籽鹅促卵泡激素α亚基基因的克隆、序列分析及其原核表达载体的构建

以雌性籽鹅脑垂体的总RNA为模板,利用特异性引物通过RT-PCR扩增获得长为363 bp的籽鹅促卵泡激素α亚基的cDNA片段,将扩增的促卵泡激素α亚基基因片段克隆至pMD18-T载体后进行测序。将测序结果与鸡、鹌鹑、火鸡、鼠、羊、牛等多种禽类和哺乳动物的该基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果表明,这些物种促卵泡激素α亚基基因序列具有较高的保守性,其中与鸡、鹌鹑、火鸡的核苷酸同源性最高,均为95.9%,推导的氨基酸序列与鸡、鹌鹑、火鸡的同源性最高,均为97.5%。为了对克隆的籽鹅促卵泡激素α亚基基因功能研究提供基础,将籽鹅促卵泡激素α亚基基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体。     

鸡奇异变形杆菌亚单位疫苗的研制及其生物学特性测定

采用超声波裂解和超速离心法提取鸡奇异变形杆菌中的外膜蛋白作为抗原,制备油乳剂型(Oil Emulsion OE)亚单位疫苗.该亚单位疫苗为油包水型(W/O),稳定性良好,安全可靠.对3周龄雏鸡用该亚单位疫苗肌注接种,6周龄攻毒.试验结果表明,接种800μgOMP/只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对奇异变形杆菌V3、V4株的攻击具有显著的免疫保护力.     

半滑舌鳎促性腺激素α亚基cDNA的克隆及组织表达特征

采用同源克隆和末端快速扩增（RACE）方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基（CGα）全长cDNA（GenBank序列登录号：JQ364953）.半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽.半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点.CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60％～70％,与鲤形目鱼类CGα同源性为55％～60％.实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGα mRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾脏、脾脏和肝脏间表达量差异不显著外,其他组织间表达量差异显著（P＜0.05）;CGα mRNA在垂体组织中大量表达,其次是鳃、肾脏、肌肉、卵巢和脑组织,而在心脏、头肾、肝和脾等组织中表达量很低.本研究为进一步探讨促性腺激素在半滑舌鳎繁殖生理中的作用机制奠定基础.     

Strain-specific vital rates in four Acartia tonsa cultures, I: Strain origin, genetic differentiation and egg survivorship

Successful development of planktonic copepods for use as live feed in marine aquaculture relies on optimization of environmental conditions for population growth and egg storage. This study examined strain-specific differences in egg survivorship during cold-storage-induced quiescence in four cultures of the widespread marine calanoid Acartia tonsa Dana, 1849. Experimental cultures were obtained from Øresund, Denmark (DIFRES), Kiel, Germany (KIEL), Turkey Point, Florida, USA (FL), and Mobile Bay, Alabama, USA (AL), and were shown to derive from three highly distinct mitochondrial clades. Eggs from Gulf of Mexico strains had low tolerance for cold storage, and showed very low hatching success after 10 days. In contrast, Baltic Sea strains produced eggs able to tolerate up to 150 days of cold storage, with the DIFRES strain showing the highest egg survivorship during the experiment. Eggs from the Kiel strain showed an increase in hatching over time, indicating the presence of dormant eggs. Parental rearing temperature was also found to affect egg survivorship during quiescence in the DIFRES strain, with lower hatching success observed among eggs produced at 25 °C than at 17 °C. The DIFRES strain is recommended as the optimal strain for use in aquaculture, and conditions for cold storage of eggs are discussed.     

基于线粒体CO I基因序列的棘头梅童鱼7个野生群体遗传结构分析

利用线粒体CO I序列为遗传标记分析了棘头梅童鱼(Collichthys lucidus Richardson)7个地理群体(江苏连云港、江苏大丰、上海崇明、浙江舟山、浙江温州、福建宁德和福建厦门)的遗传结构特征。在7个群体209个样本的线粒体CO I序列中共检测到44种单倍型。7个群体单倍型多样性为(0.416±0.112)~(0.720±0.076),核苷酸多样性为(0.001 10±0.000 35)~(0.004 44±0.001 64)。两个组群的AMOVA分析显示,南北两个组群分析组群间的变异为40.10%(P0.01),组群间群体间的为–0.15%(P0.05),群体内为60.05%(P0.05),这与基于单倍型构建的NJ树、基于群体间遗传距离构建的UPGMA树的结果均表明棘头梅童鱼群体具有明显的谱系结构,以温州为分界点,温州以北为北方类群,以南则为南方类群。两群体之间的基因流数据表明南方与北方类群的基因交流受阻,结合各方面资料,推测更新世的演化历史因素为棘头梅童鱼南北分支形成的主要原因,而自身的生活习性则是南、北类群内部无明显分化的原因。其结果可以为合理开发和利用棘头梅童鱼野生资源,以及建立和保护棘头梅童鱼种质资源提供必要的参考。     

