PRRSV经典株和变异株RT-nPCR鉴别诊断方法的建立

【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测,达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列,设计并合成了2对引物,通过改变不同的反应体系和反应条件,建立PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测,验证建立RT-nPCR方法的适用性。【结果】建立了PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,该方法检测的cDNA含量极限为1.3×10-7 pg/μL;且仅能从PRRSV毒株中扩增到目的条带,从CH-1R经典株扩增出649bp条带,从SXXY/2013变异株扩增出562bp条带,电泳后能清晰区别,而从其他参考毒株中均不能扩增出目的条带。从48份疑似病料组织和血清中能直接检测出31份阳性结果。【结论】建立了一种灵敏度高、特异性好、可直接从病料组织和血清中快速鉴别PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR方法。     

梅花鹿狂犬病的病原学研究

应用鼠脑传代,从具有神经症状和后躯麻痹的鹿尸脑组织分离获得5株弹状病毒。对其中一株——8202株,从形态学、生物学和理化学等方面进行了鉴定。应用弹状病毒料中狂犬病海和狂犬相关病毒等的抗血清或免疫腹水,在小鼠体内进行交叉中和试验,证明鹿毒8202株同狂犬病毒固定毒(北京株)有密切的抗原联系。经WHO狂犬病咨询和研究协作中心应用42个单克隆抗体,以间接荧光抗体试验检测鼠脑压印片,证明该株病毒的核衣壳抗原结构与大多数陆栖哺乳动物狂犬病毒相同,但有别于欧洲狐狸的狂犬病毒;用40个抗糖蛋白单克隆抗体,通过血清中和试验,证明8202株同欧洲狐狸毒株很相似。将该毒复旧鹿体,并接种犬及其他动物,发现其对鹿的毒力很强,而对犬及其他家畜毒力较弱,甚至没有毒力。结论认为,鹿毒8202株是狂犬病毒适应于鹿体的变异株。     

Evaluation of protection conferred by a vaccination program based on the H120 and CR88 commercial vaccines against a field variant of avian infectious bronchitis virus

Due to serotype variations among different avian infectious bronchitis viruses isolated in Tunisia since 2000, protection of chicks, especially broiler flocks, with Mass H120 vaccine often fails. Therefore, association of CR88 (793B type) with H120 vaccines was used for better response. Challenge experiments were then conducted to evaluate tracheal and renal cross-protection in chickens immunized via nasal and eye drops. Conferred protection was measured by clinical signs and macroscopic lesions observed, based on scores attributed according to their severities. The results showed a low protection conferred by H120 alone, as vaccination did not reduce tracheal and kidney lesions (70% scored as 3) after TN20/00 virus challenge, which also led to 10% mortality. Conversely, the challenge results indicated that the combination of the 2 strains (H120/CR88) allow high protection. Based on the results of the challenge experiments, a vaccination protocol coupling CR88 to H120 was applied for industrial broiler flocks. Clinical observations and serological results confirmed that association of heterologous serotypes (H120 and CR88 vaccines) increased the levels of protection against infectious bronchitis viruses compared with the H120 vaccine given alone.     

胡萝卜抗HgCl_2变异细胞系的筛选

利用胡萝卜下胚轴愈伤组织 ,以HgCl2 为选择剂 ,通过多步正筛选法 ,获得了抗性变异细胞系 .抗性鉴定结果表明 ,在不同HgCl2 浓度的培养基上 ,抗性系的愈伤组织存活率和鲜质量增殖率均明显高过亲本系 ,抗性系的细胞膜透性也发生了变化 .对抗性系和亲本系愈伤组织进行再分化的结果表明 ,在连续 3～ 4代的分化培养之后 ,愈伤组织都能再生绿苗 .提出了该项研究在预防和治理重金属污染方面的重要意义 .     

基于改进萤火虫算法的土壤水分特征曲线参数优化

针对因参数精度不足,影响相关土壤水分运动建模、仿真结果等问题,引入萤火虫算法,并将固定随机步长改进为随萤火虫间距离变化的可变步长,旨在解决土壤水分特征曲线Van Genuchten模型参数优化的非线性拟合问题。结果表明:对不同深度的黑土和黏土的脱湿过程进行模拟,得到优化后的相关参数及体积含水率计算值。通过与粒子群算法、遗传算法对比,表明萤火虫算法模拟结果精度高,曲线吻合性好,最大相对误差仅在2%左右,是一种高精度的优化算法,且改进之后收敛效率提高。利用萤火虫算法解决这类非线性优化问题是可行的,尤其在对精度、准确性要求较高及需为后续研究确定其他土壤水分运动参数提供准确依据的情况下,适用性更强。     

抗茎腐病的玉米(Zea maysL．)自交系体细胞变异体选择

用玉米自交系综3、综31、5003、P9－10(Zea meys L)的幼胚所诱导的愈伤组织，在继代繁殖后一部分愈伤组织转移到含有玉米茎腐病的病原菌(F.graminearum)毒素的培养基中培养并进行变异体选择，现已获得了大量的抗毒素变异体再生植株，并有部分植株移栽成活。     

植物染色质组蛋白H3变体的研究进展

组蛋白H3是构成染色质的重要成分之一。高等真核生物中,组蛋白H3的氨基酸序列较为保守,在染色质动态变化中,有着非常重要的作用。除共价修饰外,如组蛋白H3甲基化、乙酰化,近期研究表明,动物组蛋白H3变体(H3 variants)也是一种重要的染色质功能调节手段,但对植物中组蛋白H3的报道较少。根据近年最新研究成果,对植物组蛋白H3变体种类及其相关功能进行了总结和讨论。     

抗茎腐病的玉米（Zea maysL．）自交系体细胞变异体选择

用玉米自交系综３、综３１、５００３、Ｐ９－１０（Ｚｅａ　ｍｅｙｓ　Ｌ）的幼胚所诱导的愈伤组织，在继代繁殖后一部分愈伤组织转移到含有玉米茎腐病的病原菌（Ｆ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）毒素的培养基中培养并进行变异体选择，现已获得了大量的抗毒素变异体再生植株，并有部分植株移栽成活。     

基于元件基础框架的产品结构变型方

针对产品结构变型需求,结合面向对象方法中的框架表示和继承理念,提出了基础框架的概念.元件基础框架代表了功能相似产品元件共性的功能、结构及几何特性,基础框架解决了异构可变型元件的难以统一形式化表示的问题.提出了一种基于元件基础框架的结构变型设计方法,研究了基础框架构建关键技术.通过继承相同基础框架的异构零部件族模型变型实例的替换以及零部件模型自身的尺寸变型,实现产品结构与尺寸的复合变型.最后,将该方法在Pro/Engineer平台上进行了软件实现,实际应用证明了该方法的有效性.     

犬瘟热病毒疫苗变异株的分离及其P1蛋白的表达、鉴定

从河北某宠物医院病犬的脾脏中分离到1株犬瘟热病毒,H基因测序结果表明,该分离株与疫苗株的同源性为99.5%,有3个氨基酸突变,但不影响其糖基化位点。将该株病毒P1基因克隆到pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下获得大小为50 ku,可溶性表达的P1重组蛋白。Western blotting、间接ELISA试验结果显示表达产物能被犬瘟热高免血清所识别,表明其具有良好的反应原性,有望用于犬瘟热的检测。