放线菌素X2高产菌株的抗药性致死突变标志的诱变筛选研究

链霉菌702菌株所产抗细菌活性物质为放线菌素X2,为了提高其发酵单位,试验采用了林可霉素对放线菌素X2产生菌———链霉菌702孢子致死标志的UV诱变筛选。试验结果表明,紫外作用20 s时链霉菌702林可霉素致死标志的突变率高达20.77%,抗药性突变菌株与产放线菌素X2高产菌株的正突变率达25%,效价提高20%以上达10%,从突变菌株中摇瓶筛选到42-3473菌株,摇瓶发酵生物效价达2 062μg/mL,比初始菌株生物效价提高了70%。     

链霉菌702所产抗细菌组分S2的分离纯化

用硅胶柱层析进行链霉菌702所产抗细菌物质的初步纯化,柱层析硅胶为160~200目,以乙酸乙酯作为洗脱剂,收集R f值为0.46的洗脱液,45℃减压浓缩后在-20℃下静置24 h得到黄色针状结晶(组分S2)。此结晶甲醇溶解液经紫外吸收光谱测定结果表明,该抑细菌活性物质在199 nm有强吸收峰,而在240.2 nm处有弱吸收峰。此结晶用HPLC分析得到分离抑细菌物质的最佳条件为流动相:乙腈溶液600 g/L,检测波长200nm,从HPLC图谱峰面积来看有效物质含量达到961.1 g/L。使用制备型液相色谱进行扩大制备,收集峰尖物质,冻干后可得红色絮状物,此物质经生物检测,其抑菌效果良好,再经分析型液相色谱分析,可得其有效物质达994.7 g/L。     

南昌链霉菌发酵条件的研究

通过单因子及正交实验对南昌链霉菌“116-5.8-64”菌株的发酵条件进行研究。结果表明,比较理想的发酵条件为起始pH8.0,培养温度30℃,装液量30 mL/250 mL锥形瓶,培养时间为8 d。在此条件下,南昌链霉菌“116-5.8-64”的产素单位比原始发酵条件下提高了25.32%。     

链霉菌SR-11抑菌活性物质的理化性质初步研究

从四川各县姜土土壤中分离得到1株放线菌SR-11菌株,经初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces).该菌株对姜瘟青枯假单孢杆菌及11种供试菌(其中包括3种病原细菌和8种病原真菌)都有较强抑制作用.对SR-11菌株发酵液的粗分条件和拮抗物粗品的性质进行了研究,结果表明,以体积比为1∶1的乙酸乙酯萃取活性物质最为可行,所得的橙黄色活性粗提物,在37～100℃,pH值3～11处理10～30 min以及胰蛋白酶和蛋白酶K处理1 h后,对青枯假单孢杆菌的抑菌活性不变,说明该物质对热、酸、碱及酶的稳定性强.粗品在官能团反应中,茚三酮反应呈阳性,坂口反应呈阴性,与新霉素的反应结果一致而与链霉素的反应结果相反,说明该物质不是链霉素而可能是新霉素.     

玫瑰孢链霉菌NRRL11379产达托霉素前体物A21978C的发酵培养基优化

[目的]对玫瑰孢链霉菌NRRL 11379进行发酵培养基优化,寻找产物A21978C较好的发酵培养基配方。[方法]从16种发酵培养基中筛选较好的培养基,通过单因子试验和正交试验进行优化。[结果]得到玫瑰孢链霉菌NRRL 11379产达托霉素前体物A21978C组分的最佳发酵培养基为:葡萄糖1%、可溶性淀粉4%、黄豆粉1%(、NH4)2SO40.3%、MOPS 6%、K2SO40.8%、NaCl 0.1%。[结论]优化后的产量约为60 mg/L,比优化前提高9.2倍。     

