甘肃党参中花生茎线虫的鉴定与记述

【目的】明确甘肃省渭源县党参Codonopsis pilosula病样中的茎线虫种类。【方法】采用形态学特征、ITS-rDNA与28S-rDNA序列系统发育分析、特异性引物PCR扩增、PCR-ITS-RFLP相结合的方法进行种类鉴定。【结果】甘肃省党参茎线虫群体形态特征与花生茎线虫Ditylenchus arachis相似,形态测量均值虽存在差异,但是范围值基本一致;系统发育分析显示,该线虫与花生茎线虫聚为一支,特异性引物PCR扩增片段、PCR-ITS-RFLP图谱均与花生茎线虫相同。【结论】结合形态特征与分子特征分析,将甘肃党参茎线虫群体鉴定为花生茎线虫,表明该线虫已在甘肃发生分布。     

苹果黑星病菌的分子检测

【目的】建立苹果黑星病菌(Venturia inaequalis(Cooke)Wint)的分子检测方法,以提高检测精确度,缩短检测时间。【方法】根据苹果黑星病菌与其他苹果病原真菌核糖体基因转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列间的差异,设计了1对特异性引物320A/320B,用于苹果黑星病菌的分子检测,对特异性引物扩增条件进行了优化,并验证和检验了引物的特异性和灵敏度。【结果】特异性引物的扩增条带约为320bp,优化的反应体系为:2μL MgCl2(25mmol/L),2.5μL 10×buffer,3μL dNTP(2.5mmol/L),1.2 μL引物320A/320B(10μmol/L),0.5μL聚合酶(5U/μL),1μL模版DNA(30ng/μL),加ddH2O至总体积25μL;反应程序为:94℃3min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;72℃延伸10min。利用该对特异性引物对包括苹果黑星病菌在内的26个苹果病原菌菌株基因组DNA进行的PCR扩增表明,只有苹果黑星病菌能扩增到1条约320bp的特异性条带,其他菌株及阴性对照的扩增产物均未检测到特异性条带。对接种苹果黑星病菌的苹果组织的检测表明,该对引物能特异性地检测到苹果黑星病菌的存在,其对苹果黑星病菌基因组DNA检测的灵敏度为100fp/μL。【结论】利用设计的特异性引物320A/320B,参考正交试验优化的体系和程序,结合简单的SDS法提取苹果黑星病菌基因组DNA,在1个工作日内即可完成对该病原菌的分子检测。     

沿海地区钢结构的腐蚀及防腐涂层

介绍了沿海地区油罐和钢结构的腐蚀现状,并对沿海地区的腐蚀环境进行分析。针对传统沿海户外钢结构溶剂型涂层存在的不利于健康、安全、环保,防渗漏、机械磨损和耐化学品性能差,不具备耐粘污和自清洁性能,户外涂层施工周期长,对施工环境要求高等缺点,研发了一种由无溶剂防腐底漆和纳米无机硅氧烷抗粘污面漆组成的新型涂层配套体系。该体系具有施工简便,配套涂料的密闭性、耐候性、耐盐雾性、耐矿石粉尘冲刷性、耐粘污性、自清洁性好等优点,适用于沿海储罐、埋地管道及钢结构的长效防腐涂装,部分产品已成功应用于舟山国家石油战略储备基地等油罐群的涂装,具有广阔的推广应用前景。     

地衣芽孢杆菌16S-ITS标记及其特异性分析

[目的]建立地衣芽孢杆菌的分子鉴定方法。[方法]通过对地衣芽孢杆菌TS-01的16S和ITS序列进行克隆测序和差异性分析,以该区序列为靶序列设计地衣芽孢菌TS-01的特异性引物,并用该引物扩增全部受试菌种。[结果]从ITS和16Sr DNA区间设计了地衣芽孢杆菌种特异性引物,特异性引物PCR的最佳退火温度为67.2℃,循环数为24个;地衣芽孢杆菌TS-01可扩增出1条905bp的标记片段,其他受试菌株均为阴性,从而证明试验得到了在种水平上对该菌种进行准确鉴定的特异16S-ITS标记。[结论]地衣芽孢杆菌TS-01分子鉴定方法的建立,为地衣芽孢杆菌的分子诊断奠定了基础。     

