传染性法氏囊病病毒变异E株对法氏囊上皮形态和机能的影响

运用传染性法氏囊病病毒变异Ｅ株通过泄殖腔人工感染ＳＰＦ鸡胚和雏鸡,观察了法氏囊上皮细胞的形态学变化和机能变化。结果表明,病毒感染后,法氏囊上皮细胞微绒毛坏死、断裂、脱落,上皮细胞之间连接松散,表面上皮细胞坏死剥脱,形成火山口样特征性变化;法氏囊上皮细胞的内吞功能和分泌功能受到严重破坏和减弱。     

北京地区禽传染性支气管炎病毒分子变异机制研究

 从北京地区传染性支气管炎病毒（IBV）肾病变分离株BJ#-1、BJ#-2、BJ#-3株中利用RT-PCR成功扩增出1054bp纤突蛋白S#-1基因高变区。将3段S#-1基因分别克隆到Puc19质粒中,对3个重组阳性质粒进行双向测序,获得3个分离株S#-1基因高变区的序列。将得到的序列与标准株M#-（41）、Beaudette株和疫苗株H#-（120）及广东地方分离株D#-（41）株进行核苷酸和氨基酸同源性比较分析,并进一步推导它们的蛋白二级结构进行比较。结果表明,3株分离株与M#-（41）株的核酸碱基序列和氨基酸序列同源性比与H#-（120）株和Beaudette株的高,而蛋白二级结构却与H#-（120）疫苗株最为相近,暗示核酸碱基序列差异与病毒抗原决定簇的二级结构变化进而导致血清型变化三者之间的复杂关系。     

梁山慈竹体细胞突变体特性及分子水平变化

以同期生长的梁山慈竹体细胞突变体No.29植株和实生植株(对照)为材料,对其茎秆化学成分和光合生理相关指标进行测定,并基于RNA高通量转录组测序结果,对No.29植株的纤维素、木质素等合成有关的基因差异表达进行分析。结果表明,与实生植株相比,No.29植株具有较高的株高、胸径、茎秆的鲜重和干重以及纤维素含量、纤维长度和宽度;纤维素含量比实生植株高12.89%;外方和内方纤维股明显增大;灰分含量、卷曲指数和扭结指数明显降低;但发笋量、木质素含量和细小纤维含量没有明显差异。No.29植株中的Ces A、Su Sy、UDPase基因分别比实生植株上调了117%、205%、115%,转录因子MYB基因表达上调了214%,驱动蛋白基因表达上调了10倍,动力蛋白基因表达上调了760%。No.29植株纤维素含量与纤维形态上明显的改变有其遗传基础,为No.29的进一步研究与利用奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株和经典株RT-PCR鉴别诊断技术及其临床应用

【目的】建立能针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）经典株和变异株的RT-PCR鉴别诊断技术,为有效防控猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）提供技术支撑。【方法】根据GenBank中已发表的PRRSV Nsp2基因序列,设计1对特异性引物,建立能鉴别PRRSV经典株和变异株的RT-PCR诊断技术,并进行特异性、敏感性试验及临床应用。【结果】建立的RT-PCR能同时扩增获得两条大小与预期结果一致的特异片段,即332bp（经典株）和241bp（变异株）,根据其大小可将两者鉴别区分;而且具有较强的特异性和较高的敏感性,能同时检测出100fg PRRSV经典株和变异株的RNA含量;临床应用发现37份可疑病料中PRRSV经典株占24.32%,变异株占51.35%,其余样品为阴性。【结论】该RT-PCR技术能有效鉴别PRRSV经典株和变异株,且具有快速简便、特异敏感的特点,在临床诊断方面具有广阔的应用前景。     

凡纳滨对虾肌钙蛋白Ⅰ型基因4种不同剪切体的序列分析

采用RT-PCR技术克隆了凡纳滨对虾肌钙蛋白Ⅰ基因全长编码序列,对其核苷酸序列和编码的氨基酸序列进行了生物信息学分析,并在对虾肌钙蛋白Ⅰ基因的编码区查找了单核苷酸多态性位点。结果显示：本研究克隆获得了凡纳滨对虾肌钙蛋白Ⅰ基因的4个可变剪切体,其编码的蛋白质均具有Troponin超家族结构域特征,同源性比对发现该蛋白的氨基酸序列在节肢动物中高度保守。系统进化分析发现凡纳滨对虾Tn-Ⅰ3和Tn-Ⅰ4与中国对虾和小龙虾的Tn-Ⅰ遗传距离较近,而Tn-Ⅰ1和Tn-Ⅰ2单独聚为一支,且与其他物种Tn-Ⅰ遗传距离较远;通过测序比较不同个体凡纳滨对虾Tn-Ⅰ基因序列发现在Tn-Ⅰ的4种不同剪切体编码区共同序列区第302位和472位碱基分别存在2个（A/G） SNP位点,其中位于第302位碱基的（A/G）错义突变使编码氨基酸由甘氨酸变为了谷氨酸（G/E）。凡纳滨对虾Tn-Ⅰ基因不同剪切体及编码区错义突变的发现为进一步探讨其基因功能奠定了基础。     

