Purification and Trypsin Inhibitor Activity of a Sporamin B from Sweet Potato （Ipomoea batatas Lam. 55-2）

Sporamin is a soluble protein in sweet potato, and falls into two distinct homology groups, subfamilies A and B. In this research, a sporamin B was purified and its amino acid sequences, trypsin inhibitor activity （Ti activity） were analyzed. This sporamin B was isolated from sweet potato tubers [Ipomoea batatas （L.） Lam cv. 55-2] through extraction of the water-soluble fraction, dialysis, ultrafiltration and ion-exchange chromatography. Homology determined by polyacrylamide gel electrophoresis showed that mainly one bond appeared in gel after being reduced by SDS （sodium dodecyl sulfate）, or by SDS and 2-mercaptoethanol, or in native situation. By comparing the data of the polypeptide mass Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight （MALDI-TOF） mass spectrometry with those of the mass of the theoretical amino acid sequences from NCBI protein database, it was revealed that it was Q40091｜Q40091_IPOBA, sweet potato sporamin B - Ipomoea Batatas （sweet potato） （Batate）. The sequence coverage was 70.6%. N-terminal sequence was SETPV （Ser-Glu-Thr-Pro-Val）. There is a linear relationship between trypsin inhibitor activity （Ti activity） and amounts of this sporamin B （3-18 μg mL-1）. The equation of linear regression was y = 2.5809x ＋ 17.049 （r2 = 0.9966）. There was a curvilinear relationship between Ti activity and amounts of this sporamin B （21-150 μg mL-1）. The equation of curvilinear regression is y = 14.417ln（x） ＋ 23.26 （r2 = 0.9924）. The concentration of sporamin B with Ti activity after heating at 40°C may induce part denature of this sporamin B, and there was no statistic difference after heating at 40, 50, 60°C for 20 min. Heat treatment at more than 90°C leads to a dramatic decrease of trypsin inhibitor efficiency. The results suggested that Q40091｜Q40091_IPOBA was the major sporamin B in sweet potato tubers [Ipomoea Batatas （L.） Lam cv. 55-2], which had strong Ti activity, and was stable to both thermal and DTT （DL-dithiothreitol） relatively.     

造血器官机能障碍对家蚕存活性能的影响

为了研究造血器官机能障碍后家蚕免疫机能的变化，用重离子射线局部照射家蚕幼虫的造血器官，调查了造血器官机能障碍后不同饲料饲养条件下家蚕的体重、血淋巴中多酚氧化酶的活性、添食苏云金杆菌后的生存率及大肠杆菌注射后在体内诱导产生的应急蛋白质量的变化。结果表明：造血器官机能障碍后，血淋巴中多酚氧化酶的活性减弱，大肠杆菌注射后在体内诱导产生的应急蛋白质量显著减少，添食苏云金杆菌后的家蚕生存率明显下降；用桑叶饲养时5龄的体重几乎没有增加，而用无菌的人工饲料饲养时体重增加与对照蚕的差异不显著。由此得出结论：家蚕造血器官受到破坏后，引起由血球参与的细胞性反应和体内抗菌蛋白质参与的液性反应减弱，最终导致机体的免疫机能下降；而通过清洁饲养可以改善由造血器官机能障碍所带来的影响。     

饲粮中添加白藜芦醇对“杜×长×大”猪空肠抗氧化能力及紧密连接蛋白表达的影响

试验旨在研究饲粮中添加白藜芦醇(resveratrol,RES)对"杜×长×大"猪空肠抗氧化酶活性及抗氧化基因指标和紧密连接蛋白相关基因表达水平的影响。试验选用12头体重约为65 kg的育肥猪分为2组,每组6头。对照组育肥猪饲喂基础饲粮,试验组育肥猪饲喂在基础饲粮中添加400 mg/kg的RES的饲粮,试验期41 d。结果表明,与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg的RES显著提高了育肥猪空肠过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05),显著降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);显著提高育肥猪空肠抗氧化基因铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶-1 (GPx-1)和谷胱甘肽过氧化物酶-4 (GPx-4)活性(P<0.05);显著提高育肥猪空肠抗氧化酶活相关基因CAT、T-SOD和GSH-Px的表达水平(P<0.05),显著降低MDA的表达水平(P<0.05);显著提高育肥猪空肠紧密连接蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1 (Claudin-1)和链接黏附分子A (JAM-A)的表达水平(P<0.05)。研究表明,饲粮添加400 mg/kg的RES能够显著提高育肥猪空肠抗氧化能力及紧密连接蛋白的表达,改善动物肠道健康。     

