甘蓝型油菜烯脂酰-CoA还原酶基因BnECR的克隆及功能分析

反式烯脂酰-CoA还原酶(trans-2, 3-enoyl-CoA reductase, ECR)是催化超长链脂肪酸(VLCFAs)合成的脂肪酰-CoA延长酶之一。根据已报道拟南芥等的ECR基因设计引物,采用RACE (rapid amplification of cDNA ends)方法从甘蓝型油菜中克隆ECR的全长cDNA序列和对应的基因组序列,命名为BnECR (GenBank登录号分别为FJ899705和FJ899706)。序列分析结果显示,BnECR的全长cDNA序列为1 328 bp,对应的基因组序列为2 093 bp,由4个外显子组成,在ORF的上、下游分别有一个163 bp的5′UTR和一个232 bp的3′UTR。根据编码区预测BnECR前体蛋白为一个310个氨基酸残基的多肽链,包含ECR蛋白的重要功能位点K₁₄₄、R₁₄₅及一个NAD(P)H结合基序G₂₂₅SGGYQIPR/HG₂₃₄。NCBI Blastn、氨基酸序列多重比对及保守域分析表明, 该基因与拟南芥AtECR基因的同源性最高,是对应拟南芥AtECR的垂直同源基因。RT-PCR分析表明,BnECR基因在甘蓝型油菜根、茎、叶、花及角果中均有表达,其中在茎中的表达量最高。BnECR在高芥酸材料种子发育中后期的表达量显著高于低芥酸种子,表明BnECR可能参与甘蓝型油菜芥酸的合成。将BnECR克隆到酿酒酵母的穿梭表达载体中,分别转化野生型酵母By4743和突变体菌株YDL015c,添加半乳糖诱导表达。气相色谱分析表明,BnECR在酿酒酵母中有效表达,转化菌株中的芥酸(C22:1)占总脂肪酸含量的1.34%,比对照增加了52%;对突变体的转化结果表明芥酸含量恢复到野生型水平。     

二氧化氯对苹果表面和鲜榨苹果汁中酿酒酵母1450的杀灭效果

利用二氧化氯(ClO₂)对水、苹果汁中和苹果表面的酿酒酵母1450(Saccharomyces cerevisiae)进行杀菌处理。结果表明：6、12 mg/L的ClO₂处理15 min使水中酵母分别减少(5.81±0.12)和(6.20±0.05)lg cfu/mL；100 mg/L的ClO₂对苹果汁中酵母的杀菌作用不明显，200 mg/L的ClO₂处理1 h可将果汁中(3.79±0.04)lg cfu/mL的酵母完全杀死，使果汁中(6.48±0.03)lg cfu/mL的酵母减少(3.67±0.05)lg cfu/mL，300 mg/L的ClO₂可将苹果汁中(6.52±0.06)lg cfu/mL的酵母完全杀死；10、20、30和40 mg/L的ClO₂处理1 h使苹果表面接种量为(4.95±0.02)lg cfu/mL的酵母数分别减少(3.41±0.02)、(3.64±0.08)、(3.80±0.04)、(4.47±0.09)lg cfu/mL，50 mg/L的ClO₂处理1 h，可将接种于苹果表面的酵母全部杀死，接种量进一步增加，ClO₂对苹果表面酵母的杀灭效果将会减弱；ClO₂处理对苹果汁的理化指标影响较小。     

Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae

苹果酸－乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸－乳酸酶基因重组表达质粒的构建，利用来自重组质粒pLmleA的mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件，以大肠杆菌－酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白，斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到     

灭活黑曲霉与中期啤酒酵母原生质体融合的研究

用ＰＥＧ促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉ＡＭＳ－１１的原生质体与细胞分裂中期折啤酒酵母ＲａｓｓｅⅫ原生质体融合，在选择性培养基上获得了能利用羧甲纤维素作唯一碳源的杂种酵母菌株ＦＡＳＳ１及ＦＡＳＣ１，经测定其ＤＮＡ量，蛋白质电泳谱带，生长曲线和碳源同化等项目，它们将具有双亲菌株的特征性状。     

土壤中葡萄酒酿酒酵母菌种的选育

从宜宾葡萄产区分离纯化得到4株酿酒酵母菌株,并以生产用干性活酵母为参照,进行了不同梯度酒精度、糖度、酸度和SO_2的耐受能力测定,最终筛选出1株发酵性能优良的菌株Yp-4为当地葡萄酒酿制待开发菌株。     

