稻瘟菌诱导的稻叶脂氧合酶的纯化及部分氨基酸序列测定

 作者对已报道的稻瘟菌诱导稻叶脂氧合酶CM-LOX 1和CM-LOX 2的纯化方法作了进一步改进和完善。改进后的纯化方法可缩短该脂氧合酶的纯化时间,并提高纯化倍数。利用改进的方法,作者从20 g非亲和性稻瘟菌小种接种稻叶中获得了电泳纯的酶蛋白CM-L OX 1 133 μ g和CM-LOX 2 208μg。在此基础上,采用特异性的蛋白酶endoproteinase Lys-C和溴化氰对该酶蛋白进行了裂解,回收其肽段,得到了CM-LOX 1的3个不同肽段共30个氨基酸和CM-L OX 2的7个不同肽段共87个氨基酸的序列,为最终克隆这2个酶的基因奠定了基础。     

基于EST库的猕猴桃脂氧合酶基因家族成员的克隆

利用猕猴桃EST库及相关生物信息学手段, 从果肉组织克隆了LOX基因家族成员6个, 命名为AdLox1-6。AdLox1、AdLox2、AdLox3和AdLox4 为全长cDNA, 编码区长度分别为2 739、2 595、2 739 和 2 709 bp, AdLox5和AdLox6为cDNA片段, 长度为1 359和1 557 bp。猕猴桃AdLox2和AdLox5氨基酸序列同源性最高, 约74%, 而AdLox3 和AdLox5 仅为49%。生物信息学分析表明, AdLox1、AdLox3、AdLox4 和 AdLox6可能具有132LOX活性, 在N端含有额外约60个氨基酸残基, 而AdLox2和AdLox5则属于92LOX类型。猕猴AdLox1与番茄TomLoxD具有最高氨基酸序列同源性(约80%) , AdLox2和AdLox5与TomLoxA高度聚类, 序列同源性分别为68%和75%, AdLox4和AdLox6与TomLoxC的氨基酸序列同源性分别为62%和63%, AdLox3与番茄LOX基因序列同源性低于55%。     

紫果西番莲果实发育过程中挥发性香气物质及相关酶活性的变化

以西番莲香气物质较丰富的紫果‘台农1号’为试材,选取未成熟（T₁）、近成熟（T₂）和完全成熟（T₃）3个时期果实,采用顶空–固相微萃取–气质联用（HS-SPME-GC-MS）技术测定3个果实发育过程的挥发性香气物质组成及含量变化情况,同时检测对应果实中酯类香气物质合成相关的脂氧合酶（LOX）和醇酰基转移酶（AAT）活性,以期了解不同发育时期果实主要致香物质变化情况及物质与相关酶活性之间的相关性。结果表明：随着西番莲果实成熟度的增加,挥发性香气物质的种类和含量均有很大的提高,3个时期检测的香气物质总数分别为72种、95种和136种,总峰面积呈倍数增加;未成熟（T₁）和近成熟（T₂）2个时期萜烯类和酯类物质为主要的挥发性香气物质,在完全成熟（T₃）时期主要的挥发性香气为酯类,其峰面积占总峰面积达80.31%;随着果实成熟度的增加,酯类香气的种类和含量不断的提升,其中己酸乙酯,1-甲基己酯-己酸、丁酸乙酯、辛酸乙酯、1-甲基辛酯-丁酸、己酸己酯、1-甲基己酯-丁酸、丁酸己酯、(Z)-3-己烯基酯-己酸、乙酸己酯、2-甲基-辛酯-丙酸、辛酸己酯、3-羟基乙酯-己酸、(Z)-2-丁酸-乙酯等含量提升或占比较大,这些脂肪酸代谢途径产生的酯类在西番莲果实成熟过程中可能发挥了致香作用。LOX是酯类合成第一步的限速酶,AAT为酯类合成最后的关键酶。对不同发育期果实酯类合成相关酶活性测定结果表明,随着果实成熟度的增加,LOX、AAT酶活性呈上升趋势,尤其是T₃时期AAT酶活性显著的提升。由此推断,紫果西番莲果实发育过程中LOX和AAT酶的活性与酯类香气成分形成直接相关,酶活性的提升促进酯类香气的合成。     

大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化

【目的】应用RNA干扰技术,同时抑制大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase,Lox)基因在种子中的表达,改良大豆营养品质,为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理,酶切获得Lox目的片段,构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7αP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA-Lox(pSBA-Lox)干扰表达载体,并通过农杆菌介导法转化大豆(品种为吉农28),采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明,双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中,对转化植株进行PCR、Southern杂交检测,结果显示,外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中,并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示,转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低,SBA基因表达量降低了35.9%~47.2%,Lox基因表达量降低了32.8%~56.1%,而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T1代转基因大豆。     

