mRNA差异显示技术及其在动物遗传育种中的应用

ｍＲＮＡ差异显示技术是近年来国外发展起来的攻克隆新基因的一种新方法,同时已广泛用于人类基因调控和克隆研究。本文论述了这一新技术的原理、发展现状和在动物遗传育种中的应用领域。     

近红外反射光谱(NIRS)技术分析奶粉品质的研究

奶粉中蛋白质和脂肪是影响奶粉营养品质的主要因素,利用近红外反射光谱分析技术对来自国内不同地区的奶粉共900份样品进行蛋白质和脂肪成分测定分析。研究了不同的样品数日、光谱预处理和散射校正技术对发展奶粉近红外测定定标模型的影响。结果表明．在样品数目为200—400范围内建立的定标分析模型较理想;数学预处理中以一阶导数较好,且以“1,4,4,1”的处理组合最为理想;光谱散射校正中采用“标准正态变量转换(SNV) 趋势变换法(De—trending)”的组合建立回归方程效果较好。利用改进最小二乘法回归技术(Modified PLS)建立多种定标模型,并进行交叉验证(cross—Validation)来分析各种因素对定标模型的影响。同时筛选出较理想的蛋白质和脂肪定标分析回归方程,其中蛋白质和脂肪含量的相关系数高速0．973和0．850。探讨了NIRS技术在建模应用中的一些影响因素,以及由NIRS技术建立奶粉分析模型用于快速分析和在线检测的可行性。     

mRNA差异显示技术及其改进

分子生物学的首要任务之一就是比较不同细胞间或同一细胞不同时间与空间基因表达的差异。在多种基因检测技术中 ,mRNA差异显示技术作为研究细胞、组织在不同条件下 ,基因表达水平差异的重要手段 ,以不可替代的优势已被广泛用于生物学领域。该技术与传统的消减杂交等方法进行比较具有简便、快捷、灵敏、高效等优点 ,但也存在假阳性率高、易污染等缺点。为了克服以上缺点又不断涌现出一些改进技术。文章对该技术的原理、优势与不足及主要改进进行了综述     

鸡大肠杆菌活的非可培养状态发生相关基因克隆与分析

本研究旨在从分子水平探究细菌活的非可培养状态(VBNC)的发生机制。应用冰乙酸和4℃联合诱导条件,使鸡大肠杆菌进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)获得VBNC相关基因。结果表明,从VBNC大肠杆菌中筛选得到的3个差异片段与大肠杆菌23S核糖体RNA基因序列具有较高的核苷酸同源性,分别为98%、98%和99%,而氨基酸的同源性也均在97%以上,表明这3个序列是大肠杆菌23S核糖体rRNA基因的部分序列,同时也是与大肠杆菌VBNC状态发生密切相关的基因。由此推知,当正常大肠杆菌在未暴露任何压力下时,其转录水平较低,特别是23S rRNA的某一(些)基因不显示或受到强烈抑制。当进入VBNC状态后,面临生存压力时,这一(些)基因转录水平明显强于正常状态,而核糖体作为蛋白质合成的主要结构与场所,其某些基因也将积极参与新蛋白质的生物合成。     

河南省小麦肉鸡代谢能预测方程的建立

本试验采用化学分析和肉鸡代谢试验建立了河南省小麦养分含量与代谢能的回归方程。试验1:选取河南省11种不同的成熟小麦,测定概略养分含量和容重,分析养分含量变化范围。试验2:用小麦、次粉、麸皮、面粉按照总戊聚糖含量梯度配制人工小麦,再添加一定量的维生素和矿物质,配制成人工小麦代谢饲粮。选取常规饲养的商品代罗斯308雄性白羽肉鸡进行代谢试验,分别在11~13日龄和25~27日龄,用全收粪法测定人工小麦代谢饲粮的表观代谢能(AME)、真代谢能(TME)、氮校正表观代谢能(AMEn)和氮校正真代谢能(TMEn),并采用逐步回归法建立AME、TME、AMEn和TMEn的回归方程。结果表明:1)河南省小麦粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)及总磷(TP)含量的变异系数相对较大,分别为16.67%、15.84%、14.96%、19.32%。2)肉鸡对人工小麦代谢饲粮的养分表观代谢率在11~13日龄和25~27日龄存在差异,25~27日龄肉鸡对人工小麦代谢饲粮ADF、粗纤维(CF)的表观代谢率高于11~13日龄,AME、TME、AMEn和TMEn也高于11~13日龄。3)采用逐步回归法建立河南省小麦肉鸡代谢能的预测方程为:11~13日龄,AME=14.628-0.184NDF(R2=0.842,P<0.01),TME=15.49-0.197NDF(R2=0.854,P<0.01),AMEn=14.571-0.184NDF(R2=0.847,P<0.01),TMEn=15.49-0.197NDF(R2=0.854,P<0.01);25~27日龄,AME=15.462-0.217NDF(R2=0.797,P<0.01),TME=16.124-0.214NDF(R2=0.809,P<0.01),AMEn=15.179-0.208NDF(R2=0.801,P<0.01),TMEn=16.123-0.214NDF(R2=0.809,P<0.01)。4)通过预测方程计算所得人工小麦代谢饲粮AME、TME、AMEn和TMEn的预测值与实测值很接近,计算所得的河南省小麦AME、TME、AMEn和TMEn符合预期值。由此得出,不同品种河南省小麦之间EE、NDF、ADF及TP的含量差异相对较大;不同日龄阶段的肉鸡对小麦代谢能存在差异,设计肉鸡饲粮配方时,不同阶段饲粮代谢能应采用对应的代谢能值;低于14日龄的肉鸡,预测方程为AME=14.628-0.184NDF,TME=15.49-0.197NDF,AMEn=14.571-0.184NDF,TMEn=15.49-0.197NDF;14日龄以上的肉鸡,预测方程为AME=15.462-0.217NDF,TME=16.124-0.214NDF,AMEn=15.179-0.208NDF,TMEn=16.123-0.214NDF。     

