诺如病毒P-partical-GnIH抗原制备及抗原性初步检测

为探索调控家鹅繁殖性能的技术,本研究通过设计合成鹅促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH）序列片段,酶切后连接到诺如病毒（Nov）P基因重组pEGX-4T-1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌重组质粒,并通过测序和酶切进行验证。将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE及Western blotting检测重组蛋白表达。进一步在不同IPTG浓度及诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件,在最佳条件下的诱导菌液经过离心收集菌体,并超声波破碎离心后对重组蛋白可溶性进行分析。利用xTractor Buffer和Glutathione Superflow树脂对重组蛋白进行纯化,并使用自制的抗GnIH鹅血清及抗鹅二抗通过Western blotting检测重组蛋白。结果显示,重组质粒Nov P-partical-GnIH经双酶切鉴定获得大小约为96 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功。诱导表达的重组蛋白分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导2 h条件下表达量最高;菌体超声破碎后经SDS-PAGE检测,重组蛋白主要表达在沉淀中。重组蛋白与GST单抗及抗GnIH阳性血清均能反应,表明此重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。本研究通过对Nov P-partical-GnIH蛋白原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的重组蛋白,将有助于进一步建立家鹅的繁殖性能免疫调控方法,为提高繁殖性能及调控繁殖机制的研究奠定基础。     

2016年我国部分地区屠宰场猪流感血清学调查

目前,全球范围内流行的猪流感病毒亚型主要有3种:H1N1、H3N2、H1N2,此外,H1N7、H4N6、H9N2、H5N1、H3N3、H3N1和H2N3等亚型病毒也在猪体内分离到,但没有证据显示这些病毒在猪体内建立稳定的谱系。为了解我国屠宰场猪群中流感病毒的感染与流行情况,选取2009年甲型H1N1(pdm/09)、欧洲类禽H1N1(EA H1)、经典H1N1(经典H1)、新型三源重排H1N1(ReH1)、H3N2(H3)、H9N2(H9)流感病毒制备的血凝抑制(HI)标准抗原作为检测抗原,对全国25个屠宰场的猪血清进行了HI抗体的检测。结果显示,2016年我国屠宰场样品中,pdm/09、EA H1、经典H1、Re H1、H3、H9抗体阳性率分别为23.18%、28.12%、19.34%、24.97%、7%、7.41%;在所监测地区中,华南地区屠宰场猪流感血清平均抗体阳性率最高。结果表明,2016年我国屠宰场猪群中H1N1亚型猪流感病毒感染比较普遍,H3N2和H9N2亚型猪流感病毒抗体阳性率较低。     

猪cripto促进C2C12细胞分化

应用分子生物学方法、荧光显微镜和实时荧光定量PCR技术,对cripto基因进行克隆、真核表达载体的构建,探讨cripto对C2C12细胞生长增殖的影响和肌细胞分化相关基因MyoD、MyoG、P21、MHC的表达变化。结果显示,phiC31-cripto真核表达载体构建成功,荧光显微镜下可见转染phiC31载体和cripto基因共转染的C2C12细胞表达强烈的绿色荧光,且对细胞的生长增殖无显著性影响;Q-PCR检测MyoD、MyoG、P21、MHC结果证实,猪cripto可以促进细胞分化因子MyoD、MyoG、P21、MHC的表达。结果表明,本试验成功地构建了C2C12-phiC31-cripto过表达细胞系,Q-PCR结果分析发现cripto基因可以促进肌肉分化,为进一步探索cripto基因在肌肉分化中的分子机制提供理论依据。     

紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因筛选和分析

为获得紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因,将0.5%紫茎泽兰提取液作用于鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化过程,采用抑制消减杂交技术（SSH）筛选处理后卵囊的差异表达基因,通过GO和COG功能预测分析,并采用实时荧光定量PCR验证差异表达的基因。结果显示,采用SSH成功构建了紫茎泽兰处理前后鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的cDNA消减文库,获得86条ESTs序列,经拼接和聚类后得到31条独立基因（Unigenes）,其中有23个基因有功能注释,8个基因没有功能注释,另外有4个基因没有同源性匹配。为进一步验证文库的特异性,从中随机选取3个差异表达基因,运用实时荧光定量PCR技术验证表面抗原13、3-羟酰辅酶A脱氢酶和细胞色素P450基因在紫茎泽兰处理前后的表达差异,结果显示,3个基因在经紫茎泽兰处理的鸡球虫孢子化卵囊中的表达量明显低于未处理组,说明紫茎泽兰对柔嫩艾美耳球虫卵囊具有一定的活性抑制作用。本试验获取了紫茎泽兰作用柔嫩艾美耳球虫卵囊的主要调控基因,为将紫茎泽兰研发成环境杀虫剂奠定了良好的理论基础,也可为球虫致弱疫苗或基因缺失疫苗的靶标筛选研究提供参考。     

