度的选择、标记方法的改进和差异片段验证方法的改进7个方面对mRNA差异显示技术的优化做了简单阐述.     

小麦种子萌发期水分胁迫诱导表达差异cDNA的研究

以小麦幼芽为材料,采用mRNA差异显示方法和银染技术,对经过用16%(-0.5 MPa)PEG-6000溶液处理不同时间而诱导表达的小麦基因进行分离,共得到cDNA差异片段16条。其中4条差异条带呈表达减弱,其余差异条带均呈表达增强。测序结果与GenBank数据库比对,2个cDNA片段与已知基因同源,WSI241与编码胚后期丰富蛋白的Em基因同源性达100%,WSI208与ARA-1 mRNA同源性达88%。大部分都是功能未知的EST序列。其中WSI483(454 bp)与小麦干旱胁迫幼苗cDNA同源性达100%;WSI232与小麦干旱胁迫叶cDNA同源性达100%。WSI301与小麦盐胁迫芽鞘cDNA同源性达98%,WSI267与小麦热胁迫旗叶cDNA同源性达93%,WSI289与小麦ABA处理胚cDNA同源性达92%,WSI268与镰刀菌感染的小麦穗同源cDNA同源性达97%。经反向Northern验证,有6个cDNA呈阳性。可用探针或设计引物作进一步研究。     

利用DD-PCR技术分析水稻铝诱导基因的表达差异

 利用差异显示（Differential Display PCR，简称为DD-PCR）技术比较了水稻对铝极敏感的品种pp2462-11和极抗品种Pedel在铝胁迫条件下基因的表达差异。结果表明：抗性品种和敏感品种在铝胁迫下其苗期mRNA存在明显差异，实验共发现25个差别cDNA，铝既可诱导抗性品种和敏感品种的基因表达，又可抑制其基因表达。本研究推测抗性品种特异表达的片段可能与合成抗性蛋白有关，敏感品种基因的特异表达可能产生一些毒害蛋白，抑制根的生长。     

晋西北高寒区玉米推广种展示及分区应用研究

通过定点展示、多点调研,对近年来种植面积较大的8个玉米品种进行了种性鉴定、产量分析和综合评价。并在专家认可的基础上,针对山西玉米春播特早熟区垂直地带性气候特点,提出“生态类型亚区”及规范应用建议。     

用矢量计算法动态显示多履带机械倾翻稳定性

分析了多履带机械的受力情况，针对其作业特点提出了绕三个球型支座失稳和绕中心回转轴承失稳时的稳定性计算模型和计算方法，编制的稳定性分析软件，可以动态显示各种工况下的稳定区域图。其研究成果对于多履带机械的稳定性计算和总体设计具有实用价值     

梅山猪、大白猪和梅大杂交猪背最长肌中差异表达的14个表达序列标签的分离、鉴定及组织表达分析

为了揭示猪杂种优势的分子机理,利用mRNA差异显示技术研究梅山猪,大白猪和梅大杂交猪背最长肌中基因表达的差异,分离14条在杂种与纯种背最长肌中差异表达的表达序列标签(EST),并用半定量RT-PCR鉴定.核苷酸序列分析表明,这14个EST与已知的基因或表达序列标签没有明显的同源性,随后这14条EST被提交到GenBank数据库.组织表达谱分析揭示了这些EST在心、脾、肝、肾、小肠、卵巢、肺等绝大多数组织中表达,说明这些基因对生命过程很重要.这些研究结果表明梅山×大白杂交组合的杂种与纯种之间的不同基因差异表达的方向存在巨大差异,猪杂种优势可能是在一定阶段有诸多不同的必不可少的基因向各种方向差异表达共同作用的结果.     

牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库的构建与鉴定

通过构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)驼源重链抗体文库,并鉴定抗体文库的多样性,为筛选抗BVDV特异性重链抗体奠定基础。利用灭活的BVDV免疫双峰驼,多次免疫后测定血清抗体滴度,采集免疫后的血液并分离其外周淋巴细胞,抽提RNA,用RT-PCR法扩增重链抗体可变区(VHH)片段;将其克隆至载体pCANTAB5E,电转大肠杆菌TG1获得VHH抗体基因库,检测抗体库库容量,随机挑取克隆测序验证抗体文库多样性。结果表明,所构建的抗体文库的库容量为4.32×105;测序和聚类分析表明,抗体文库多样性丰富。利用辅助噬菌体救援后,得到噬菌体展示文库,测定滴度达1.3×1012 cfu/mL。     

一种简单实用的浮子式钢带液位测量装置

本文介绍一种简单实用的液位测量装置．提出了设计方案，对变送器、显示仪表主要电路进行了原理分析     

Epitope identification and <Emphasis Type="Italic">in silico</Emphasis> prediction of the specificity of antibodies binding to the coat proteins of <Emphasis Type="Italic">Potato Virus Y</Emphasis> strains

A phage library containing 2.7 × 10⁹ randomly expressed peptides was used to determine the epitopes of three monoclonal antibodies that bind to the coat protein of potato virus Y. Construction of the consensus sequences for the peptides obtained after three selection rounds indicated that each antibody recognized a different epitope located within the first 50 N-terminal amino acids of the coat protein. The location of the epitopes was confirmed by heterologous expression of the N-terminal part of the coat protein in Escherichia coli, and, subsequently, by performing an immunological test with the three antibodies. The accuracy of the phage library was demonstrated by predicting in silico the cross-reactivity of the three antibodies with other potyvirus family members. ELISA and in silico predictions revealed the same results in almost every case. The potential of peptide phage libraries to optimize the use of antibodies in plant virology is discussed.