水杨酸对采后桃果实脂氧合酶及相关指标的影响

水杨酸 (salicylicacid ,SA)是一种植物体内产生的简单酚类化合物 ,广泛存在于高等植物中。已发现 ,外源施用SA可诱导某些植物开花和产热 ,诱导烟草和黄瓜等植物对病毒、真菌及细菌等病害的抗性 ,Raskin( 1 992 )提出SA可以被看作是一种新的植物内源激素 ,其作用和机制受到人们的关注。外源SA处理对园艺产品采后的作用研究还较少 ,仍有许多问题尚待探讨。本试验以 2个不同品种的桃果实为试材 ,研究了SA处理后果肉组织脂氧合酶活性以及其他相关指标的变化 ,并测定了果肉的硬度 ,为进一步探讨桃果实采后成熟衰老机制 ,改进现有贮藏方式提…     

果实成熟软化机理分子生物学的研究进展

果实成熟软化是一个复杂的发育调控过程,其间经历了一系列生理生化变化,同时概述了果实成熟软化过程中相关酶及乙烯等因素分子生物学方面的研究进展.     

热空气处理诱导冷藏橄榄果实抗冷性及其与膜脂代谢的关系

【目的】研究热空气处理对冷藏橄榄果实抗冷性的影响及其与脂氧合酶（LOX）活性和膜脂脂肪酸组分变化的关系。【方法】采后‘檀香’橄榄[Canarium album (Lour.) Raeusch cv. Tanxiang]果实38℃热空气处理30 min,采用0.015 mm厚的聚乙烯薄膜袋密封包装,在（2?1）℃下贮藏。贮藏期间定期测定橄榄果实冷害指数和细胞膜透性,果皮LOX活性和膜脂脂肪酸组分。【结果】与对照果实比,38℃热空气处理30 min降低冷藏橄榄果实冷害指数、细胞膜透性和果皮LOX活性,提高果皮棕榈油酸（C16:1）、亚油酸（C18:2）和亚麻酸（C18:3）等不饱和脂肪酸相对含量,降低肉豆蔻酸（C14:0）、棕榈酸（C16:0）和硬脂酸（C18:0）等饱和脂肪酸相对含量,抑制果皮脂肪酸不饱和指数和脂肪酸不饱和度下降。【结论】热空气处理通过降低冷藏橄榄果实果皮LOX活性而减少膜脂不饱和脂肪酸的降解,维持较高的膜脂脂肪酸不饱和程度,从而增强橄榄果实抗冷性、减轻冷藏橄榄果实冷害的发生。     

Distribution of Enzymes in Wheat Flour Mill Streams

The distribution of alpha -amylase, protease, lipoxygenase, polyphenol oxidase and peroxidase in wheat roller flour mill streams was studied. Break flours had relatively less alpha -amylase and protease activity than reduction flours both on flour weight and a protein basis. Among the different flour streams, the 5^thand 6^threduction passage had the highest alpha -amylase activity, while the 4^threduction passage had the highest protease activity. The lipoxygenase activity was concentrated mostly in the last break and the reduction streams, whereas polyphenol oxidase activity was highest in break flour streams. Peroxidase activity was distributed unevenly among the different mill streams. The lipoxygenase, polyphenol oxidase and peroxidase were highly concentrated in different bran fractions. Except for protease, the other enzymes were concentrated in the «atta», a milling by-product comprising refined flour, bran and shorts; and are least active in semolina (farina).     

Lipid composition and post-wounding degradation in potato slices from cultivars differing in susceptibility to autolysis

Summary The effect of cutting on lipid content and degradation were compared in tubers of potato cultivars resistant (Acresta, Aminca, Eba) or susceptible (Kastor, Pana, Tasso) to autolysis. Susceptible cultivars showed greater degradation of lipids and phospholipids as well as higher activity of lipid acyl-hydrolase. No significant differences were detected in the activity of lipoxygenase in the tissues of the studied cultivars.     

Changes of the lipid catabolism in potato tubers from cultivars differing in susceptibility to autolysis during the storage

Summary The activities of lipolytic acyl-hydrolases (LAH) and lipoxygenases (LOX) were compared in stored tubers of potato cultivars resistant (Acresta, Eba, Pentland Envoy) and susceptible (Kastor, Pana, Tasso) to post-wounding autolysis. In most cultivars, LAH activities had reached a maximum by the end of December but in cv. Kastor activity continued to increase throughout the storage period. LOX activities increased during most of the storage period except in cv. Tasso. The level of the fatty acid hydroperoxides, assumed from determinations of the malonaldehyde level, also increased during storage. This work was supported by Project CPBP 05.02.2.10 financed by the Polish Academy of Science.