关中奶山羊睾丸不同发育阶段代谢物的差异分析

【目的】 试验旨在从代谢组学角度探究关中奶山羊睾丸发育代谢机制。【方法】 选择1月龄断奶雄性关中奶山羊和24月龄体成熟的雄性关中奶山羊各6只,采集睾丸组织,使用液相色谱-质谱（LC-MS）技术对睾丸组织进行化学检测,通过多维和单维分析相结合的方式对两组不同代谢物进行化学检测、对比与鉴别,通过富集差异代谢物分析筛选关中奶山羊发育代谢中的潜在关键通路。【结果】 在1和24月龄关中奶山羊睾丸组织中共筛选出334个差异代谢物,其中显著上调137个,显著下调197个。对前36个差异代谢物进行比较鉴定发现,分别为脂质和类脂质分子、有机酸及其衍生物、未分类化合物和苯丙烷和聚酮化合物四大类。经相关性分析发现,在1和24月龄关中奶山羊睾丸发育过程中,脂质和类脂质分子与甘油磷脂呈最大正相关,羧基及其衍生物与甘油磷脂呈最大负相关。对不同的代谢物进行富集分析,筛选出7条潜在的重要代谢通路,分别为肿瘤中的胆碱代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、肿瘤中的中心碳代谢、铁死亡、谷胱甘肽代谢、氨酰-tRNA生物组成以及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】 本试验从代谢组学角度揭示了1和24月龄关中奶山羊睾丸的差异代谢物及代谢机制,为今后哺乳动物睾丸的发育研究奠定了基础。     

AA肉鸡腿肌重活体估测方法的探讨

以AA肉鸡商品代为试验材料,分析0、7、14、21、28、35、42日龄公、母鸡整体和腿肌的累积生长,建立腿肌重(y)与活重(x)之间的直线回归、幂回归、指数回归、对数回归及多项式回归方程,探讨腿肌重的活体估测方法。结果表明,AA肉鸡的腿肌在后期生长迅速,尤其是公鸡在35～42日龄时期表现突出;腿肌重(y)与活重(x)的幂回归、直线回归、多项式回归方程的拟合精度均在0.95左右,效果较好。     

非班太尔对照品的定值研究

(目的)本文旨在联合使用质量平衡法与差示扫描量热法2种定值方法测定非班太尔对照品的含量。(方法)采用高效液相色谱法测定非班太尔的纯度,采用卡尔费休氏容量滴定法、炽灼残渣检查法、气相色谱法分别测定其水分、灰分和残留溶剂,由质量平衡法公式计算非班太尔对照品的含量;采用差示扫描量热法对非班太尔对照品含量加以佐证。(结果)质量平衡法和差示扫描量热法测定结果经科克伦判定互为等精度,取其算术平均值作为最终定值结果,即非班太尔对照品含量为99.66%。(结论)质量平衡法与差示扫描量热法对非班太尔对照品的定值结果基本一致,2种方法能够更好地保证非班太尔对照品赋值的准确性。     

几种缓释肥的氮释放特性以及对草坪草生长的影响

实验室内采用水浸泡法对尿素、3种缓效肥和山西省农业科学院土壤肥料研究所研制(自研草坪肥)的缓效肥的初期溶出率和微分溶出率进行了测定.其中尿素的初期溶出率为22.75%,超出了国际上公认的缓/控释肥的初期溶出率小于15%的指标,而微分溶出率为0.22%,也小于国际上公认的缓/控释肥的微分溶出率(0.25%～2.5%)指标.其他几种缓释肥的初期溶出率为8.73%～14.42%,微分溶出率为0.30%～2.11%,符合国际上公认的缓/控释肥的初期溶出率和微分溶出率指标.田间试验比较和研究了尿素、3种缓效肥和山西省农业科学院土壤肥料研究所研制的缓效肥对草坪草的干草产量和养分含量的影响,尿素和包衣尿素处理的草坪草的生长量前期较高,后期产草量较低,呈马鞍型.其他处理的草坪草干草产量则比较平缓,肥料的氮释放特性与草坪草生长趋势相同.不同肥料处理对草坪草的中量、微量元素含量有一定的影响.     

猪繁殖与呼吸综合征基因标记疫苗株NP49-ELISA鉴别诊断方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）rHN4-△25＋NP49株是新型基因标记弱毒疫苗候选株,为了配合对该基因标记疫苗免疫猪血清抗体的鉴别诊断,本研究以标记基因编码的NP49（新城疫病毒NP蛋白C末端49个氨基酸,即NP49）多肽作为包被抗原,建立标记疫苗免疫猪血清中NP49抗体的ELISA鉴别诊断方法。通过对NP49-ELISA工作条件的优化,结果显示NP49-ELISA的多肽抗原最适包被浓度为500ng／孔,被检血清最佳稀释度为1：40。利用ROC曲线法确定S／P临界值为0．2,该方法批内与批间重复试验的变异系数均小于10％,与几种常见猪病阳性血清无交叉反应,具有较好重复性和特异性。本研究建立的NP49．ELISA鉴别诊断方法为猪繁殖与呼吸综合征新型基因标记疫苗的临床应用提供了有力保障。