黏菌素促进mcr-1阳性IncI2质粒在大肠杆菌间的接合转移

【背景】黏菌素是人医临床治疗多重耐药革兰阴性菌感染的“最后一道防线”药物,其同时作为饲料添加剂及治疗用药长期用于畜禽养殖业。2015年,我国研究人员首次报道了质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1,预示该道防线面临被攻破的风险。然而,杀菌浓度及亚抑菌浓度的黏菌素对mcr-1阳性质粒传播的影响仍未知。【目的】以流行最广的mcr-1阳性IncI2型质粒为研究对象,探究不同浓度黏菌素对该质粒接合转移频率的影响,为黏菌素的科学使用提供理论依据。【方法】使用肉汤法进行了不同浓度黏菌素（0.02-4 μg·mL^-1）作用下携带mcr-1的IncI2型质粒的接合转移试验。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及构建的公式计算不同时间点（1-24 h）的接合转移频率,并分析不同浓度黏菌素对IncI2质粒接合转移频率的影响。使用PI染料、活性氧（ROS）检测试剂盒测定不同浓度黏菌素下供体菌和受体菌的细胞膜透过性和ROS产生量。选取了对照组与低中高浓度3个处理组（0.02、1、4 μg·mL^-1）进行了转录组测序,使用Deseq2软件进行基因差异表达分析。采用Prism v8.2.0软件对不同组间接合转移频率、细胞膜透过性及ROS产生量的差异进行统计学分析。【结果】结合本研究建立的接合转移频率计算公式表明黏菌素浓度为4 μg·mL^-1时可在不同时间点提高mcr-1阳性IncI2质粒3-10倍的接合转移频率,而其他浓度则无显著差异。转录组结果显示,与对照组相比,低中高浓度黏菌素均可显著提高IncI2质粒上IV型分泌系统相关基因的表达,其中包括virB1、virB2、virB5以及traC。此外,黏菌素增加了I型菌毛合成基因fim的转录水平。PI染色结果显示当黏菌素浓度为2和4 μg·mL^-1时,可增强供体菌和受体菌的细胞膜透过性,且转录组结果也显示膜相关基因（ompAX、bamDE、lolB、yiaD、csgEF）的转录水平均出现显著上调。但是黏菌素作用后ROS产生量及相关基因的转录水平无显著提高。【结论】揭示了黏菌素可通过增加细菌IV型分泌系统活性、细胞膜透过性和菌毛的生成从而提高mcr-1阳性IncI2质粒在大肠杆菌间的接合转移频率。研究结果提示,杀菌浓度无法完全杀死mcr-1阳性大肠杆菌的同时,还能增加质粒传播速度。因此,畜禽养殖业中黏菌素的治疗使用可能维持mcr-1阳性质粒的存在及传播,此外鉴于黏菌素已批准用于人医临床,该现象有可能引起临床黏菌素治疗mcr-1阳性病原菌的失败。     

弧菌基因组中整合性接合元件 （ICEs）的预测分析

整合性接合元件(ICEs)是一种广泛存在于细菌中可以自主移动的遗传元件。ICEs通过水平移动整合到弧菌的染色体上,所携带的新基因有助于宿主在特定生存环境下获得生长优势。为考察ICEs在弧菌生长中发挥的作用,采用Prf C位点与核心基因相关的特征蛋白,进行了26株弧菌SXT/R391ICEs的预测。结果表明,在全测序的26株弧菌中,只有3株霍乱弧菌的较大染色体上存在SXT/R391ICEs,对这3株霍乱弧菌上SXT/R391ICEs的抗性基因和热点区域进行比较分析,结果表明,3株霍乱弧菌的SXT/R391ICE的抗性基因和热点区域虽然都拥有类似的骨架结构,但从获取基因的得失情况可以判断,这3株菌SXT/R391ICE的进化优先关系。     

东方红—754/804/904型拖拉机变速器结构及故障分析(4)

鉴于拖拉机产品不断更新换代,产品结构性能也在不断创新,在使用者排除机械故障中难免出现准确判断故障成因的困难。这里,以市场上保有量比较大的东方红等品牌拖拉机为例,向您介绍拖拉机变速器的结构原理和故障性质、成因分析方法。     

离合器主要零件的修理

一、从动盘的检验与修理从动盘是离合器的摩擦元件,常见损伤是磨损、烧蚀、变质、开裂、油污、铆钉松开和钢片翘曲变形。由于离合器在分离特别是接合过程中必然产生滑转,因而磨损、烧蚀和变质是主要损伤形式。油污主要是因变速器第一轴回油螺塞回油能力降低使油从第一轴花键处漏出所致。从动盘钢片翘曲往往是由于变速器第一轴与曲轴中心线不同轴,使从动盘工作中产生周期性弯曲所致,这也是离合器从动盘加剧损坏的主要原因之一。     

梓木构件双圆榫接合性能优化研究

以梓木为基材,采用双圆榫接合形式,考察圆榫直径、配合量、圆榫插入深度对构件接合性能的影响。采用响应面法(RSM)建立二次回归模型,并对接合参数进行优化。结果表明:在圆榫直径为8mm、配合量为0.4mm、圆榫插入深度为20mm时,能够获得最优化接合效果,其极限破坏载荷值达1276.31N。     

糙木家具中的榫接合结构设计

糙木家具活泼婉转的形态特点以及多样的结构形式,决定了糙木家具的榫卯接合形式是非传统的精密接合。本文指出了糙木家具榫卯配合的三种形式,归纳了糙木家具方形截面构件与圆形截面构件榫接合的四种基本形式以及两种圆形构件间的榫接合形式,用以指导糙木家具榫结构设计,为相关厂家制作糙木产品提供技术支撑。     

单斜边网片接合与计算

在网具设计和施工中，使接合起来的网片斜边达到理想状态，必须掌握网片各种剪裁斜边的接合特点及计算方法。     

美国栎树上传播枯萎病的几种重要露尾甲

栎枯萎病(Ceratocystis fagacearum(Bretz)Hunt)是美国栎树上的一种毁灭性病害,该病害除了可通过根际接合传播外,还能通过媒介昆虫在地面进行传播,许多露尾甲(Nitidulidae)、小蠹虫(Scolytidae)、果蝇(Drosophilidae)、蕈蚊(Mycephiilidae)等昆虫均为其传播媒介.这些昆虫不仅携带病原,而且还能不断地传播病害,本文就栎枯萎病菌的病媒昆虫--露尾甲的有关资料进行了整理,供大家参考.     

blaCTX-M型鸡大肠杆菌中mcr-1的分子流行病学分析

检测了不同时期从河南省分离的162株blaCTX-M型鸡大肠杆菌对黏菌素的耐药性,进行了耐药基因blaCTX-M和mcr-1的质粒接合试验,并比较了各亚型的水平传播规律.结果表明:随着时间的推移,blaCTX-M型鸡大肠杆菌对黏菌素的耐药率由0％显著增加到42.2％;在头孢噻肟单药筛选下获得的21株接合子有5株同时携带...     

黄色链霉菌TRM45540遗传转化系统的构建

黄色链霉菌(Streptomyces luteus)TRM45540是分离自新疆罗布泊土壤的高产放线菌素D的链霉菌新物种,为了深入挖掘其基因功能和代谢活性,需要建立该菌株的遗传转化系统.本研究以整合型载体pSET152和自杀型载体pKC1139为出发质粒,ET12567(pUZ8002)为供体菌,TRM45540为受体...