猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗联合免疫的临床评价

在非洲猪瘟成为常态化的背景下,疫苗的联合使用可有效优化、重构猪群的免疫程序,在保证防控重大疫病的前提下,减少猪群免疫负担和应激,降低免疫苗时感染非洲猪瘟的风险。为此,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗在实验室进行混合,测试了其物理性状,并在田间进行了安全性、有效性的临床研究。研究结果表明,2种疫苗按不同比例混合后呈剂型与占比较大的疫苗剂型相同,黏度、通针性均优于猪瘟E2亚单位疫苗,在2～8℃保存7天后,疫苗均一、稳定,未见分层,离心后无水相析出;采用间隔免疫、同步分点注射、同步混合注射的方式免疫试验猪均未引起免疫副反应,同步混合注射的免疫效果优于其他试验组,但各组间差异不显著(P>0.05),未见免疫干扰现象。本研究证实猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗可同步混合免疫,不仅安全有效,而且降低了猪群免疫负担和兽医免疫劳动强度,适合在临床中大面积推广应用。     

鸡新城疫病毒HN基因亚单位疫苗诱导免疫保护的实验研究

实验分别将应用Bac to Bac系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）蛋白的重组杆状病毒感染Sf-9昆虫细胞后28℃培养72h后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，-20℃冻融3次，用HA-HI实验和HN单抗中和试验测定表达产物的活性，将表达的重组蛋白作为亚单位疫苗免疫鸡，用间接ELISA和HI试验测定鸡体内抗体效价，免疫后第15d用国家标准强毒NDVF48E8攻毒，统计免疫保护率，结果表明，表达的NDVHN重组蛋白能够诱导鸡体产生抗NDV特异性IgG抗体和HI抗体，实验Ⅰ组（四平株）雏鸡保护率为65%，实验Ⅱ组（长春株）雏鸡保护率为100%。     

温度对黑龙江大豆主栽品种球蛋白的影响

利用SDS-PAGE方法分析6个温度梯度对黑龙江6个主栽大豆品种的7S和11S球蛋白含量的影响.结果表明:7S和11S球蛋白呈显著正相关的关系.7S和11S球蛋白含量在品种间和地点间差异均极显著.品种和温度互作7S和11S球蛋白含量均不显著.6个品种中绥农10、黑农35、东农42和东农46营养价值较高,为今后优质品质资源的筛选和优质新品种的选育提供了参考价值.     

Protection of chickens from Newcastle disease with a recombinant baculovirus subunit vaccine expressing the fusion and hemagglutinin-neuraminidase proteins

Recombinant baculoviruses containing the fusion (F) and hemagglutinin-neuraminidase (HN) glycoprotein gene of the viscerotropic velogenic (vv) Newcastle disease virus (NDV) isolate, Kr-005/00, and a lentogenic La Sota strain of the NDV were constructed in an attempt to develop an effective subunit vaccine to the recent epizootic vvNDV. The level of protection was determined by evaluating the clinical signs, mortality, and virus shedding from the oropharynx and cloaca of chickens after a challenge with vvNDV Kr-005/00. The recombinant ND F (rND F) and recombinant HN (rND HN) glycoproteins derived from the velogenic strain provided good protection against the clinical signs and mortality, showing a 0.00 PI value and 100% protection after a booster immunization. On the other hand, the combined rND F + HN glycoprotein derived from the velogenic strain induced complete protection (0.00 PI value and 100% protection) and significantly reduced the amount of virus shedding even after a single immunization. The rND F and rND HN glycoproteins derived from the velogenic strain had a slightly, but not significantly, greater protective effect than the lentogenic strain. These results suggest that the combined rND F + HN glycoprotein derived from vvNDV can be an ideal subunit marker vaccine candidate in chickens in a future ND eradication program.     