番茄红素对秦川牛精液冷冻保存及鲜精品质影响

旨在探究番茄红素对秦川牛精液冷冻保存和新鲜精液品质的影响,为番茄红素作为新型精液稀释液添加剂和种公畜日粮添加剂提供依据。本研究采集3头年龄3~5岁健康状况良好秦川种公牛的新鲜精液混合,用0、1、2、3、4 μmol·L^-1浓度的番茄红素稀释液冷冻保存;利用计算机辅助分析仪、低渗肿胀检测法、花生凝集素荧光标记检测法、罗丹明荧光检测法等检测精子的运动性能、顶体完整率、质膜完整性、线粒体活性和抗氧化性能;在秦川种公牛日粮中添加15 mg·kg^-1 BW番茄红素,检测饲喂前后秦川种公牛的新鲜精液品质和血清抗氧化指标。结果表明,在秦川牛精液冷冻保存过程中添加番茄红素可以显著提高冷冻-解冻后精子的活力、顶体完整率、质膜完整性和线粒体活性以及抗氧化酶CAT和GSH-Px酶活性,显著降低精子中MDA含量,且番茄红素的最适添加浓度为2 μmol·L^-1(P<0.05);饲喂15 mg·kg^-1 BW番茄红素后,与饲喂之前相比,秦川种公牛的精子活力显著提高(P<0.05),精子畸形率显著降低(P<0.05),血清中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px酶活性显著增加(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。综上所述,一定浓度的番茄红素对精子在冷冻过程中造成的精子损伤和秦川牛机体应激造成的繁殖性能降低具有良好的保护作用,这可能与番茄红素通过抗氧化作用减少精子在冷冻-解冻过程中的氧化损伤和提高动物机体的抗氧化能力有关。     

乳酸菌发酵驼乳工艺优化及抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的研究

[目的]以实验室前期从驼乳中分离得到的乳明串珠菌、副干酪乳杆菌为对象,并通过体外实验对发酵驼乳抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性以及抗氧化能力进行测定。[方法]以α-淀粉酶抑制率和α-葡萄糖苷酶抑制率为考察指标,在单因素试验的基础上,采用正交试验优化发酵驼乳的参数条件。测定在不同储藏时间下试验组乳明串珠菌、副干酪乳杆菌发酵驼乳、对照组乳明串珠菌、副干酪乳杆菌发酵牛乳和嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌发酵驼乳pH值、酸度、活菌数、α-淀粉酶抑制率、α-葡萄糖苷酶抑制率、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率的变化。[结果]驼乳发酵的最佳工艺条件为乳明串珠菌∶副干酪乳杆菌比例2∶3、接种量2%、发酵温度39 ℃,发酵时间24 h,此条件下测得对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率分别达到87.20%和20.85%,与未优化前相比,α-淀粉酶的抑制率提高14.10%,α-葡萄糖苷酶抑制率提高4.4%。在4 ℃储藏期间发酵驼乳α-淀粉酶抑制率在第6d时最高为90.39%,对α-葡萄糖苷酶的抑制率最高为36.32%,抑制率显著高于对照组。各组对羟自由基的清除率达到70%以上,最高为94.91%,超氧阴离子自由基清除率最高达到78.10%,整个测定过程中试验组的抗氧化活性均显著高于对照组。[结论]经乳酸菌发酵驼乳抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性提高,在储藏期间抗氧化活性显著高于对照组（P<0.05）。     

