跨膜蛋白39A基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及评价

为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。结果显示:标准品模板在3.937×10⁸~3.937×10³拷贝·μL^-1范围内呈良好的线性关系,R²可达0.999;该方法特异性较好,检测灵敏度可达3.937×10² 拷贝·μL^-1;组内和组间变异系数均小于1%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法能够检测出不同细胞中的TMEM39A含量,具有种属通用性。该研究方法的建立为临床上提供了一种TMEM39A的快速检测和定量分析技术。     

高粱根质膜的纯化和膜蛋白的提取

利用高粱根作为实验材料,用不连续蔗糖密度梯度和Dextran T-500/PEG-3350两相法探讨了纯化质膜的过程,以及去垢剂对K+运输蛋白的增溶效率.结果表明,由6 mL 40%(W/W),4 mL 34%(W/W)和4 mL 22%(W/W)蔗糖组成的不连续蔗糖梯度,经80 000×g离心3 h后,在34%～40%界面处富含质膜.在质膜K+运输蛋白的增溶效果上,6.5 mmol/L CHAPS最为理想.     

斑点叉尾鮰病毒囊膜蛋白基因ORF6和ORF10的原核表达及抗体制备

为获得斑点叉尾鮰疱疹病毒ORF6和ORF10基因,设计特异性引物进行PCR扩增,成功构建pET-32a-ORF6和pET-32a-ORF10原核表达载体,经IPTG诱导后目的蛋白在大肠杆菌中成功表达并制备多抗,通过Western blot证明ORF10的抗体具有特异性,且ORF10为病毒的结构蛋白。     

锦鲤疱疹病毒流行病学及诊断防治技术研究进展

锦鲤疱疹病毒病是由锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)引起的一种传染性疾病,主要是引起各生长阶段鲤鱼、框镜鲤、锦鲤等鳃坏死及间质性肾炎,死亡率高达60%～100%,疫情难以控制,已引起各国的高度关注。1998年锦鲤疱疹病毒病首次在以色列暴发,并迅速扩展至世界各地。2002年首次证实该病已传至     

山羊抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与ELISA鉴定

猪屠宰后,迅速采取其皮下脂肪在３７℃下的膜提取液中的匀浆,于３７℃温箱中孵育３０ｍｉｎ后,用差速离心法和高速离心法提取脂肪细胞膜蛋白,并作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析脂肪细胞膜蛋白与其它组织细胞膜蛋白 差异。从电泳图上看出,脂肪细胞有很多特异膜蛋白,也有一些与其它组织细胞膜蛋白相似的条带。膜蛋白与佐剂充分乳化后主动免疫３只山羊,免疫后７０ｄ取因清,用ＥＬＩＳＡ检测抗体效价为１：６４００。同样,用ＥＬＩＳＡ测定抗体与其它组织细胞膜的交叉反应,结果显示：抗猪脂肪细胞膜抗体与其它组织细胞膜有交叉反应,但反应性不高。     

鸡传染性支气管炎病毒HH06株膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能研究

文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒（IBV）HH06株M全长基因,经抗原性和亲水性分析,将M部分序列成功亚克隆于pET-30a（+）和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E. coli Rosetta （DE3）感受态细胞,诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白能够与IBV参考阳性血清反应。以纯化重组M蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1??218;Western blot结果证实,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验表明,抗M蛋白多克隆抗体可检测到PVAX-M1转染BHK-21细胞表达的M蛋白,与IBV HH06毒株具有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对IBV Beaudette株的抑制率可达到25.9%。为IBV检测及M蛋白功能的研究奠定基础。     

日粮中添加脂肪细胞膜蛋白抗体对猪脂肪沉积的影响

将160头体质量27 kg左右的杜×(长×梅)三元杂交商品猪随机分成试验组和对照组,每组设4个重复,每个重复20头,公母各半。在试验组基础日粮中添加75 mg.kg-1脂肪细胞膜蛋白抗体(简称OAAb),饲喂104 d后,从每组选出体质量相近的12头猪(公母各半)屠宰,记录内脏器官和脂肪组织质量,同时采集血样。结果显示:试验组平均日增质量、饲料报酬分别提高13.03%(P<0.01)和7.49%;试验组背膘厚、肾周脂肪指数、肠系膜脂肪指数和皮下脂肪指数分别下降24.14%(P<0.01)、27.27%(P<0.05)、20.42%(P<0.01)和29.11%(P<0.01),而肌内脂肪含量则不受影响;血清游离脂肪酸浓度在处理后明显升高(P<0.01),血清葡萄糖和甘油三酯浓度无明显差异;脾脏质量显著增加(P<0.05),但不影响肝脏和肾脏质量。提示:口服OAAb可抑制猪的脂肪沉积,改善猪的胴体品质。     

Generation and Identification of Monoclonal Antibody Against Porcine Adipocyte Plasma Membrane Proteins

Production of monoclonal antibody against porcine adipocyte plasma membrane proteins to explore a new way of controlling body fat deposition and improving carcass quality is discussed in this article. Membrane proteins of pig adipocyte plasma membrane proteins were extracted with the help of sucrose density gradient centrifugation, and two kinds of proteins were obtained. The monoclonal antibody （designated 3B2 and 3F3） of IgG1 and IgG2b subclass against adipocyte membrane proteins were produced by immunization, with adipocyte membrane proteins as an antigen, and its titer was 1：105 detected by enzyme-linked immunoadsorbent assay （ELISA）. The cell strains were identified by analyzing the number of chromosomes, the heat stability, the acid and alkali, the types and subtypes of immnoglobulin, and its peculiarities and affinities. Through identification, the chromosome number of hybridoma cell strains was from 80 to 100 and the strains formed good hybridomas colonies. The strains＇ affinity constants were 4.63 × 10^9 and 3.75 × 10^9 （mol L^-1）-1, respectively. At the same time, the McAb secreted was stable to environmental factors, such as, temperature, acid, alkali and so on. The monoclonal antibodies had been obtained and their specificity to porcine adipocyte plasma membrane proteins had been identified.     

锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白ORF59的克隆、分析及其主要B细胞表位区的原核表达

从感染锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）的锦鲤（Cyprinus carpiokoi）肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHVORF59基因。该基因全长411bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3kDa,等电点（PI）6.91,有12个潜在的O糖基化位点。此研究克隆的KHVORF59基因第130位碱基由G突变为A,使其编码的第44位氨基酸由Ala突变为Thr。采用DNAStar程序,在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上,预测了KHVORF59蛋白主要B细胞表位,并将其区段的编码序列与KHVORF59完整编码序列分别克隆入原核表达载体pET-32a（＋）,构建重组质粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,转入大肠杆菌Rosetta菌株,IPTG诱导表达。SDS-PAGE及WesternBlot分析显示,pET32a-ORF59S可以高效表达,表达的截短KHVORF59蛋白主要以可溶性形式存在,采用HisBindResin填料,层析纯化了该截短蛋白。     

消化性溃疡出血患因浆GMP—140及vWF水平的变化

了解消化性溃疡出血患因小板活性及血管内皮细胞功能的变化。方法：采用酶联免疫吸附及抗体夹心法测定消化性溃疡出血患者血浆α－颗粒膜蛋白，血管性假血友病因子并与正常对照组作出比较。结果消化性溃疡出血组患者ＧＭＰ－１４０及ｖＦＷ均明显高于正常对照组。