口蹄疫病毒受体羊源整联蛋白β6亚基配体结合域的原核表达、纯化及鉴定

利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域 (LBD)片段,分离纯化目的蛋白.以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pP_(RO)EX~(TM)HTb相连,构建原核表达质粒pP_(RO)/β6LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞 BL21 (DE3),IPTG诱导表达重组羊β6LBD融合蛋白.SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达并利用镍离子亲和树脂对其纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法分析鉴定表达产物.成功构建了pPRO/β6LBD原核表达载体,实现了羊FMDV受体整联蛋白亚基β6LBD在大肠杆菌中的高效表达, SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为33 kDa,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中.用本试验室保存的抗FMDV受体猪源整联蛋白β6亚基LBD的单克隆抗体进行ELISA 和Western blot检测,显示该单抗可与重组目的蛋白发生特异性反应,证明纯化后的蛋白与特异性抗体具有良好的特异性反应及抗原活性.为深入研究整联蛋白受体β6亚基在羊体内的分布及其在FMDV致病过程中的作用机制奠定了基础.     

微波对雏鸡的认知功能和NMDA受体亚基基因表达的影响

[目的]研究微波对鸡胚生长发育及雏鸡认知功能的影响。[方法j采用磁控管发射2450MHz的微波来模拟微波辐射源辐射种蛋，直到雏鸡孵出后，分别采用一次性被动回避学习和RT—PCR检测微波对雏鸡认知功能和NMDA受体NRl亚基与NR2亚基表达量的影响。f结果]微波辐射后，暴露组的回避率显著低于对照组，特别在辐射强度最高组的回避率极显著低于对照组。同时暴露组有2组雏鸡体重增加，其中一组的孵化时间有所增加。经RT—PCR分析，NR2亚基表达量在第lO天及15天时都上调，NRl亚基表达量只在第15天时才下调。[结论]微波对个体发育具有一定影响，通过使端脑中NMDA受体结构组成和功能发生改变，使自身的调节能力下降，从而对认知功能有一定损害。     

鱼用基因工程疫苗研究进展

疫苗是目前控制鱼类病害最经济有效的方式。免疫学及生物工程的迅速发展极大地促进了鱼类基因工程疫苗的研究。基因工程疫苗克服了传统疫苗的一些缺陷和不足，显示出巨大的应用前景，已成为国内外水产养殖业的研究热点，近年对鱼用基因工程疫苗的研究已取得较大进展，但鱼用基因工程疫苗在研究和应用过程中也面临着急需解决的若干问题。     

籽鹅促卵泡激素α亚基基因的克隆、序列分析及其原核表达载体的构建

以雌性籽鹅脑垂体的总RNA为模板,利用特异性引物通过RT-PCR扩增获得长为363 bp的籽鹅促卵泡激素α亚基的cDNA片段,将扩增的促卵泡激素α亚基基因片段克隆至pMD18-T载体后进行测序。将测序结果与鸡、鹌鹑、火鸡、鼠、羊、牛等多种禽类和哺乳动物的该基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果表明,这些物种促卵泡激素α亚基基因序列具有较高的保守性,其中与鸡、鹌鹑、火鸡的核苷酸同源性最高,均为95.9%,推导的氨基酸序列与鸡、鹌鹑、火鸡的同源性最高,均为97.5%。为了对克隆的籽鹅促卵泡激素α亚基基因功能研究提供基础,将籽鹅促卵泡激素α亚基基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体。     

鸡奇异变形杆菌亚单位疫苗的研制及其生物学特性测定

采用超声波裂解和超速离心法提取鸡奇异变形杆菌中的外膜蛋白作为抗原,制备油乳剂型(Oil Emulsion OE)亚单位疫苗.该亚单位疫苗为油包水型(W/O),稳定性良好,安全可靠.对3周龄雏鸡用该亚单位疫苗肌注接种,6周龄攻毒.试验结果表明,接种800μgOMP/只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对奇异变形杆菌V3、V4株的攻击具有显著的免疫保护力.