关于兽用抗菌药使用减量化行动的探索与实践

宁夏以兽药生产经营使用环节全链条监管、动物源细菌耐药性监测技术体系建立、养殖场生物安全体系构建、减抗替抗产品推广应用、示范点带动等重点工作为切入点,强化质量保障,重视创新驱动,构建“政府+企业”产学研合作机制,不断促进兽用抗菌药使用减量化,形成了一套“监管到位、技术保障、企业尽责、用药减量”的兽用抗菌药使用减量化技术推广模式。     

替代抗生素饲料添加剂研究进展

抗生素作为主要的饲料添加剂在几十年的广泛应用过程中造成了致病菌耐药性增强、动物免疫力降低、影响动物疫苗的效价、通过食物链影响人体健康等亟待解决的问题。我国农业农村部已发布公告,自2020年起我国饲料全面禁止添加使用抗生素类添加剂,饲料行业正式进入“无抗时代”。长期以来,研究人员积极寻求研发各种抗生素替代品及绿色无害的饲料添加剂,以消除或减轻禁用抗生素带来的一系列影响。就目前主要抗生素替代品的抗菌特点及抗菌机理进行综述,旨在为“禁抗”后抗菌性添加剂在饲料中的应用提供参考。     

Application of polyclonal and monoclonal antibodies for the detection of Xanthomonas campestris pv. campestris in crucifer seeds using immunofluorescence microscopy

Polyclonal and monoclonal antibodies (PCAs and MCAs) were tested for the detection ofXanthomonas campestris pv.campestris (Xcc) in cabbage seeds using immunofluorescence microscopy (IF). It was concluded that PCA 94, MCAs 20H6, 2F4, 18G12 and a mixture of MCAs 20H6, 18G12, 2F4 and 16B5 could be used to detect Xcc in seed extracts when 5 min and 2.5 h shaking of seeds are used as extraction methods. The reliability of confirming suspect colonies with MCAs and PCA 94 in IF depended in part on the seed lot tested and the antibody used. Some virulent Xcc strains derived from seed lots, did not react with MCAs 10C5, 2F4, 18G12, 17C12 and 16B5. On the other hand, saprophytic isolates obtained from one seed lot cross-reacted with MCA 17C12 and to a lesser extent with MCAs 2F4, 18G12 and PCA 94. No relationship was found between IF-reactions of Xcc strains using MCAs and reactions of Xcc strains in pathogenicity testing. Xcc andX. c. pv.amoraciae (Xca) could in general not be distinguished on the basis of reactions with MCAs and PCAs. Also in pathogenicity tests Xcc and Xca were hard to distinguish.     

盐酸小檗碱与左氧氟沙星联合抑制MRSA及其机制研究

养殖场抗生素滥用造成多种耐药性细菌的产生,从奶肉类制品中分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的案例逐年增长,对养殖业食品安全造成巨大威胁。本研究筛选出与左氧氟沙星具有联合抑制MRSA效果的天然产物盐酸小檗碱（BBR）,探究BBR与其对MRSA的协同抑菌效果和联合抑菌机制。结果表明,BBR能有效抑制MRSA生长,提高MRSA对左氧氟沙星的敏感度,两者联用后,MRSA对左氧氟沙星的MIC降为之前的1/16。协同作用机制主要为上调ribA及下调mec A和msc L表达水平,破坏细胞壁、增加细胞膜的通透性,从而达到协同抑菌的目的。本研究有助于降低畜牧养殖中抗生素的使用,为提高肉奶类食品安全奠定基础。     

中链脂肪酸抗菌和诱导防御肽表达的功能及其在仔猪饲料中的应用

近年,越来越多的研究表明,中链脂肪酸（MCFAs）抵抗病原菌是哺乳动物先天防御系统的重要组成部分,而且MCFAs也能够诱导人、猪和鸡内源性防御肽的表达,MCFAs的这些新功能尚未引起重视。MCFAs还和饲用有机酸或饲用植物精油具有协同抗菌增效作用,可以减少这些活性物质的使用量。相比于长链脂肪酸,日粮中添加MCFAs能显著地提高动物机体内氧气消耗量和线粒体呼吸速率,但产生活性氧自由基少,特别适合幼龄动物肠代谢和肝代谢所需的快速能量供应特点。日粮添加低浓度MCFAs（0.1%—0.5%,质量比）能显著提高新生或断奶仔猪存活率、粗蛋白粗脂肪消化率、饲料转化率,调节肠道菌群和改善肠上皮结构,进而促进生长。基于MCFAs的上述功能,将MCFAs与饲用有机酸或植物精油复配制备成微囊颗粒,可能是其用于仔猪抗生素替代品的尚佳方式。     

