砀山酥梨基因组DNA提取和RAPD条件优选

分别以砀山酥梨不同品系的成熟叶片、幼叶和芽为材料,采用SDS法提取基因组DNA,比较了不同材料的提取效果,并以此为模板进行RAPD反应,优化了RAPD反应条件。结果表明:用幼叶和芽均能提取高质量的基因组DNA,可直接用于RAPD分析,而用成熟叶片虽能提取到基因组DNA,但不能直接用于RAPD分析;优化的RAPD反应体系为:反应体积50μL,包含80ng左右模板DNA、5μL市售10×PCRBuffer、2.0mmol/LMgCl2、120μmol/LdNTPs、3U的Taq酶、0.5μmol/L随机引物;热循环程序为94℃预变性5min,使模板DNA充分变性,然后进入下列温度循环,94℃变性30s,36℃退火45s,72℃延伸90s,循环数40,最后72℃延伸7min。     

PCR-ELISA法对大豆品种的转基因定性检测研究

以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增,对PCR扩增的固相和液相产物分别进行杂交和凝胶电泳检测的PCR-ELISA法,对黑龙江省常规选育品种合丰35和黑农37、外源DNA直接导入大豆的分子育种所获品种黑生101、及大连进口的美国2号等大豆,进行转基因定性检测.结果表明:该方法高效可靠,可作为一种快速定性检测转基因产品的方法;检测结果:美国2号为转基因大豆,黑生101、合丰35和黑农37为非转基因大豆.上述结果对分子育种、生态保护、安全监测及对建立黑龙江省非转基因大豆生产保护区等具有重要意义.     

桑树TrnL-trnF基因间隔区序列的特点及分析

设计桑树TrnL trnF基因间隔区序列的特异引物 ,扩增并分析了桑属育 71 1和桑莲 2个品种的TrnL trnF基因间隔区序列 ,其长度分别为 4 14bp和 4 17bp ,且富含A/T。该序列有 4 2 1个分析性状 ,具有 17个变异位点。在这些变异中主要以碱基的插入和缺失 (主要是插入 /缺失dA)为进化形式 ,其余的发生了少数置换。除这些变异位点以外的核苷酸序列完全相同 ,说明两者有高度同源性 ,与桑科、菊科和蔷薇科的TrnL trnF基因间隔区序列有一定同源性。用Clustalx软件对 2 1份材料的TrnL trnF基因间隔区序列进行聚类分析 ,建立了系统进化发育树     

Converting restriction fragment length polymorphism to single‐strand conformation polymorphism markers and its application in the fine mapping of a trichome gene in cotton

A well‐characterized and systematically organized collection of genetic markers is crucial in the study of any crop species. It is the basis of map‐based gene cloning and crop improvements through marker‐assisted selections. Single‐strand conformation polymorphism (SSCP) has been a robust way of discovering new polymorphisms in marker development without the requirement of sequencing. Here, we report the first approach of applying SSCP marker discovery methods in the genetic map construction and gene mapping of cotton species. A total of 80 restriction fragment length polymorphism (RFLP) markers were selected from a region on published cotton genetic maps around the T1 gene related to cotton trichome. Among the 80 RFLPs, 28 showed polymorphisms through SSCP, showing a polymorphic rate of approximately 35%, which is much higher than that of simple sequence repeat (SSR) markers in the same region (7.8%). By integrating these newly generated SSCP markers, a detailed genetic map was reconstructed around this region using an F₂ population derived from a cross between Gossypium arboreum and G. herboceum. The reconstructed region comprises 22 SSCP markers, eight SSR markers and the T1 gene, spanning 21.6 cM. The marker order of the new map agrees well with published reference RFLP maps. The above results suggest that SSCP method can be applied very efficiently and reliably to the marker development of cotton genomes. It will prove to be even more valuable and robust after the public release of cotton whole‐genome sequences.     

甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球作为口蹄疫病毒核酸疫苗递送载体的特性评价

旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly （D,L-lactide-co-glycolide）,PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）核酸疫苗递送载体进行评价。采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的甘露糖修饰的壳聚糖衍生物（mannose modified chitosan,MCS）,然后,经双重乳化挥发法制备得到甘露糖修饰的壳聚糖PLGA纳米微球（MCS-PLGA-NPs）。采用纳米粒径仪检测MCS-PLGA-NPs粒径分布和表面电势（zeta）、扫描电镜考察其形态、琼脂糖凝胶电泳观察其对质粒的吸附和吸附质粒后抵抗核酸酶降解能力、CCK-8法检测MCS-PLGA-NPs的细胞毒性、激光共聚焦观察巨噬细胞对MCS-PLGA-NPs-质粒DNA复合物的摄取、荧光显微镜和Western blot验证MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA在细胞中的表达。元素分析结果表明,成功制备了取代度为5%~10%的MCS。纳米粒径测定和扫描电镜结果表明,MCS-PLGA-NPs的zeta为正值、粒径分布均匀且形态规则呈球形。琼脂糖凝胶电泳结果显示,MCS-PLGA-NPs吸附质粒的能力随着其质量的增加而增强并且可以在一定程度上抵抗核酸酶降解质粒DNA。在细胞毒性试验中,不同浓度的MCS-PLGA-NPs与RAW264.7细胞共孵育24 h后,细胞存活率仍在85%以上。在细胞摄取试验中,用激光共聚焦显微镜可以明显观察到质粒DNA结合到纳米微球表面被RAW264.7细胞摄取。荧光显微镜和Western blot试验证明MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA可以在细胞中进行表达。综上表明,本研究成功制备了MCS以及具有递送核酸疫苗能力的MCS-PLGA-NPs,为FMDV核酸疫苗的递送研究提供了新的方向和见解,也为该递送载体携带特定抗原靶向抗原递呈细胞表面甘露糖受体以及应用于动物免疫的研究奠定基础。     

