生产优质家禽灭活疫苗的关键环切

我国是世界养禽大国之一，由于目前家禽饲养者结构复杂、管理技术水平参差不齐，散养和半集约化鸡群较多，且设备落后，导致禽病越来越多且日趋复杂，死亡率较高，每年因疾病造成的直接及间接经济损失上百亿元。因此，如何预防控制家禽传染病是决定养禽成败与否的核心和关键。控制疾病，除严格执行并加强生物安全措施外，建立健全整个社会的防御体系是保障禽类安全的必要条件。就养鸡场而言，建立和实施合理的免疫程序是预防疾病所必需的辅助手段。然而应用何种疫苗更为有效也是人们争论的焦点。近年来，随着养禽者在实践中的认识，灭活疫苗的应用越来越受重视，使用也越来越广泛。     

密花香薷挥发油成分的分析研究

采用水蒸气蒸馏法和气相色谱-质谱-计算机联用法对密花香薷的挥发性成分进行了分析和鉴定.分离出93个峰,确认了其中的84种化合物,其含量占全油的88.34%.主要化学成分为大根香叶烯(18.83%);D-柠檬烯(11.17%);2,5,5-三四基-1,3,6-庚三烯(6.30%);6-亚甲基-双环[3,1,0]己烷(5.90%);氧化石竹烯(3.94%);石竹烯(3.36%);4-碳-3,5-二甲基环己-1-烯(2.88%);α-3-环己烯-1-醇(2.06%).     

国内猪群中环曲病毒的感染状况

笔者对7篇2013～2017年间国内猪群中环曲病毒(PToV)调查文献汇总发现:(1)被检猪群只局限于四川、浙江、上海及周边,其中自四川猪群中的采样频次和样品数较多。(2)核酸检测样品中PToV的阳性率区间为1.69%～37.96%、平均阳性率为26.6%(436/1639)。(3)样品多采自腹泻猪群,占全部样品的90.24%(1479/1639),但采自腹泻仔猪群的样品数(11.47%,188/1639)偏少。由此推测期间国内猪群中PToV的总体感染率或低于26.6%。(4)尚不能从时间为序的样品阳性率中预测出猪群中PToV的流行趋势。     

猪瘟病毒NASBA-RT-LAMP快速检测方法的建立

本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。该方法的建立为猪瘟病毒的快速诊断提供了新思路。     

罗斯河病毒RT-LAMP检测方法的建立

根据Gen Bank中收录的罗斯河病毒(RRV)基因序列,以其保守的E2基因为靶序列,设计并筛选出一套特异性LAMP引物;通过优化反应条件,最终建立了RRV RT-LAMP检测方法,并对其灵敏度、特异性进行了验证。结果显示:本方法对RNA样本的最低检测限可达10拷贝/25μL,而荧光RT-PCR方法和常规RT-PCR方法的灵敏度分别为10拷贝/25μL、100拷贝/25μL;其特异性良好,不与同属或相似病毒发生交叉反应。结果表明,本方法灵敏、特异、快速、便捷,可应用于我国虫媒病高发区的RRV筛查预警。     

十足目虹彩病毒(DIV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1, DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物,建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测方法,并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估。结果显示,此方法最适反应温度为64.4℃,优化后的25 μl反应体系中包含2.5 μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart® DNA聚合酶、0.8 μmol/L EvaGreen®和4.4 μl ddH2O。该方法检测灵敏度下限为3.54×102拷贝/反应;与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应;具有较好的重复性和稳定性。以GeneFinder®替换EvaGreen®并将其预置于反应管内,结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测。本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点,为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择,有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控。     

穴施液体施肥装置施肥机理的试验研究

利用自制的液体施肥装置试验台,对影响喷针流量的因素进行了室内试验,通过三因素二次回归旋转组合试验设计,研究分析了电机转速、曲柄转速和喷孔直径对喷针流量影响的规律,结果表明电机转速取高水平、曲柄转速取低水平、喷孔直径取高水平时,有利于提高喷针流量,同时预测了喷针流量的回归方程。     

26种圈养珍稀鸟类性别的快速分子生物学鉴定

世界上过半数的鸟类为单态性,雌雄难以分辨,对人工饲养繁育造成困难,快速准确地性别鉴定对鸟类繁育研究尤为重要。本文根据已有研究,采用无侵入采样的方式,应用3对引物(2550F/2718R、P2/P8和K7/W1)分别对26种258只鸟类的羽毛样品进行了性别特异性PCR扩增,其中部分产物进一步酶切,经琼脂糖凝胶电泳。结果发现:白鹈鹕雄性为1条321 bp条带,雌性多1条234 bp条带;斑嘴环企鹅雄性为302 bp和50～100 bp条带,雌性多1条367 bp条带;鹤鸵雄性样品为1条约350 bp条带,雌性多1条约150 bp条带。结果表明,羽根作为样品,未经DNA提取直接进行PCR检测,可有效地进行鸟类性别鉴定。     

布氏杆菌S2疫苗株特有基因trbJ的LAMP检测方法建立

为了建立一种快速、准确地检测布氏杆菌S2疫苗株的环介导等温扩增(LAMP)方法,将S2基因组与牛种、羊种野毒株基因组比较,筛选出S2疫苗特有基因trbJ作为检测靶标序列,设计LAMP特异性引物,在对该反应组分、反应条件进行单因素优化的同时,还对该引物特异性、灵敏度、重复性进行测试。结果显示,该方法在65℃等温条件下扩增,反应结束后加入SYBR Green I荧光染料,即可通过肉眼直接观察结果。该方法灵敏性、特异性、重复性良好,能准确鉴别出S2疫苗,与对照菌株无交叉反应。与普通PCR技术相比,LAMP检测灵敏度高100倍,最低可检测出6.89 pg/μL的DNA模板,并且不同批次试剂间的重复性良好。本试验成功建立了一种快速、准确、可视化地检测S2疫苗的LAMP方法。     

喷雾压力、药液流量和工作风速对生防微生物在不同作物上定殖的影响

研究了施药机具喷雾压力、药液流量和工作风速对几种生防微生物在不同作物叶片上定殖的影响.试验结果表明:担架式机动喷雾机、机动弥雾喷粉机和背负式机动喷雾器对几种生防微生物(枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、白僵菌和生物除草剂真菌SF-193)的活性均无不利影响.其中担架式机动喷雾机工作压力超过2.5 MPa以上有利于枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌菌落的定殖;机动弥雾喷粉机同一风速档、不同流量档的处理中,流量档4档(2.00 L/m)有利于枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌菌落的定殖.枯草芽孢杆菌在水稻叶片上定殖数量与水稻纹枯病的防效呈正相关的关系.风速档的改变对白僵菌菌落定殖和生防真菌SF-193对空心莲子草的防治效果没有影响.