奥利亚罗非鱼3种C型溶菌酶基因的克隆及其序列分析

本研究结合RT-PCR和RACE法获得了奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)三种C型溶菌酶基因C-1,-2和C-3的全长cDNA.3个基因的cDNA分别为581 bp、662 bp和695 bp,各编码143、156和143个氨基酸(GenBank accession No:EU913095,EU913094和EU836689),相互间氨基酸序列的同源性在63.9%~67.8%之间.3个基因均具有与其它物种C型溶菌酶相同的8个保守半胱氨酸残基和2个活性位点Glu~(35)和Asp~(52),可认为它们均为C型溶菌酶基因.在系统进化树中这3个基因首先与同属高等真骨鱼类的聚类,最后再与低等真骨鱼类的聚类,系统进化关系与传统鱼类分类地位相吻合,显示真骨鱼类C型溶菌酶的进化速度与物种的进化速度基本一致.蛋白分析软件分析显示这3个基因均具有C型溶菌酶的典型结构、相似的蛋白二、三级结构,推测应具有与C型溶菌酶相似的生理功能.但3个基因氨基酸序列间存在一定差异,其中C-1的等电点较低且碱性氨基酸较少,因此3种溶菌酶可能具有生理功能上的差异与分工.     

牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

研究金黄色葡萄球菌的耐药性状况,指导兽医临床用药。采用高盐甘露醇进行纯化培养,梅里埃全自动微生物分析系统对葡萄球菌鉴定板进行鉴定,纸片扩散法进行药敏实验。从阳性乳房炎样品中分离纯化并鉴定了样品中的金黄色葡萄球菌2株,测定了其耐药性。在选取的5种药物中,青霉素对分离病原菌的抗菌活性较高,其次是恩诺沙星和庆大霉素,而链霉素和磺胺嘧啶钠对分离病菌的抗菌活性较低。     

新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查

[目的]了解新疆奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,为该病治疗的临床用药提供参考。[方法]2009年以来对乌鲁木齐市、昌吉、呼图壁、奎屯、伊犁和库尔勒6地区16个奶牛养殖场乳房炎奶样分离金黄色葡萄球菌,用纸片扩散法进行抗菌素敏感性检测。[结果]共分离143株金黄色葡萄球菌,临床药敏试验显示,新疆70%以上分离株对红霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,40%的菌株对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素耐药;并且67.1%菌株同时对5种以上抗菌素耐药,10.5%的菌株对所测试的10种抗菌素耐药。此外,发现了19.6%的牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。[结论]新疆奶牛乳房炎病例中的金黄色葡萄球菌对当前临床上允许使用的多种类型的抗菌素呈现严重的多重耐药,使用抗菌素进行奶牛乳房炎的防治难以取得理想的疗效。这类菌株的存在和蔓延将对新疆奶牛养殖业的健康发展和奶制品的安全构成威胁,建议在选择奶牛乳房炎治疗的抗生素时,应以流行菌株的耐药性为依据。     

金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体的制备

为获得稳定性好、特异性强、效价较高的抗金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体,用热灭活的金黄色葡萄球菌wol-04菌体抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,以金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)为筛选抗原进行克隆筛选,并对各株单抗的生物学特性进行分析和鉴定.结果表明:试验获得了3株稳定分泌SPA单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中单克隆抗体3B11、4F7为SPA表面抗原表位的单克隆抗体,与金黄色葡萄球菌wol-04菌体和SPA有较强的免疫反应性,免疫球蛋白亚类分别为IgG1和IgG3,具有稳定性好、特异性强、效价较高的特点.     

拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌的抑制作用

为了解拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌的杀菌作用及机理,将拮抗菌X23发酵液与金黄色葡萄球菌作用后,运用琼脂平板倾注法检测菌体克隆数,扫描电镜观察菌体形态,透射电镜观察菌体超微结构。结果表明:拮抗菌X23发酵液与金黄色葡萄球菌作用60、90、120 min后,金黄色葡萄球菌克隆数极显著低于生理盐水对照组(P<0.01);与拮抗菌X23发酵液作用60 min后,金黄色葡萄球菌菌体表面出现囊状小突起,细胞膜皱褶并最终破裂,菌体内出现大块透电子区,胞浆内容物稀疏,胞质不均匀,胞内空泡变性加重,分裂相减少,菌体溶解。推测拮抗菌X23发酵液可以通过破坏细胞膜结构而杀死金黄色葡萄球菌。     

