R－prime质粒pMN53在不同根瘤菌中的稳定性

ｐＭＮ５３是以ｐＭＮ２为载体克隆有菜豆根瘤菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｌｅｇｕｍｉｌｏｓａｒｕｍｂｖ．ｐｈａｓｅｏｌｉ）共生基因的Ｒ－ｐｒｉｍｅ质粒，将ｐＭＮ５３接合转移到快生型大豆根瘤菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｆｒｅｄｉｉ）Ｂ５２，慢生型大豆根瘤菌（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ）２２１０以及紫云英根瘤菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｈｕａｋｕｉｉ）７６５３Ｒ后，分别考察了ｐＭＮ５３在３种转移接合子中的稳定性。结果表明由ｐＭＮ５３携带的卡那霉素抗性（Ｋｍｒ）在３种供试菌株中都能稳定传代，但电泳分析都只能检测到载体质粒ｐＭＮ２，载体上所携带的外源基因脱落。用Ｔｎ５为探针进行的斑点杂交，结果证明转移接合子２２１０Ｐ仍带有转座子Ｔｎ５。     

食品动物源沙门菌oqxAB基因的检测及水平传播机制研究

为了调查食品动物源沙门菌Salmonella oqxAB耐药基因的流行情况和水平传播机制,采用二倍琼脂稀释法测定临床分离的31株沙门菌对常用抗菌药物的敏感性,PCR方法特异扩增耐药基因oqxAB,并对扩增产物克隆测序.通过接合转移试验验证oqxAB基因的水平传播.试验结果表明,31株沙门菌对氨苄霉素的耐药率最高,达64...     

鸡志贺氏菌β-内酰胺酶的测定及其与耐药质粒的关系

通过对鸡志贺氏菌β-内酰胺酶及ESBLs的测定、质粒提取、细菌转化及质粒结合转移等试验,分析其耐药性与其质粒之间的关系,探讨耐药质粒在细菌间的传递方式.结果表明,质粒转化后的转化子对β-内酰胺类抗生素全部耐药,对氨基糖苷类、氟诺酮类有一定程度的敏感;而质粒接合传递体的耐药谱与质粒转化子一致.耐药菌株的质粒可编码β-内酰胺酶,且耐药质粒可通过结合转移方式传递至感受态大肠杆菌.     

羽毛降解杆状链霉菌S-28遗传转化系统的建立与优化

【目的】建立羽毛降解杆状链霉菌(Streptomyces bacillaris)S-28的遗传转化系统,并对其进行优化,为该菌株的遗传改造奠定基础。【方法】以大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1/pSET152为供体,羽毛降解杆状链霉菌S-28孢子为受体进行接合转移试验,并对影响接合效率的培养基种类、MgCl_2浓度、热激温度、预萌发时间、供受体比例和接合转移时间等要素进行优化。【结果】确定筛选羽毛降解杆状链霉菌S-28菌株接合转化子的抗生素为安普霉素≥10μg/mL或卡那霉素≥20μg/mL;成功将pSET152转入到杆状链霉菌S-28中。优化的S-28菌株接合转移条件为:以MS为接合转移最适培养基,MgCl_2浓度为10mmol/L,孢子萌发条件为40℃热激10min且不进行预萌发处理,供受体比例为10∶1,接合转移时间18~20h,此条件下接合转化效率最高达到10-4。【结论】建立并优化了羽毛降解杆状链霉菌S-28的遗传转化系统,接合转化效率最高可达到10~(-4)。     

鸡源性沙门氏菌耐药基因检测与耐药相关性分析

为研究沙门氏菌耐药基因与其耐药性之间的关系,本研究以K-B纸片法对临床分离的29株鸡源性沙门氏菌进行10种抗菌药物敏感性测定,应用PCR技术进行这些抗菌药物相关耐药基因检测.并通过质粒接合试验证明了耐药性及耐药基因的转移.结果显示:29株分离株对氨苄西林耐药率为31.0％,对头孢唑啉耐药率为10.3％,对四环素耐药率为44.8％,对复合磺胺耐药率为41.4％,对氯霉素耐药率为3.4％,对环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星的耐药率均为37.9％,但对庆大霉素和卡那霉素均敏感.本实验共检测到8种耐药基因,其中blatem-1阳性率为31.0％,tetA和tetB阳性率为44.8％,sull和sul2阳性率为41.3％,aadAl阳性率为3.4％,dfrA1阳性率为10.3％,qnr阳性率为37.9％,而tetG、blaCMY-2和catI均未检出.此外,通过与非耐药菌接合后绝大部分接合子均获得了供体菌质粒编码的相应抗性表型,耐药基因在接合过程也发生了转移,赋予被接合细菌新的耐药性.以上结果表明沙门氏菌的耐药性与其相关耐药基因的检出率基本一致,而且耐药性通过质粒进行转移.     