石墨烯对喹诺酮在饱和多孔介质中运移的影响

为研究石墨烯（Graphene,GN）对喹诺酮类抗生素在地下水中运移的影响,以环丙沙星（Ciprofloxacin,CIP）和诺氟沙星（Norfloxacin,NOR）作为两种典型的喹诺酮类抗生素污染物,通过批量吸附实验和砂柱实验研究GN对CIP和NOR在饱和多孔介质中运移的影响。吸附实验结果表明,GN对两种抗生素污染物均具有较好的吸附性能,GN对CIP和NOR的Langmuir最大吸附容量分别为270.68 mg·g^-1和178.36 mg·g^-1。砂柱实验结果表明：随着多孔介质中GN含量从10 mg增加到80 mg,CIP和NOR在一维砂柱中的迁移能力降低;随着流速和电解质浓度（Na⁺和Ca²⁺）的增大,回收率逐步升高,CIP和NOR的运移能力也逐步增强。根据BDST模型对不同条件下的CIP和NOR在一维砂柱中的运移过程进行了模拟和预测,模型对穿透时间的预测值与实验值接近,表明BDST模型能较好地预测多孔介质中GN对CIP和NOR迁移能力的影响。     

30味中药提取物与环丙沙星联用对猪源链球菌体外抑菌作用研究

为筛选与环丙沙星联用对猪源链球菌具有协同抑菌作用的中药提取物,采用试管二倍稀释法测定30味中药醇提物、水提物的最低抑菌浓度（MIC）,采用棋盘稀释法测定30味中药醇提物、水提物与环丙沙星联用对猪源链球菌的部分抑菌浓度（FIC）,采用有机溶剂萃取法初步追踪与环丙沙星联用具有协同抑菌作用的中药萃取物的体外抑菌效果。结果显示,所选30味中药的水提物、醇提物对猪源链球菌均具有一定的抑菌作用,佩兰、黄连、枳壳、郁金等中药醇提物、水提物对猪源链球菌（pf—ce）抑菌活性较强,苍术水提物等对猪源链球菌的抑菌作用较弱;佩兰醇提物与环丙沙星联用对猪源链球菌的协同抑菌作用最强;佩兰醇提物的乙酸乙酯萃取物、氯仿萃取物与环丙沙星联用对猪源链球菌分别具有协同、相加抑菌作用。     

gacS基因在荧光假单胞菌FD6防治番茄灰霉病中的功能分析

 荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）FD6可产生多种抗菌物质,对多种植物病原真菌生长都有抑制作用。将FD6菌株感应激酶gacS基因部分保守区片段克隆到自杀载体中得到质粒pBS-S,将该质粒电击转化到FD6菌株中,利用同源重组构建了gacS基因插入突变体。经测定该突变体不产生抗生素硝吡咯菌素、2,4–二乙酰基间苯三酚、藤黄绿脓菌素、蛋白酶和氢氰酸,与野生型菌株相比形成生物膜和嗜铁素能力显著降低,并且丧失了对番茄灰霉病防病能力。gacS基因互补试验结果表明,gacS基因表达可恢复产生次生抗菌物质的能力,且对番茄灰霉病的防治效果与野生型菌株接近。由此证明,gacS基因是影响拮抗细菌FD6抗生素产生和对病害抑制能力的重要调控因子。     

兽用抗生素中非法添加5种解热镇痛类药物的高效液相色谱检测方法研究

建立兽用抗生素注射液与可溶性粉剂中非法添加对乙酰氨基酚、安乃近、安替比林、萘普生、氨基比林5种药物的高效液相色谱—二极管阵列检测分析方法。样品经甲醇超声提取后进行液相色谱分析,采用CAPCELL PAK MG C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈和磷酸盐缓冲液,梯度洗脱,检测波长229 nm,流速1.0 m L/min。对乙酰氨基酚、安乃近、安替比林、萘普生、氨基比林进样量分别在5.04~100.88、12.04~240.72、5.04~100.72、2.02~40.40、5.02~100.32μg/m L范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=5)分别为97.9%~102.8%、91.9%~98.8%、96.2%~101.1%、94.1%~102.3%、96.0%~102.8%,RSD分别为1.0%~3.1%、0.9%~6.4%、1.7%~4.2%、1.4%~3.9%、0.9%~4.8%。该方法快捷、简便,其准确性和灵敏度经方法学验证能很好地满足检测多种抗生素中非法添加解热镇痛类药物的筛查要求。