蜡梅AFLP反应体系优化及引物筛选

通过对影响AFLP反应体系主要因素的优化,建立了蜡梅的AFLP反应体系,并筛选出了适宜该体系分析的引物.结果表明,20μL蜡梅AFLP最佳酶切体系为模板600 ng DNA,3 U Pst I和3 U Mse I,在37℃下双酶切2 h;在20μL最佳连接体系中酶切产物为15μL,3 U T4连接酶,0.25μmol.L-1 Pst I接头,2.5μmol.L-1 Mse I接头,1μL 10×T4 Buffer,在22℃下连接10 h;在20μL最佳预扩反应体系中稀释10倍的连接产5μL,2.0mmol.L-1 Mg2+,2 U Taq酶,300μmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGA/M+ATC);在20μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释20倍的预扩增产物,2.0 mmol.L-1的Mg2+,2 U Taq酶,300μmol.L-1 dNTP,0.5μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGA/M+ATC).最后,利用上面的体系筛选出了96对适宜于蜡梅AFLP分析的引物.     

草鱼和鲤RAPD引物筛选及鱼种特异性分子标记

以草鱼和鲤为材料,提取基因组ＤＮＡ,制备ＲＡＰＤ－ＰＣＲ模板,对３个随机引物盒共６０个１０－ｍｅｒ引物进行了ＰＣＲ扩增,共筛选出７个较理想的可用于鱼种内或鱼种间群体遗传分析的随机引物．用这７个引物所获得的草鱼和鲤的ＲＡＰＤ指纹图谱平均带纹总数分别为４．２８±１．８９和６．７１±４．１９,多态性带纹总数分别为１．７１±１．６０和５．１４±４．７４．ＲＡＰＤ指纹图谱特征反映出草鱼比鲤具有更高的遗传纯度．７个引物共扩增出草鱼特异性带纹１８条,鲤特异性带纹３２条．大量特异性带纹的检出表明,两个鱼种间存在较大的遗传差异,同时也为鱼种间基因转移（特别是全基因组ＤＮＡ导入）提供了分子检测的候选遗传标记     

传染性法氏囊病病毒的PCR引物设计与Internet检索分析

研究了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片断的ｃＤＮＡ的结构,并使用ＰｒｉｍｅｒＤｅｓｉｇｎ引物设计软件,在ＶＰ５和ＶＰ２的重叠基因区设计了一对引物,各种ＩＢＤＶ毒株在此部位有非常高的同源性,在对引物进行Ｉｎｔｅｒｎｅｔ检索中得到了证实。经过对４种ＩＢＤＶ的疫苗标准毒株,１种野毒株,１例病鸡标本试检测,验证引物设计符合要求,具有良好的适应性和较高的灵敏度。     

野生马蔺中和抗性有关基因片段的分离与初步分析

野生植物是宝贵资源,在生物多样性、保护生态环境和遗传育种等众多领域具有重要意义。本研究以马蔺为材料,利用保守区域序列,设计简并引物进行PCR扩增,从马蔺当中分离了一些cDNA片段,通过比较发现,其中部分片段和抗逆性有关,此结果为今后充分利用丰富的野生植物资源奠定了基础。     

Inter simple sequence repeat (ISSR) polymorphism and its application in plant breeding

Inter simple sequence repeat (ISSR)-PCR is a technique, which involvesthe use of microsatellite sequences as primers in a polymerase chainreaction to generate multilocus markers. It is a simple and quick methodthat combines most of the advantages of microsatellites (SSRs) andamplified fragment length polymorphism (AFLP) to the universality ofrandom amplified polymorphic DNA (RAPD). ISSR markers are highlypolymorphic and are useful in studies on genetic diversity, phylogeny, genetagging, genome mapping and evolutionary biology. This review providesan overview of the details of the technique and its application in geneticsand plant breeding in a wide range of crop plants.     

适于柚×橙杂交后代遗传分析的ISSR引物的筛选与应用

以沙田柚、强德勒柚、红江橙为材料,利用优化的柑橘ISSR体系,对100个ISSR引物进行了筛选.结果表明:28个引物能够扩增出2~12条稳定、清晰的条带,多态性条带为1~9条,多态率为25%~90%,其中P807,P808,P809,P810,P811,P812,P814,P815,P820,P821,P822,P826,P827,P830,P834,P835,P840,P845等18个引物在沙田柚和红江橙之间有差异,P812,P814,P815,P827,P834,P840等6个引物在沙田柚和强德勒柚之间有差异.用2个差异引物P827和P834可从36株沙田柚×强德勒柚杂交后代中鉴定出31株为真杂种,用P810,P811,P812,P835等4个引物可以把52株沙田柚×红江橙杂种后代全部鉴定出来,并且获得了一个适用于沙田柚和红江橙杂交后代鉴定分析的完全显性标记P810.