香菇多糖抑菌作用的研究

为研究香菇多糖对细菌的抑制作用,采用分光光度法研究香菇多糖对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella)的抑制作用,并探讨作用时间和pH值对其抗菌活性的影响,以确定最佳抑菌时间和pH值。结果表明,香菇多糖对四种菌的抑制作用由强到弱依次为金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌。对沙门氏菌的抑制作用在24h时达到最大,对其它3种菌均在12h时达到最大。pH值对抑菌作用有一定的影响,对金黄色葡萄球菌的抑制作用在pH值为6时最大;对其它菌的抑制作用均在pH值为5时最大。     

牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究

为研究牛乳金黄色葡萄球菌 SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型，设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因 SEA-SEE 及 TSST-1特异性引物，并以其固有基因 femA 和 femB 为阳性对照，以分离菌株 DNA 为模板，经 PCR 扩增菌株携带的毒素基因。结果表明，SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA 和 femB 基因，且牛乳分离株携带 sea、sec、sed 和 tst-14种超抗原肠毒素基因，为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。     

The potential role of staphylococcal enterotoxin B in the early intestinal injury in postburn Staphylococcus aureus sepsis

AIM: To investigate the role of staphylococcal enterotoxin B (SEB) in early intestinal injury in scald rats with Staphylococcus aureus sepsis. METHODS: 86 male Wistar rats were randomly divided into four groups as folows: normal controls (n=10), scald control group(n=10), postburn sepsis group (n=50) and SEB monoclonal antibody (MAb) treatment group (n=16). Plasma samples were collected to determine SEB, endotoxin, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interferon-γ (IFN-γ). RESULTS: After scald injury followed by Staphylococcus aureus challenge, the levels of SEB, TNF-α and IFN-γ in plasma were significantly higher than those of normal controls, peaking at 2-6 h (P<0.05 or P<0.01), while the intestinal diamine oxidase (DAO) activity declined constantly (P<0.05). It was shown that plasma SEB levels were significant negatively correlated with intestinal DAO activity (r=-0.4398, P=0.0170), and SEB MAb pretreatment could ameliorate the intestinal injury to certain extent. Moreover, Staphylococcus aureus challenge could increase the endotoxin levels in plasma and various tissues, which were attenuated by SEB MAb pretreatment. CONCLUSION: In postburn sepsis, SEB might be involved in the development of intestinal barrier dysfunction, which in turn resulting in gut-derived endotoxin translocation and aggravating the pathophysiologic changes caused by Staphylococcus aureus challenge.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌黏附素研究进展

金黄色葡萄球菌的黏附素是其引起奶牛乳房炎的关键因素之一,与金黄色葡萄球菌在奶牛乳房中定植有关的的黏附素主要是ClfA、FnBPA和FnBPB3种。曾有对金黄色葡萄球菌黏附素表达调控的研究发现,在金黄色葡萄球菌感染的早期主要表达黏附素,之后才表达毒素和荚膜,所以人们认为,对金黄色葡萄球菌的黏附进行干预,可以减少或阻止毒素和荚膜的表达,而以黏附素作为靶位进行疫苗研制可能是预防奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎的有效途径。国外对金黄色葡萄球菌的黏附素的研究历史相对较久,并且也取得了许多可喜成绩,而国内对金黄色葡萄球菌的研究相对滞后。因此,研究金黄色葡萄球菌黏附素对预防由金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎具有广阔的前景。     

金黄色葡萄球菌β-溶血素基因的克隆及原核表达载体的构建

根据GenBank中的金黄色葡萄球菌β-溶血素（hlb）基因序列,设计合成1对引物,采用PCR方法扩增出与预期设计大小相符的hlb基因特异性条带,将扩增出的DNA片段克隆到pMD18-T载体中,转化感受态细胞,经平板筛选,酶切鉴定,获得阳性重组质粒,对重组质粒进行序列测定,结果表明：金黄色葡萄球菌β-溶血素基因全长982bp,不含终止密码子的目的基因,插入的位点、大小与读码框均正确。将hlb基因插入到原核表达pET-32a中,转化到BL-21感受态细胞中,获得了表达hlb基因的阳性重组质粒。