中药免疫增强剂在猪瘟疫苗免疫中的免疫调节作用的研究

通过对断奶仔猪投服不同剂量的中药免疫增强剂,研究其对猪瘟疫苗接种猪免疫调节作用的影响.结果表明,试验组在注射猪瘟疫苗同时,以1%的中药免疫增强剂混饲,试验组猪瘟血清抗体效价明显高于对照组,差异显著（P＜0.05）;接种疫苗后15、45 d,试验组T淋巴细胞百分率显著高于对照组（P＜0.05）.表明猪只在接种猪瘟疫苗的同时服用中药免疫增强剂,能显著增强猪瘟疫苗的免疫效果,促进T淋巴细胞的增殖,增强其免疫力.     

旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增

用改进的ＡＧＰＣ法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ。每０．１ｍｌ压积虫体可获得１００μｇ的ＲＮＡ，其Ａ２６０与Ａ２８０及Ａ２６０与Ａ２３０的比值均接近于２，变性琼脂糖凝胶电泳显示，旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ缺少大部分真核生物所具有的２８Ｓ ｒＲＮＡ．通过比较研究，筛选出理想的虫体处理方法。用聚合酶链式反应直接从总ＲＮＡ中进行目的基因的扩增，得到一分子量为０．７ｋｄ的ＤＮＡ。通过限制性内切酶对其消化鉴定，     

抗牛结核分枝杆菌VHH抗体T7噬菌体库的构建与筛选

为获得抗牛结核分枝杆菌的VHH纳米抗体,本研究利用牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白免疫双峰驼,免疫效价达到1∶8 000后采外周血分离淋巴细胞,提取RNA反转录成cDNA,利用巢式PCR方法扩增出编码单域抗体VHH的400 bp基因片段。将目的片段用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,与T7噬菌体载体臂T7Select 10-3RI Arms连接,再通过体外重新包装含目的片段的噬菌体。对建立的VHH噬菌体抗体库进行鉴定,原始文库库容为5.7×10~8 PFU,库阳性率为85.7%。通过4轮生物亲和淘选,筛选并表达出2株高特异性的VHH抗体,均对牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白具有特异性。本研究为进一步探讨VHH抗体在牛结核病的诊断和治疗奠定了基础。     

负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞启动的CD8~＋T细胞应答

探讨在体外条件下负载灭活口蹄疫病毒（iFMDV）树突状细胞对CD8＋T细胞的活化效应。用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和白介素-4（rmIL-4）将小鼠外周血单核细胞诱导分化成树突状细胞（MoDCs）,用信号阻断法从淋巴结T细胞制备CD8＋T细胞,利用负载iFMDV的MoDCs与CD8＋T细胞共培养,以iFMDV＋MoDCs作为对照,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量。用蛋白酶体抑制剂处理MoDCs,2h后再负载iFMDV,并与CD8＋T细胞共培养,对照组则用iFMDV＋MoDCs＋CD8＋T细胞,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量。结果表明,同对照组相比,在共培养后9,12,24,36,48h,CD8＋T细胞组均产生高水平的IFN-γ。而且,经抑制剂预处理的MoDCs与CD8＋T细胞共培养后,其分泌的IFN-γ量不仅没有降低,反而显著升高。因此得出,MoDCs可与蛋白酶体等加工iFMDV抗原,并通过交叉提呈途径激活CD8＋T细胞。     