猪瘟病毒石门株基因组cDNA片断的扩增与克隆测序

以猪瘟病毒（ＨＣＶ）中国石门株强毒的血毒、细胞毒及Ｃ系兔化弱毒的细胞毒中提取的总ＲＮＡ为模板，应用逆转录─聚合酶链式反应（ＲＴ一ＰＣＲ），在合成的两对ＨＣＶ特异引物引导下，扩增出与预计大小一致的４４１和３００ｂｐ两个核酸片断。寡核苷酸探针杂交证实确为ＨＣＶＰ_８０和ｇｐ４４／４８蛋白编码区特异性的ｃＤＮＡ片断。扩增片断克隆入ｐＵＣ_１９和ｐＢＳＫ（＋）中，并对ＨＣＶ石门株Ｐ_８０区ｃＤＮＡ片断进行测序分析，其与国外Ａｌｆｏｒｔ、Ｂｒｅｓｃｉａ株同源性分别为９０．６％和９４．６％。氨基酸水平上同源性高达９８．４％。为抗猪瘟病毒Ｐ_８０区核酶的设计和应用提供了依据。     

耦合水文情势及鱼类繁殖的江垭水库生态调度需求研究（生态调度专刊）

大型水库实施生态调度是修复河流水文情势、维持河流生态系统健康的重要手段。江垭水库位于溇水干流下游的张家界慈利县，是澧水流域具有重要防洪意义的大型水库。本研究通过环境DNA采样、IHA水文指标变动分析和文献资料总结等方法，开展了江垭坝下水文情势及鱼类繁殖需求的关系研究，提出了江垭水库生态调度需求及建议。2021年9月在溇水干支流综合调查到鱼类55种，与上世纪90年代相比，流水性种类在干流江段显著减少了51.35%；按照生态调度优先等级评估原则，确定江垭水库生态调度的主要目标物种为产漂流性卵的银鲴、银鮈、贝氏?和产粘沉性卵的鲤、鲫；江垭建坝前后下游水文情势变化较大，发生高度改变且对鱼类洄游产卵及鱼卵发育有重要作用的水文指标包括：年最大1日、3日平均流量指标，年出现高流量脉冲事件的次数和持续时间，以及连续日流量上涨率。以促进坝下不同产卵类型的鱼类繁殖为目标，江垭水库生态调度一方面需要恢复一定的高流量脉冲次数和历时，另一方面需要控制下游的水位日降幅，通过泄放合理的生态流量来维持下游鱼类的生物多样性。     

RAPD技术在产气荚膜杆菌基因分型中的应用研究

采用随机扩增多态性ＤＮＡ技术对产气荚膜杆菌进行ＰＣＲ扩增。结果产气荚膜杆菌Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４个型均可扩增出约４３０ｂｐ的条带，Ｂ，Ｃ型还扩增出约２１０ｂｐ条带，Ｂ，Ｄ型还扩增出约１２１０ｂｐ条带，Ａ型还扩增出约２４０ｂｐ和６９０ｂｐ条带，各型之间的条带差别明显，从而为产气荚膜杆菌的基因分型、ＰＣＲ快速诊断提供可靠的依据。     

Polymorphism in Mitochondrial DNA of Six Fowl Breeds Revealed by Restriction Endonuclease

The patterns of cleavage of mtDNA by restriction endonucleases was analysed for six fowl breeds and of .Hyline White,Hyline Brown,ISA Brown,Hisex Brown,Lohmann White,Abor Acres and mtDNA polymorphisms were detected in the restriction patterns with the following eight enzymes,Ava Ⅰ,AvaⅡ,EcoRⅠ,HindⅢ,BamHI,PvuⅡ,PstⅠ,HincⅡ.The restriction cieavage patterns were identical among these breeds.Hyline White,Hyline Brown,ISA Brown,Hisex Brown,Lohmann White-A type.The patterns of Abor Acres were Btype.Based on their mtDNA restriction types,all the breeds were classified into two groups.Genetic distances among these groups were calculated in roder to define their phylogenetic relationships.The relationship among five egg line breeds is close,while Abor Acres(Broiler fow)is relatively far from them.The results suggest that the difference of mtDNA could result from the different origins.The polymorphic sites in mtDNA of Hyline White bas been located on a restriction map.     

3种提取基因组DNA方法的比较分析

分别采用3种不同的方法提取基因组DNA，比较所提取的DNA的质量以及提取所需时间、费用，以期选择一种高效、简洁快速、价格合理的提取方法。结果发现这3种方法提取的质量都能达到相关分子生物学试验的要求，但在操作步骤、时间、价格等方面存在差异，具体比较结果可为分子生物学试验选择提取方法提供依据。