牛至油博落回口服液的研制及体外抑菌活性测定

【目的】 研制牛至油博落回口服液, 并测定其体外抑菌活性及其主要成分的联合抑菌效果, 为临床用药提供理论依据。【方法】 通过预试验和Box-Behnken响应面法优化处方; 采用高效液相色谱法测定口服液主要成分含量; 采用滤纸片法测定口服液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌的抑菌圈直径; 采用试管二倍稀释法测定口服液、5%牛至油溶液及1%博落回溶液对4种细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC); 采用微量棋盘稀释法对5%牛至油溶液与1%博落回溶液进行体外联合药敏试验。【结果】 牛至油博落回口服液最优配方为: 5%牛至油, 1%博落回提取物, 25%增溶剂聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油, 0.02%抗氧化剂2, 6-二叔丁基对甲酚(BHT), 余量为水。口服液中香芹酚的含量为42.59 mg/mL, 血根碱含量为6.51 mg/mL。口服液对4种菌的抑菌圈直径分别为16.9、16.4、23.7和17.0 mm, MIC分别为3.125、3.125、1.5625和1.5625 μL/mL, MBC分别为12.5、6.25、3.125和3.125 μL/mL; 5%牛至油溶液对4种菌的MIC分别为25、12.5、6.25和100 μL/mL, MBC分别为100、50、25和>200 μL/mL; 1%博落回溶液对4种菌的MIC分别为6.25、12.5、3.125和6.25 μL/mL, MBC分别为50、25、6.25和25 μL/mL。联合药敏试验表明, 二者联合用药对大肠杆菌、沙门氏菌起相加作用, 对金黄色葡萄球菌无作用, 对粪链球菌为协同作用。【结论】 试验制备了牛至油博落回口服溶液剂, 该制剂对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌具有良好抑制作用。     

地衣芽孢杆菌发酵条件优化和抑菌活性测定

【目的】探究不同培养及发酵条件对地衣芽孢杆菌19148抑菌作用的影响及地衣芽孢杆菌19148的耐药性。【方法】设计单因素试验,分别在不同温度、酸碱度、金属离子、摇床转速、发酵时间和接种量的条件下培养地衣芽孢杆菌19148菌液,将培养后的菌液离心、过滤制成无菌滤液,并通过牛津杯抑菌试验探究无菌滤液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌1882的抑制能力。通过药敏纸片法探究地衣芽孢杆菌19148对27种抗菌药的耐药性。【结果】地衣芽孢杆菌19148在4和75 ℃下生长受到抑制,25、37和45 ℃能正常生长,其中在37 ℃抑菌活性最好。在pH 5.0~9.0的条件下能正常生长,在pH为6.0条件下抑菌活性最好,对铜离子不耐受,但对镁离子表现出了良好的耐受性,且不同浓度镁离子处理组间抑菌活性无显著差异（P＞0.05）。体外发酵试验中,地衣芽孢杆菌19148在3%种子液接种量、150 r/min发酵28 h时,体外发酵的抑菌活性最好。耐药性评价试验结果显示,地衣芽孢杆菌19148对青霉素、四环素、头孢他啶、呋喃唑酮和多黏菌素B 5种抗菌药中介,对头孢哌酮和红霉素等其他22种抗菌药敏感。【结论】地衣芽孢杆菌19148具有较好的稳定性,能应用于工业发酵饲料生产,对抗菌药不具有耐药性。     