多功能放线菌Act12 对土传病原真菌的拮抗性及其鉴定

采用琼脂块法及抑菌试验, 研究了多功能放线菌Act12 对6 种常见土传病原真菌的拮抗作用; 采用形态特征、生理生化特性及16 S rDNA 序列分析, 确定了Act12 的分类地位。结果表明, Act12 对6 种供试土传病原真菌具有不同程度的拮抗作用, 其中, 对木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)和尖孢镰刀菌西瓜专化型(F. oxysporum f. sp. niveum)的拮抗圈直径分别达到20.5 mm 和18.4 mm; 培养48 h, Act12 无菌发酵滤液对木贼镰刀菌的抑菌率达到83.2 %。菌株显微形态、培养特征、生理生化特性及16 S rDNA 序列分析结果表明, 多功能放线菌Act12 为链霉菌属的密旋链霉菌(Streptomyces pactum)。     

Soil actinomycetes as potential biofungicides

The biological control of fungal diseases in plants is considered an efficient and environmentally friendly alternative or supplement to fungicides. Soil antagonistic streptomycetes are particularly suitable for the biological control; they proved to be highly efficient in reducing the incidence of fungal pathogens. Streptomycetes isolated from the podzolic soils were evaluated for the biosuppression of fungal populations. Seventeen strains of streptomycetes (out of the total 279 isolates) were found to be strongly antagonistic to fungal pathogens in vitro and were selected for further experiments in situ. The full protection of plants against Fusarium spp. was obtained with the Streptomyces hygroscopicus strain K49.     

利迪链霉菌A02诱导番茄抗灰霉病作用机理研究——对植株两种PR蛋白和总酚的影响

为了研究新型链霉菌生防菌株A02诱导番茄抗灰霉病的作用机制,利用利迪链霉菌A02的发酵液和番茄灰霉病菌,对番茄植株进行诱导和接种处理,采用分光光度法,测定处理前和处理后1-5 d番茄叶片组织中2种PR蛋白(几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶)和总酚含量的变化。试验结果显示,不接种灰霉病菌而单独诱导处理、接种灰霉病菌后诱导处理和诱导处理后接种灰霉病菌这3种处理,都能显著地提高番茄植株几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性,且能提高总酚的相对含量,其中诱导处理中,酶活性和总酚相对含量提高的较为明显,酶活性峰值和总酚相对含量峰值都较高。通过试验,初步证明了利迪链霉菌A02发酵液诱发了番茄体内2种防御酶活性的提高和酚类物质的积累,增强了番茄植株抗灰霉病的防御体系。     

拮抗油菜菌核病菌的链霉菌分离筛选与鉴定

从甘肃省河西走廊改良后的盐碱地分离链霉菌用于油菜菌核病菌的拮抗研究,并对拮抗菌进行鉴定。分离得到10株不同菌落形态的链霉菌,其中有2菌株对油菜菌核病有拮抗作用,编号Ⅲ22-3-3和Ⅲ22-3-12。与油菜菌核病进行对峙培养结果发现,Ⅲ22-3-3和Ⅲ22-3-12抑菌圈直径分别为1.2和0.9cm;离体叶菌丝接种试验表明,Ⅲ22-3-3和Ⅲ22-3-12对油菜菌核病菌的防治效果分别达63.5%和49.1%;Ⅲ22-3-12能在油菜菌核上定殖并寄生分解菌核,同对照相比菌核萌发率下降18.2%;通过形态培养特征、生理生化特征和16S rDNA鉴定表明,Ⅲ22-3-3为产水链霉菌(Streptomyces hydrogenans),Ⅲ22-3-12为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)。 [     

雷帕霉素产生菌吸水链霉菌NRRL5491接合转移系统的建立

对标准的链霉菌接合转移方法进行优化建立起适用于吸水链霉菌NRRL5491的接合转移系统。40℃温浴20 min为孢子的最佳热激处理条件;整合型质粒pSET152的接合转移效率是穿梭型质粒pOJ446的3~6倍;当阿泊拉霉素覆盖浓度为1μg/mL时,pSET152的接合转移效率是50μg/mL时的4.6倍,而pOJ446接合转移效率相应提高了2.4倍;MS培养基上接合转移效率是SY琼脂培养基上的3.4倍。采用最适优化条件时,接合转移频率可达到2×10-6,足够用于基因置换等遗传操作。