浅谈影响血凝和血凝抑制试验结果的因素

血凝和血凝抑制试验是兽医实验室常用的检测方法之一。该方法具有经济、快速、可靠等多种优点，但在实际操作过程中常受多种因素影响，容易造成偏差，甚至误判。本文以禽流感的血凝和血凝抑制试验操作为例，将影响试验结果的几个主要因素进行汇总、分析，以供大家参考。     

浅析影响变电站电能计量的问题及对策

电能计量主要是指在电网经营中通过相应的计量装置计算出电能的数量。根据计量结果可制定电能生产计划,同时也能为经济核算、计收电量提供有力依据。可以说,电能计量是电力生产、销售以及电网安全运行的重要环节。经过几年的综自改造,开封供电公司将所运行维护的变电站全部改造为综自化变电站,在改造过程中,一、二次设备及电压、电流回路的二次电缆按照新的设计要求都进行了更换,但由于种种原因,部分变电站内电能计量仍存在不少误差,本文通过变电站内种种表现分析影响变电站电能计量的问题,并根据多年来的工作经验提出相应对策,供大家探讨。     

紫色马铃薯茎尖脱毒与组培快繁技术

紫色马铃薯是茄科1年生作物,原产南美洲,近年引进我国。紫色薯肉的马铃薯含有大量的花青素,研究表明,花青素具有抗氧化、抗突变、预防心脑血管疾病、抑制肿瘤细胞发生等多种生理功能,发展前景广阔。紫色马铃薯是一种无性繁殖作物,在栽培过程中易受病毒浸染而种性退化,     

四种食用菌凝集素的筛选及糖抑制反应的研究

主要研究了四种食用菌凝集素粗提液的血凝活性的定性、定量测定和糖抑制反应,结果表明:金针菇的血凝活力最强,效价为25,平菇和海鲜菇的效价为23,秀珍菇表现出不具有血凝活力.金针菇凝集素能被D-果糖所抑制,海鲜菇能被乳糖抑制,表明它们可形成相应的糖结合蛋白.试验结果将为进一步研究凝集素分离纯化、理化性质、基因克隆和生物功能奠定一定的理论基础.     

猪细小病毒病的诊断与防治

猪细小病毒病严重危害养猪业的发展，给养猪业带来不可估量的经济损失。因此，要根据该病的流行病学，典型症状，剖检变化，实验室检验和诊断，科学制定综合性防控措施，提高养猪业的经济效益。1流行病学 不同年龄、性别的猪只均可感染，病猪和带毒猪是主要的传染源。本病主要传播途径是消化道、交配感染、人工授精感染和出生前经胎盘感染，呼吸道也可传播。急性感染猪的排泄物和分泌物中及感染母猪所产的死胎、活胎、仔猪和子宫分泌物中均含有大量病毒，有些具有免疫耐性的仔猪可终生带毒。被感染的公猪，其精细胞、精索、附睾和副性腺均含有病毒。该病常见于初生母猪，一般呈地方性流行性或散发性。母猪妊娠早期感染时，其胚胎、胚胎猪死亡率可高达80%-100%。猪在感染细小病毒1-6天后，即可发病。1-2星期后病毒随粪便排出体外，污染环境。7-9天后可测出血凝抑制抗体，21天内抗体效价可高达1∶15000，且能持续数年。多数初产母猪感染后可获得坚强的免疫力，甚至可持续终生。     

鸡新城疫及其在某鸡场鸡群发病样本的实验室检查

新城疫是一种高度接触性传染病，鸡、火鸡、野鸡易感，经呼吸道和消化道传播，病原为新城疫病毒，以发病急、呼吸困难、头冠紫黑、下痢等为主要症状，分为最急性、急性或慢性三型，病理变化为腺胃和肌胃交界处出血，扁桃体肿大、溃汤等为主，通过血凝试验、血凝抑制试验等进行诊断，可通过抓好饲养管理、防疫、加强新城疫抗体的监测进行防制。2013年2月10日沛县魏庙镇某鸡场饲养的罗曼蛋鸡疑似发生新城疫，通过采集部分病死鸡的气管、肺、脑等组织，用含特定抗生素的磷酸盐缓冲液（PBS）制成10%的组织悬液，离心取上清液接种5枚10日龄SPF鸡胚，接种胚于接种后48~72小时之间死亡，胚体全身出血。收获尿囊液，通过血凝试验与血凝抑制试验进行病毒鉴定，确定分离到的病毒为新城疫病毒，根据以上结果确诊该鸡群发生新城疫。