槲皮素对PEDV感染幼龄仔猪肠道形态、抗氧化功能及空肠脂质代谢基因表达的影响

【目的】 通过研究槲皮素对猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染仔猪肠道形态、肠道抗氧化功能及空肠脂质代谢相关基因相对表达量的影响,旨在探讨槲皮素对PEDV感染仔猪肠道的保护作用。【方法】 选取18头健康的7日龄断奶仔猪,随机分为3组：对照组、PEDV组和槲皮素＋PEDV组,每组6个重复,每个重复1头猪。试验期8 d,于试验第0~7天,对槲皮素＋PEDV组仔猪每天口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素,其余组灌服等体积的人工奶。于试验第5天晚上给PEDV组和槲皮素＋PEDV组仔猪口腔灌服10^4.5TCID₅₀的PEDV,对照组仔猪灌服相同体积的PBS溶液。于试验第8天早上屠宰,取仔猪十二指肠、空肠、回肠及结肠组织样品进行检测。【结果】 与对照组相比,PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著降低（P<0.01）,空肠、回肠和结肠中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）的活力显著降低（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠和结肠中过氧化氢酶（CAT）的活力显著降低（P<0.05）,回肠和结肠中丙二醛（MDA）的含量显著升高（P<0.05）,空肠中载脂蛋白A1（APOA1）、载脂蛋白B （APOB）、载脂蛋白C2（APOC2）、脂肪酸结合蛋白2（FABP2）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员3（ACSL-3）和脂肪酸合酶（FASN）基因的相对表达量极显著下调（P<0.01）。与PEDV组相比,槲皮素＋PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著提高（P<0.01）,空肠、回肠和结肠中GSH-Px和T-SOD的活力显著提高（P<0.05）,十二指肠、空肠和结肠中CAT的活力显著提高（P<0.05）,回肠和结肠中MDA的含量显著降低（P<0.05）,空肠中APOB、FABP2和FASN基因的相对表达量极显著上调（P<0.01）。【结论】 添加槲皮素可有效缓解PEDV感染导致的仔猪肠道损伤,提高仔猪肠道抗氧化能力以及空肠脂质代谢的能力。     

纳米银体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究

【目的】 研究纳米银（silver nanoparticles,AgNPs）体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的作用,并初步分析其抗病毒作用机制,为PRRSV的防控提供新思路。【方法】 使用0.1875、0.375、0.75、1.5、3、6、12 μg/mL AgNPs处理Marc145细胞,采用CCK-8试剂盒评估AgNPs对Marc145细胞毒性,确定其安全浓度。通过显微观察、间接免疫荧光试验、病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs体外抗PRRSV感染Marc145细胞的效果。通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs对PRRSV的直接灭活效果。通过实时荧光定量RT-PCR方法分析AgNPs对不同感染复数（multiplicity of infection,MOI） PRRSV （0.0001~0.1）黏附和入侵Marc145细胞的影响,以及PRRSV感染Marc145细胞3、6、12、18和24 h后加入AgNPs对Marc145细胞增殖的影响。【结果】 AgNPs对Marc145细胞的最大安全浓度为1.5 μg/mL,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均具有良好的体外抗PRRSV活性,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均对PRRSV起一定灭活作用。AgNPs对不同MOI的毒株黏附和入侵Marc145细胞均有一定抑制作用,且不同时间（3、6、12、18、24 h）加入AgNPs对PRRSV增殖均有一定抑制作用。【结论】 AgNPs具有良好的体外抗PRRSV活性,体外抗PRRSV的作用机制包括直接灭活以及抑制病毒的黏附、入侵和增殖过程。     

杨梅结瘤固氮特性研究*

研究４种土壤盆栽杨梅生长及结瘤固氮特性表明：花坛土有利于杨梅的生长和结瘤固氮，其生长量、结瘤量及根瘤固氮活性分别为３１．６８７ｇ／株、１．７８９ｇ／株和３．４２０μｍｏｌＣ２Ｎ４／（ｇ鲜瘤·ｈ）；红壤十砂（２：１混合）次之，在这种土壤上栽植的杨梅，其生长量略低于花坛土，结瘤量及根瘤固氮活性接近于花坛土；砂十花坛土（１０：１混合）居第三；红壤最差，仅为８。３２２ｇ／株、０．３３３ｇ／株和１．３１５μｍｏｌＣ２Ｈ４／（ｇ鲜瘤·ｈ）。红壤施用石灰（１５ｇ／盆）土壤ｐＨ为５．４～６．０时杨梅的生长量、结瘤量及根瘤固氮活性最高，分别为１８．５２４ｇ／株、１．１８２ｇ／株和２．５２４μｍｏｌＣ２Ｈ４／（ｇ鲜瘤·ｈ）；充足的水分有利于杨梅的生长和结瘤固氮，外套水盆以底部持续供水且底部渍水时杨梅的结瘤量、生长量和根瘤固氮活性均有提高，前者提高幅度较大，达３．５１９ｇ／株。杨梅根瘤固氮活性的季节动态和日变化是：一年中有两个活性高峰，分别在６～７月份和１０月份，１月份的固氮活性最低。一日中根瘤固氮活性以中午和夜间１２时最高。