thanatin 串联抗菌肽原核表达研究

抗菌肽thanatin是一类广谱性的阳离子抗菌活性肽,对病原性真菌有很好的杀灭效果。为了提高thanatin抗菌肽表达丰度,将3个thanatin单体拷贝基因进行串联,与MBP蛋白进行融合表达,表达的产物经过酶切纯化后,通过Western blot和质谱鉴定,结果表明3×thanatin在大肠埃希菌中成功表达,对核盘菌的抑菌活性测定结果表明,原核表达的3×thanatin最低抑菌浓度为6.6 μmol·L^-1, 而化学合成的thanatin抗菌肽对核盘菌的抑菌浓度约为64 μmol·L^-1,3×thanatin抗菌肽对核盘菌的抑菌活性提升了约1个数量级。     

超声辅助竹节虾头酶解及抗氧化肽分离研究

为了实现竹节虾加工副产物的高值化利用,以竹节虾加工废弃物中的虾头副产物为原料,以水解度和DPPH清除率作为评价指标,采用中性蛋白酶酶解,通过响应面法优化超声辅助酶解工艺,并依次通过超滤、凝胶层析色谱和反相高效液相色谱等分离方法,从竹节虾虾头酶解产物中分离制备抗氧化肽,采用超高压液相色谱串联质谱联用技术对肽的结构进行表征。结果表明,在中性蛋白酶添加量为3 000 U·g~(-1)、p H值7.0条件下,最佳超声辅助酶解工艺参数为超声时间41 min,超声温度55℃,超声频率22 k Hz,料液比1∶9(w/v),在此条件下获得的酶解产物DPPH清除率达69.50%。当水解时间为0.5~2.5 h时,超声辅助酶解的酶解产物水解度和DPPH清除率比非超声辅助酶解工艺分别高17.95%和18.83%,该工艺缩短了酶解时间,节约了能耗。酶解产物经超滤初步分离发现,相对分子质量在3k Da(SHP4)的组分具有显著的抗氧化活性。用凝胶层析法进一步分离纯化SHP4组分后得到4个峰,其中SHP4-II的DPPH清除率最高;SHP4-II通过反相高效液相纯化后也得到4个主要肽峰,在多肽含量为1.5 mg·m L~(-1)时,SHP4-II-4的DPPH清除率最高,达到85.69%,并且具有较好的分离度,质谱分析发现,该抗氧化肽的结构为Gly-Asn-Gly-Leu-Pro(455.99 Da)。本研究结果为虾肽抗氧化保健食品的研发提供了一定的科学依据。     

家蚕雄蛾活性肽增强小鼠抗疲劳能力的试验

利用制种交配后的家蚕雄蛾制备蛋白活性肽,通过小鼠负重游泳存活时间及血乳酸、血尿素氮、肝糖元等指标的测定,研究家蚕雄蛾活性肽增强小鼠抗疲劳能力的功效。结果表明,家蚕雄蛾活性肽对小鼠体重和基本表现状态无显著影响(P>0.05),但对小鼠具有明显的增强运动耐力和抗疲劳能力,中、高剂量组小鼠负重游泳存活时间分别为(744.0±233.9)s、(816.6±270.4)s,比对照组(482.3±136.6)s显著延长(P<0.01);中、高剂量组小鼠的生化指标中,血尿素氮浓度分别为(8.54±0.42)mmol/L、(9.04±0.81)mmol/L,比游泳对照组的(10.34±0.64)mmol/L显著降低(P<0.05、P<0.01),肝糖元质量比分别为(7.91±0.65)mg/g、(7.82±0.73)mg/g,比游泳对照组的(5.85±0.60)mg/g显著增加(P<0.01)。     

天蚕素抗菌肽对肉兔生产性能和免疫器官指数的影响

试验旨在研究天蚕素抗菌肽对新西兰兔生产性能和免疫器官指数的影响。选择160只35日龄断奶的新西兰肉兔,随机分为5个处理,每个处理4个重复,每个重复8只兔。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮基础上添加30 mg/kg喹乙醇、150、200 mg/kg和250 mg/kg天蚕素抗菌肽,试验期为8周。结果表明,天蚕素抗菌肽可一定程度提高肉兔的日增重,显著降低料重比(P<0.05),对肉兔的采食量无显著影响(P>0.05);添加天蚕素抗菌肽有增加肉兔脾脏和胸腺重量的趋势,添加200 mg/kg和250 mg/kg天蚕素抗菌肽可显著提高肉兔脾脏指数和胸腺指数(P<0.05)。由此可见,在肉兔饲粮中添加天蚕素抗菌肽,可提高肉兔生产性能,促进免疫器官发育,提高免疫器官指数。     

