鸡肠道定殖乳酸杆菌分离鉴定及药物敏感性分析

为筛选分析鸡肠道内定殖乳酸杆菌及其对抗生素药物敏感性,选取健康鸡肠道内容物,利用MRSCa CO3培养基平板,42℃厌氧培养,选择革兰氏阳性、不运动、无芽孢、杆状细菌检测过氧化氢酶、氧化酶和硝酸盐还原活性,糖发酵反应管作生化反应表型鉴定,利用PCR扩增16S r RNA并测定序列。结果表明,获得8株乳酸杆菌,其中包括3株Lactobacillus crispatus、2株Lactobacillus johnsonii、2株Lactobacillus salivarius和1株Lactobacillus saerimneri。8株乳酸杆菌在37和42℃均生长良好;抑菌试验表明,对革兰氏阳性及阴性细菌均有一定抑菌活性。体外粘附试验表明,8株乳酸杆菌均具有一定粘附特性,可在肠道内定殖。抗生素敏感性试验表明,8株乳酸杆菌对多种抗生素敏感。     

热敏肠毒素促进产肠毒素大肠杆菌对小肠上皮细胞系IPEC-J2的黏附的初步研究

本试验利用PCR技术,以K88ac标准株C83902基因组DNA为模板扩增出热敏肠毒素(heat-labile toxins,LT)基因,大小约1.1 kb。将其克隆入表达质粒载体pACYC184,构建和筛选出含正确插入LT基因的pACYC-LT重组质粒。采用同样方法,构建和筛选出两种含点突变LT基因的重组质粒(pACYC-LT72和pACYC-LT192)。进一步将上述重组质粒DNA转化入不表达任何毒素的大肠杆菌SE5000株。GM1-ELISA结果表明,上述重组菌均能在体外正常表达LT毒素蛋白。以猪小肠上皮细胞系IPEC-J2为模型,比较了表达和不表达LT的细菌对细胞黏附性能。数据表明,LT的表达使细菌对肠上皮细胞的黏附效应明显增加(12.3±3.4倍)。两种LT毒素蛋白的单氨基酸突变体的表达证明了LT毒素的ADP核糖基化作用对其增强致病菌对肠细胞的黏附作用是必要的。蛋白激酶A的抑制剂Rp-cAMP、腺苷酸环化酶的抑制剂DDA和LT毒素的受体GM1都可阻断LT毒素对细菌黏附性能的提升作用。     

乳铁素参与乳房链球菌对乳腺上皮细胞的粘附

免疫印迹试验表明，试验用的3株乳房链球菌（Streptococcus uberis)菌株均可与乳铁素（Lactoferrin)结合。培养基中加入乳铁素或乳清可以显著促进细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附，抗乳铁素抗体可以特异性地抑制乳铁素或乳清预处理细菌与乳腺上皮细胞的粘附。乳铁素在细菌和细胞之间起着桥梁分子作用。有助于细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附和乳腺感染的建立。     

Adherence of Staphylococcus intermedius to canine corneocytes in vitro

This study investigated the in vitro adherence of Staphylococcus intermedius to canine corneocytes, collected from a healthy dog using double-sided adhesive tape. Adherence was shown to depend on duration (P < 0.001) and temperature of incubation (P < 0.001) and the concentration of bacteria (P < 0.001). Isolates of S. intermedius from lesions of pyoderma were not generally more adherent to healthy canine skin than were isolates from healthy dogs. Significant differences in adherence were demonstrated between individual isolates within both groups (P < 0.001). The study suggests that among S. intermedius there is no correlation between virulence and adherence to canine corneocytes in vitro. The finding may be important for the potential use of avirulent variants of S. intermedius as antagonistic strains against canine pyoderma. However, more studies are needed to compare the adherence of the isolates to skin cells obtained from dogs with diseases predisposed to pyoderma.     

