犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化

[目的]提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量.[方法]研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST - CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST - Sepharose 4B亲和层析柱对GST - CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定.[结果]大肠杆菌BL21 (DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600 =1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8h,GST - CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL.[结论]确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础.     

以嗜酸乳杆菌发酵虾头虾壳回收蛋白质和甲壳素的研究

利用嗜酸乳杆菌发酵虾头、虾壳,结合虾头、虾壳中内源蛋白酶的自溶作用,回收蛋白质和甲壳素。研究了影响发酵的因素并优化了发酵条件,分析了用稀盐酸脱除粗甲壳素(即发酵残渣)中的矿物质,制备食用级甲壳素的条件。研究结果表明,添加15%葡萄糖,固液比1∶2.5,接种量15%,初始pH值6.5,于40℃发酵48 h,得到的虾头、虾壳发酵液pH值低至3.79,蛋白质水解度达到21.9%;蛋白质回收率达到95.2%,发酵残渣(粗甲壳素)中仅残留2.71%矿物质,达到工业级甲壳素的纯度要求;以稀盐酸浸泡处理粗甲壳素,当浸泡温度为50℃,浸泡时间为1.5 h,粗甲壳素脱矿物质的效果最好,甲壳素中仅残留0.2%矿物质,达到食用级甲壳素的纯度要求。     

禽白血病病毒ELISA检测方法的建立与初步应用

本研究以在毕赤酵母系统中表达并纯化的p27重组蛋白为包被抗原,HRP标记的兔抗鸡IgY为酶标二抗,建立了一种快速有效的禽蛋白血病病毒ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。结果显示,该方法具有良好的特异性和重复性;与市售商品试剂盒相比,符合率为96.92%,且更为敏感。应用建立的ELISA方法检测来自吉林省内鸡场314份疑似样品,阳性检出率为75.15%。本研究为禽白血病病毒的检测与诊断提供了一种简便、有效的检测方法。     

添加甲酸对白花草木樨青贮品质的影响

在收获后经过0、8和30h晾晒的初花期草木樨(干物质含量分别为27.36%、38.69%和44.98%)原料中,加入甲酸(添加量为2.5、4.0和5.5ml/kg)进行青贮。结果表明,添加甲酸能使草木樨青贮料氨态氮含量降低,并保存较多的可溶性糖;添加甲酸4.0ml/kg对三个干物质水平草木樨青贮均有良好效果,但以干物质含量27.36%组效果最好。     

用重组核衣壳蛋白ELISA检测PRRSV抗体的研究

ＰＲＲＳＶ重组Ｎ蛋白ＥＬＩＳＡ检测人工感染猪血清７５份,与ＩＤＥＸＸ公司ＥＬＩＳＡ试剂盒及ＩＦＡ的符合率分别为９７．３％和１００％。检测疫苗免疫猪血清,阳性率１００％。在免疫后６ｄ就能检出抗体,比ＩＦＡ敏感。检测８５份我国田间猪血清,阳性率１８．８％。     

转基因技术在畜牧兽医中的发展前景

通过简要叙述转基因动物研究的发展简史、研究现状和存在问题 ,对转基因动物育种、药物生物反应器、组织器官移植 ,以及基因治疗和免疫等前景进行了综述。在此基础上 ,从畜牧兽医角度出发提出了追踪发展趋势的几点思考。