抗菌肽的研究进展

近年来,随着传统抗生素抗药性的产生,人们对于抗菌肽的研究日益关注。抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在于生物界,是先天免疫的重要防御物质,具有广谱抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,且不易产生耐药性。文章主要对于抗菌肽的历史、分类及结构特征、作用机制、研究进展、应用前景等方面进行综述,抗菌肽将成为继青霉素等传统抗生素之后又一类重要的新型抗菌药物。     

鳕鱼鱼鳔抗氧化肽制备工艺研究

本研究以鳕鱼(Gadus morhua)鱼鳔为原料,选用6种不同蛋白酶对其进行酶解,通过比较酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除能力,筛选出最佳蛋白酶为复合蛋白酶。通过单因素实验与响应面优化实验,确定最佳提取工艺：酶解时间为6 h、pH为7.21、温度为58.56℃、酶添加量为200 U/ml。研究结果显示,DPPH自由基清除率为61.1%,与理论值62.0%接近。鳕鱼鱼鳔肽体外清除自由基能力实验发现,酶解产物对羟基自由基与超氧阴离子自由基具有一定的清除能力,同时,具有较好的亚铁离子螯合能力。体外模拟胃肠消化后多肽的抗氧化活性变化,结果显示,体外模拟消化产物水解度有增加,对自由基的清除能力与亚铁离子螯合能力有一定的下降,其可能原因为,经模拟胃肠消化后多肽的结构发生一定的变化,导致了抗氧化活性的变化。     

Exogenous polyunsaturated fatty acids (PUFAs) influence permeability,antimicrobial peptide resistance,biofilm formation and membrane phospholipid structure in an A-layer and non-A-layer strain of Aeromonas salmonicida

Aeromonas salmonicida is a Gram-negative bacterium that can infect a wide host range of fish populations, including salmonids and non-salmonids as well as freshwater and marine life. Some strains of A. salmonicida cause the disease furunculosis, which can cause lethargy, intestinal inflammation, ulcers, haemorrhaging and death. The infection is spread through fish-to-fish contact, and the presence of infection can have devastating effects on cultivated fish populations. The purpose of this study was to explore the ability of non-A-layer and A-layer A. salmonicida strains to incorporate polyunsaturated fatty acids (PUFAs) into their lipid profile and test the phenotypic effects thereof. Lipids were extracted from PUFA-exposed cultures and analysed for lipid modification by thin-layer chromatography and ultraperformance liquid chromatography-mass spectrometry, showing A. salmonicida, regardless of A-layer, capable of incorporating all seven of the PUFAs studied. Phenotypic effects were determined through the use of assays that tested for biofilm formation, membrane permeability and cyclic peptide susceptibility. Temperature-dependent effects on biofilm formation were observed, and PUFA exposure showed significant (p < .001) increases in membrane permeability as tested by the uptake of the hydrophobic compounds crystal violet and ethidium bromide. Additionally, some PUFAs elicited modest protection and vulnerability against the membrane-targeting cyclic peptides polymyxin B (PMB) and colistin. The diverse, strain-specific responses to exogenous PUFAs may allude to evolved adaptive strategies that enhance survival, persistence and virulence of non-pathogenic and pathogenic members of bacteria that oscillate between environmental and fish host niches.     

植物源功能活性多肽研究进展

为了促进开发利用更多植物源功能活性多肽,本文归纳总结了植物源功能活性多肽提取、制备、分离、鉴定和功能验证等方面的研究,比较分析不同研究方法和应用结果的差异,总结了当前植物源功能活性多肽研究主要存在问题,提出今后应在降低提取成本和加强标准体系建设等方面开展工作,为未来植物源功能性多肽研究奠定基础。