伪狂犬病病毒变异株的鉴定及伪狂犬病的防控

2011年以来伪狂犬病病毒（PRV）变异株在中国大范围流行致伪狂犬病（PR）再次暴发。广东某猪场发生疑似PR引起母猪较大范围的流产,为此本试验展开对该病诊断和防控方法的研究。随机抽取流产和未流产母猪血清,应用ELISA检测PRV gE和gB抗体;同时采集发病仔猪脑组织PCR检测PRV gH片段。对全场母猪紧急接种PRV变异株灭活苗,分别应用ELISA和中和试验检测免疫前后的血清抗体。结果显示,已发生流产母猪血清PR gE抗体均为阳性,而未流产母猪血清抗体见弱阳性;流产母猪PRV gB抗体的S/P值高达4.0,未流产母猪也达3.3。PCR检测3头病仔的脑组织均为阳性,测序表明其gB基因与2012年流行毒株BJ-YT-2012序列相似性为100%。ELISA检测免疫灭活疫苗前母猪血清PRV gB抗体S/P值为1.603,免疫4周后升高到2.88;特别是中和抗体从1：24升高到1：213。这与免疫疫苗1周后母猪流产开始减少,2周后母猪少见流产的结果吻合。研究结果提示,PRV经典株疫苗产生的PRV gB抗体对变异株的保护作用不佳,而变异株疫苗的保护效果显著。     

Isolation of Mycobacterium paratuberculosis from sheep and cattle in Iceland.

Isolation of Mycobacterium paratuberculosis from sheep and cattle in Iceland. Acta vet. scand. 1979, 20, 191–199. — Culture experiments concerning the Icelandic variant of Mycobacterium paratuberculosis are described. Various decontaminating agents and culture media were employed and the colonial morphology of freshly isolated strains on different media described. The growth rate and culture requirements are compared with those of the Norwegian goat-pathogenic variant of M. paratuberculosis. For primary isolation modified Herrold’s medium gave the best results. However, on all the various culture media used, the growth of the Icelandic variant was much more sporadic than that of the Norwegian goatpathogenic variant. It is concluded that bacteriological culture is not useful for the diagnosis of Johne’s disease caused by the Icelandic variant of M. paratuberculosis.     

高山红景天红外指纹图谱共有峰率和变异峰率的双指标序列分析

利用PE-1730傅里叶变换红外光谱仪对8种来源的高山红景天块根粉末进行分析,以红外指纹图谱的共有峰率、变异峰率为计算指标,分析样品相对原生境野生植株样品的共有峰率和变异峰率,建立共有峰率和变异峰率双指标序列分析方法。结果表明:产地相近的H1与H4之间具有较高的共有峰率(88.89%)和较低的变异峰率(12.50%);种质来源地不同、倍性相同的H5与H3通过相同的生境栽培,共有峰率仅为22.22%;种质来源地相同、倍性不同的H5与H6共有峰率达到71.43%;不同种源、不同倍性、相同生境的H6与H8红外图谱的相似度为57.14%。     

棉花耐盐胚性细胞系筛选及其植株再生

 继代1年以上的棉花品种珂字201下胚轴产生的胚性愈伤组织，转入加有不同浓度[0、8.56×10#+(-2)、1.71×10#+(-1)、2.57×10#+(-1)、3.42×10#+(-1)、5.13×10#+（-1）、6.84×10#+（-1）mol/L]NaCl的筛选培养基上培养，经过3代筛选，获得耐盐胚性细胞系和再生植株。NaCl显著抑制了愈伤组织的存活和生长，NaCl半致死浓度在8.56×10#+（-2）～1.71×10#+（-1）mol/L之间，致死浓度为6.84×10#+（-1）mol/L。NaCl浓度影响着体细胞胚的发生和发育，影响着体细胞胚的萌发和植株再生。添加1.71×10#+（-1）mol/L NaCl培养基，筛选出的愈伤组织生长较好，并能分化出体细胞胚和正常再生植株。在本实验中，笔者获得了耐3.42×10#+（-1）mol/L NaCl的体细胞胚和耐1.71×10#+（-1）mol/L NaCl的正常再生植株。     

IBDV地方变异株VP2基因的克隆与特性鉴定

应用 RT- PCR技术对 1株分离于地方免疫鸡群中暴发的传染性法氏囊病病例的传染性法氏囊病病毒 ( infec-tious bursal disease virus,IBDV) HN0 2 6株的 VP2基因进行了克隆与序列分析 ,并与相应毒株的 VP2高变区核苷酸及氨基酸序列进行了比较研究。结果表明 ,HN0 2 6株的核苷酸和氨基酸序列与变异株 Var- A的同源性最高 ,分别达97.3%和 97.6 % ;其次为超强毒株 UK6 6 1 ,分别为 95 .7%和 95 .2 % ;而和弱毒株 PBG98的同源率仅有 92 .8%和90 .3%。其中 ,在第一、二亲水区 ,HN0 2 6株均有 1个氨基酸发生了变化 ,即第 2 2 2位转变为 E、第 31 8位转变为 D。更重要的是 ,其 2 4 9位和 2 5 4位上的氨基酸分别为 K和 S,这些均为变异株的特性。另外 ,HN0 2 6株的七肽区保持SWSASGS不变 ,且第 2 79位和 2 84位氨基酸分别为 D和 A,又完全具备强毒株的特性。因此 ,初步确定所分离的HN0 2 6为有较强致病力的变异株 IBDV。