鸡源CTX-M基因型ESBL大肠杆菌耐药基因的转移性检测分析

为探讨超广谱β-内酰胺酶鸡源性大肠杆菌blaCTX-M基因的可转移性,提醒畜禽养殖滥用抗生素的危害。该研究选取11株blaCTX-M基因型ESBL鸡大肠杆菌分离株（不携带其他基因型）与受体菌（利福平抗性的DH5α）接合转导,对双抗板（终浓度利福平200μg/mL和头孢唑林50μg/mL的胰蛋白酶大豆琼脂培养基）上筛选的接合转导子进行ESBL确认以及PCR检测耐药基因验证。结果表明,得到的11株阳性接合子均呈现ESBL表型;扩增结果显示,11株转移接合子的bla基因型均为CTX-M型,转移率为100%,用TEM和SHV引物扩增结果均为阴性。可见,blaCTX-M基因借助接合性质粒实现耐药基因的水平转移,通过菌株接合方式实现耐药基因的迁移扩散。     

1株产NDM-9和MCR-1的鸡源大肠杆菌的分子及生物学特征

为探究质粒介导耐药性的传播特征，本试验以1株分离自山东某肉鸡养殖场的产新德里金属β-内酰胺酶NDM-9和磷酸乙醇胺转移酶MCR-1的大肠杆菌(25R)为研究对象，通过全基因组序列分析、质粒接合转移试验、抗菌药物敏感性试验、大蜡螟毒性感染试验、质粒稳定性试验和生长动力学方法研究其质粒分子和生物学特征。结果显示，携带bla_NDM-9和mcr-1的质粒可各自亦可共同转移至其他菌株，并且携带上述耐药基因的质粒对宿主菌造成的适应性代价和毒性较低，更有利于耐药基因的传播。本试验为更深入了解质粒介导的细菌耐药性传播机制提供理论依据。     

实木家具斜角接合结构的可拆装设计与评估北大核心

以现代实木家具中常见的45°斜角接合结构为研究对象,以实现斜角接合结构可拆装,提高其接合强度为目的,分析了现有斜角接合结构的特征与不足,提出一种通过五金连接件与分体榫相结合的45°斜角可拆装改良方案;采用有限元分析方法,从应力分布角度对现有节点和改良节点进行对比分析;通过力学试验方法测试了两种结构的抗弯力学性能。结果表明:改良方案的极限承载力平均值比现有方案高18.7%,通过有限元分析方法获得的节点应力云图与试验中试件的破坏形式具有较好的一致性。改良方案实现了斜角接合节点的可拆装,提高了实木家具斜角接合节点的强度,为后续进一步开发实木家具隐藏式五金连接件及榫卯外观下的节点可拆装设计提供了依据及实现方法。     

犬源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及对头孢菌素类药物的耐药性分析

为了探究犬源肺炎克雷伯菌对头孢菌素类药物的耐药情况，试验对从海南省12个市县公园中采集的357份新鲜犬粪便拭子，采用分离培养初筛、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、耐药基因检测及接合转移试验等方法对细菌特性进行研究。结果表明：共鉴定得到9株耐药性肺炎克雷伯菌，其中8株呈现多重耐药性，对氨苄西林、复方新诺明和头孢曲松的耐药率为88.9%,对庆大霉素、环丙沙星、头孢吡肟、左氧氟沙星、阿米卡星也呈不同程度的耐药(22.2%～55.6%);耐药基因bla_CTX-M、bla_TEM、bla_SHV、bla_CTX-M-14、bla_CTX-M-15的检出率分别为100%、66.7%、55.6%、33.3%、44.4%,未检出bla_CTX-M-2、bla_CTX-M-64和bla_CTX-M-123基因；分离菌株能通过接合途径发生耐药基因的水平传递。说明排泄于公园环境的犬粪便含有耐头孢菌素类药物的肺炎克雷伯菌，绝大多数菌...