白色念珠菌和鼠伤寒沙门氏菌的荧光标记及其对细胞粘附作用的影响

比较了几种荧光染料标记白色念殊菌和鼠伤寒沙门氏菌的效果及其对病菌生长和与Hela细胞粘附能力的影响，旨在为建立简便有效的荧光标记方法奠定基础。将2种致病菌分别在添加了罗丹明B、荧光素Na盐或吖啶橙的LB培养液，37℃条件下培养1d，结果发现这2种致病菌都可以被荧光素Na盐标记，鼠伤寒沙门氏菌还可以被罗丹明B标记，但这2种致病菌都不能在吖啶橙中生长。测定致病菌荧光强度发现，随罗丹明B标记剂量的增加，致病菌荧光强度增强，而荧光素Na盐小剂量组处理的致病菌荧光强度最强。此外还发现，致病菌与Hela细胞的粘附不受荧光标记的影响。     

干酪乳杆菌对产肠毒素大肠杆菌粘附Caco-2细胞抑制作用的研究

为研究干酪乳杆菌(L.casei)对人结肠癌Caco-2细胞的粘附特点及抑制产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)粘附Caco-2细胞的能力,本研究将不同浓度的L.casei和ETEC K88与分化完全的Caco-2细胞共培养2 h和4 h后,采用平板计数法和革兰染色法计算每个细胞上粘附菌的个数,评价L.casei的粘附特点及其抑制ETEC K88对Caco-2细胞的粘附能力,并分析其影响因素。结果表明,L.casei与ETEC K88均可以粘附至Caco-2细胞表面,并且随菌液浓度的升高和培养时间的延长,粘附的数量显著增加(p0.05)。L.casei浓度越高,抑制ETEC K88粘附至细胞表面的能力越强,并与菌液添加顺序有关,但培养时间对其影响不显著(p0.05)。本研究为L.casei抑菌作用机制的研究提供了实验依据。     

禽大肠杆菌菌毛粘附特性的研究

用透射电镜观察了鸡大肠杆菌的３个致病菌株ＧＬ７（Ｏ５０）、ＨＢ５（Ｏ７８）及ＴＧ１８（Ｏ８８），发现在营养肉汤中于３７℃培养均表达菌毛，但在１８℃培养不表达菌毛，用３７℃培养的大肠杆菌对鸡气管粘膜做粘附试验，并用扫描电镜观察，发现它们对体内体外的鸡气管均可粘附，但１８℃培养的大肠杆菌均缺乏这种粘附作用。采用粘附抑制试验测定这３种菌株对体外鸡气管节段粘附的特异性，结果是抗这３种细菌菌毛的抗体能显著抑制各自相应的菌株对气管上皮的粘附；Ｏ７８株和Ｏ８８株对气管上皮的粘附作用可被甘露糖显著抑制，表明甘露糖对介导菌体对气管粘膜上皮细胞受体起重作用。用甘露糖不能抑制Ｏ５０菌株对气管上皮的粘着，表明该菌体的粘附作用不由甘露糖介导。用高碘酸钠处理能抑制所有菌株的粘附作用，再次表明细菌对气管上皮的粘附作用是由单糖介导的     

高锌对雏鹅红细胞免疫功能的影响

1日龄天府肉鹅 2 0 0只 ,随机均分为 4组 : 组 ,饲喂基础日粮 (日粮 Zn10 0 m g/ kg,对照组 ) ; 组 ,饲喂基础日粮 Zn 90 0 m g/ kg; 组 ,饲喂基础日粮 Zn 14 0 0 mg/ kg; 组 ,饲喂基础日粮 Zn 190 0 mg/ kg。试验期 7周。用C3b受体花环和免疫复合物花环试验检测高锌对红细胞免疫功能影响的动态变化。结果 :饲粮高锌导致雏鹅红细胞C3b RR花环率降低 ,红细胞免疫粘附能力下降。 、 组 C3b RR花环率 3周龄时显著低于对照组 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) , 组从 2周龄开始极显著低于 组 ;加锌剂量越大 ,C3b RR花环率下降辐度越大。 、 组红细胞 IC花环率 2周龄时显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,随后 、 、 组 IC花环率均程度不同地升高 ,以 组变化最明显 ,从 3周龄开始与 组比较差异显著或极显著 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,且 IC花环率的升高与加锌剂量之间存在正相关