健康中国恒河猴各淋巴组织中T淋巴细胞表型及分布

试验旨在明确T淋巴细胞在中国恒河猴各组织中的表型与分布,为疾病模型研究提供基础数据。取外周血、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结及肠道组织,从中分离出淋巴细胞。使用流式细胞术检测分析各种表型的淋巴细胞在组织间的分布。结果表明,淋巴结中CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值高于外周血,肠道固有层中最低,三者差异显著。记忆性T细胞在外周血和肠道固有层T细胞中比重较大,而淋巴结中主要为幼稚T细胞。CD4⁺ T细胞中中心记忆T细胞Tcm为主要亚群,而CD8⁺ T细胞主要为效应记忆细胞Tem。外周血与肠道固有层中增殖T细胞比例相当,而淋巴结中T细胞增殖水平相对较低。各组织中CXCR4受体表达量普遍高于CCR5受体,其中肠道固有层CCR5受体表达水平最高。值得注意的是,有一小群表型CD3⁺ CD4⁺ CD8low的细胞仅在肠道固有层中存在,经分析其功能活性应高于肠道CD4单阳性T细胞。因此,测定了健康中国恒河猴各表型T淋巴细胞在多种淋巴组织中的基础数值,为相关模型研究奠定基础。     

植物血凝素对仔猪免疫功能的影响试验

从鸡子豆中提取植物血凝素（PHA）,测得血凝效价为28,冻干后每瓶PHA重87mg。以7、14、70mg/kg剂量与猪瘟疫苗同时注射35日龄仔猪,15d后,高剂量组的抗体水平比对照组极显著提高（P〈0.01）,中、低剂量组比对照组显著提高（P〈0.05）;高、中、低剂量组的T淋巴细胞百分率比对照组显著提高（P〈0.05）,以高剂量组效果最好。     

不同日龄鸡脾脏中T淋巴细胞增殖功能的动态观察

本研究采用四甲基偶氮唑盐淋巴细胞转化实验法对不同时期鸡的脾脏中T淋巴细胞的增值功能进行检测。结果发现,在胚胎20日龄和出壳后1日龄刀豆蛋白刺激组的A值很小,但到4日龄时A值迅速增大,到7日龄时达到最大,随后又减小,直至35日龄时趋于稳定。由于T淋巴细胞的增殖功能与其鸡免疫功能呈正相关,所以说脾脏中T淋巴细胞的细胞免疫功能随着日龄增长基本呈现逐渐增强的趋势,并在7日龄时达到成熟水平。     

缺失gE基因的牛Ⅰ型疱疹病毒构建及其体外增殖特性比较

为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺失突变体pBHV1-△gN-△gE则未能观察到细胞病变。病毒噬斑大小和生长曲线试验表明,在感染细胞内和培养基中,rBHV1-△gE滴度与亲本毒株BHV1无明显差异,而rBHV1-△gN显著降低;重组病毒rBHV1-△gE和前期构建的rBHV1-△gN形成的噬斑均显著小于亲本病毒,其大小分别为亲本病毒的18%和64%。rBHV1-△gE和rBHV1-△gN的构建将有助于阐明gE与gN协同作用机制和为研制BHV1新型基因标记疫苗奠定基础。     

龙凤水库大桥的T梁设计

连续T梁是高速公路上常用的一种桥梁结构形式,具有施工简易、行车条件好且经济合理的优点。广贺高速公路广宁至怀集段广泛采用,现以龙凤水库大桥为例,简要介绍先简支后连续T梁的结构设计特点和计算方法。     

大麦2H染色体对小麦农艺和品质特性的影响

为了研究2 H染色体对小麦农艺和品质特性的影响,测定了普通小麦中国春(CS)、栽培大麦Betzes及其杂种衍生的二体异附加系CS 2H和3个异代换系2H/2A、2H/2B、2H/2D的农艺性状及籽粒硬度、蛋白质组成、淀粉特性.结果表明,2H附加系和代换系的农艺性状比CS都有不同程度的改善,但不育小穗数增加,不育率提高,以2H/2A的不育率最高(40.4%).籽粒硬度仅2H附加系表现超亲,三个代换系则介于双亲之间.含2H染色体材料的蛋白质、总氨基酸、苏氨酸和赖氨酸含量、沉淀值均表现超亲遗传,尤以2H/2A的超亲优势最大.3个异代换系的直链淀粉含量均低于双亲,以2H/2A的含量最低;2H/2B的降落值介于双亲之间,其余均超亲,以2H/2A最高.三个代换系的峰值粘度、最终粘度都超亲,稀懈值介于双亲之间.2H/2A在这些淀粉品质指标中表现出了最好的遗传正效应.