猪传染性胸膜肺炎与猪肺疫二联亚单位疫苗的免疫效果评价

为了评价猪传染性胸膜肺炎与猪肺疫二联亚单位疫苗(由多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)质粒导入胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影制备)的免疫效果,于某规模化猪场选取30头无上述病原菌和抗体的4周龄(w)仔猪,随机分为安全评估组和试验组进行免疫,试验组包括APP组、OmpH组、APP+OmpH联苗组,分别于4、6 w肌肉注射2 mL/头相应疫苗,采取4、6、9 w外周血,用流式细胞术、ELISA、血常规、血生化试验分析疫苗免疫后,相关免疫因子、免疫细胞及免疫球蛋白的变化。结果显示:APP+OmpH组外周血中CD3⁺、CD8⁺细胞增加数量比APP、OmpH组显著增多(P<0.05);血清抗体结果显示,APP+OmpH组结果优于APP和OmpH组;APP+OmpH组的外周血白细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数在二免后增多,白蛋白、球蛋白亦明显增加,且APP+OmpH组增加数量多于APP和OmpH组。结论:APP+OmpH组能更好地刺激机体细胞免疫和体液免疫反应,进而发挥免疫保护效果。     

鼠疫疫苗研究进展

鼠疫具有高度传染性和致病性,早期的预防很重要.免疫接种是预防鼠疫的重要措施之一.传统的鼠疫疫苗包括灭活疫苗、减毒活疫苗.随着生物技术的发展,使得亚单位疫苗和核酸疫苗应运而生,并成为研究的热点.论文综述了当前鼠疫疫苗的应用现状和新型疫苗的开发研究概况.     

大肠杆菌志贺毒素stxB融合基因的构建及其高效表达

利用PCR方法，从肠出血性大肠杆菌O157：H7的基因组DNA中，分别扩增出Stx1B和Stx2B亚基的结构基因片段，然后再通过PCR将这2个片段连接起来，并定向克隆到表达质粒pET28a的Nco1和EcoR 1位点之间，构建了重组表达质粒pMB1。将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中，对重组菌株BL21(pMB1)用IPTG进行诱导表达，并对最佳诱导时间进行了探索。SDS-PAGE电泳检测结果表明。重组菌株表达出了16300的目的蛋白Stx2B-L-Stx1B；经薄层扫描分析表明，表达量约占菌体总蛋白的68．4％，且目的蛋白为包涵体表达，表达量约占细菌沉淀的84．6％。研究还表明，未用IPTG诱导的BL21(pMB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达。不同诱导时间的结果表明，在3～7h的诱导时间内，目的蛋白的表达量没有明显变化。     

小麦F1籽粒高分子量谷蛋白亚基的遗传表现

为给小麦品质育种提供参考依据,选用6个亲本,采用不完全双列杂交组配15个杂交组合以及2个反交组合,应用电泳分析及美国SYNGENE公司生产的凝胶成相系统,通过亚基分布高度和亚基自然体积,定量研究了杂种F1籽粒亚基的遗传表现.结果表明,在15个杂交组合中,有9个组合的F1籽粒表现为亚基的共显性,并且这9个组合的共显亚基均有倾母现象,具体表现为来自母本的亚基谱带浓深,来自父本的亚基谱带浅淡,并且正交组合的亚基分布高度和自然体积明显大于反交组合.例如小偃6号×安农91168正交组合14 15亚基的分布高度为21 537.164 11 184.908,自然体积为14 076 547.00 5 865 792.50,而其反交组合14 15亚基的分布高度为20 005.104 9 006.540,自然体积为9 343 796.00 2 183 145.00,前者明显高于后者.同时,发现了15个组合中有6个组合F1籽粒亚基出现缺失或表达沉默,缺失或沉默的亚基主要为2 12和5 10.     

普通小麦F1代籽粒高分子量谷蛋白亚基的遗传表现

为给小麦品质改良提供依据,采用SDS-PAGE方法,以来自国内外的6个小麦品种（系）为材料,分析了15个杂交组合F1代高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）的遗传表现。结果表明：①HMW-GS在F1代的遗传具有剂量效应,即部分正反交组合F1代籽粒中同一亚基带的颜色深浅不同,来自母本的亚基带比来自父本的亚基带颜色深,说明来自母本的亚基比来自父本的亚基含量高;②2个国内与国内品种间的杂交组合及2个国外与国外品种间的杂交组合,其F1代HMW-GS均表现为完全共显性,11个国内和国外品种间的杂交组合,有4个组合的F1代出现了HMW-GS的不完全表达,缺失率占11个组合总数的36％。