酒精发酵非结构动力学模型及其参数估计

对1株产高浓度酒精的酿酒酵母的间歇发酵动力学进行了研究。建立了非结构发酵动力学模型, 以描述高基质(葡萄糖)和高产物(酒精)浓度条件下的酒精间歇发酵过程,采用改进遗传算法对非结构发酵动力学 模型中的参数进行了求取,并将该模型用于预测24．7％初糖浓度下的酒精间歇发酵,预测结果显示该模型可应用 于高基质(葡萄糖)和高产物(酒精)浓度条件下的酒精发酵过程。     

二元复合菌不同菌种配比对固态发酵豆粕营养价值的影响

在混菌发酵条件下,研究枯草芽孢杆菌和啤酒酵母不同添加比例对豆粕营养价值的影响,观察发酵前后豆粕蛋白和水溶性总肽含量、氨基酸和蛋白质结构组成以及植酸含量的变化。试验按照菌种配比不同设为4组,分别是:V(枯草芽孢杆菌)∶V(啤酒酵母)=1∶1(Ⅰ组),2∶1(Ⅱ组),1∶2(Ⅲ组)和未发酵试验组,每组3个重复。结果表明:(1)与未发酵试验组相比,3个发酵试验组的蛋白含量出现显著增加(P0.05),以试验组Ⅰ增加率最高,为14.09%,而3个发酵试验组间差异不显著(P0.05);(2)发酵后豆粕蛋白质分子量变小,水溶性总肽含量随枯草芽孢杆菌添加比例的增加而显著上升,而植酸含量则显著下降(P0.05),以试验组Ⅱ变化最大,水溶性总肽增加了678.47%,植酸降低了38.81%;(3)与未发酵试验组相比,游离氨基酸总量增加,试验组Ⅱ增加率最高,为256.0%,其中以Ile、Leu和Phe含量增加最多。总之,当以枯草芽孢杆菌为优势菌种进行固态发酵时,豆粕的营养价值得到较高改善。     

刺葡萄酿酒酵母菌株的分离与筛选

为寻找适合酿造刺葡萄果酒的酵母菌株,从刺葡萄原酒、新鲜刺葡萄以及经初发酵过滤所得的刺葡萄皮渣中分离提取得到90株酿酒酵母,并对经发酵试验初步筛选出的5株酵母进行了耐酒精、耐糖、耐酸和耐二氧化硫的性能测定比较,最终筛选出1株发酵性能优良的菌株(B54)。该菌株具有很高的耐酒精能力,在18%的酒精浓度条件下也能迅速启动发酵,同时在高浓度SO2(250 mg/L)条件下发酵启动最快,并能耐受2.0%浓度的柠檬酸,较其他菌株具有更强的耐酸性,因此可作为刺葡萄酿酒的专用菌株。     

高产酒精的番茄酿酒酵母的选育研究

[目的]筛选出产酒能力高、发酵速度快的番茄酿酒酵母突变株。[方法]以从番茄表面分离筛选的产酒酵母HBF-2为出发菌株,分别利用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)进行诱变,通过测定吸光度和致死率绘制出发菌株的生长曲线与致死曲线,根据诱变后菌落形态特征对菌种初筛,根据发酵酒的酒精度、残糖和总酸检测对菌种进行复筛,并对目的菌株进行遗传稳定性试验。[结果]研究表明,出发菌株HBF-2生长周期为24 h,培养10 h后进入对数生长期;利用20 W紫外灯,在照射距离为40 cm条件下,照射时间为90 s,筛选出产酒能力比HBF-2提高了18.2%的突变株UV-8;UV-8连续传代5次,番茄发酵试验结果显示该菌株有良好的遗传稳定性。[结论]研究可为番茄酒的酵母选育提供理论基础与参考。     

Suitability of live yeast addition to alleviate the adverse effects due to the restriction of the time of access to feed in sheep fed only pasture

The effect of yeast addition on intake and digestive utilization of pasture was studied in ovines under restricted time of access to forage. Eighteen wethers housed in metabolic cages and fed fresh forage (predominantly Lotus corniculatus) were randomly assigned to three treatments: forage available all day (AD); forage available only 6 h/day (R) and forage available only 6 h/day plus live Saccharomyces cerevisiae yeast (RY). Feed intake and digestibility, feeding behaviour, kinetics of passage, ruminal pH and ammonia concentration, nitrogen balance and microbial nitrogen synthesis (MNS) were determined in vivo, and ruminal liquor activity of animals was evaluated in vitro. Restricted animals consumed less than those fed all day but achieved more than 75% of the intake and spent less time ruminating (p = 0.014). Although animals without restriction consumed more feed, they had a lower rate of passage (p = 0.030). The addition of yeast did affect neither intake nor feeding behaviour, but increased digestibility. Organic matter digestibility tended to increase 11% by yeast addition (p = 0.051), mainly by a rise in NDF (27%, p = 0.032) and ADF digestibility (37%, p = 0.051). Ingested and retained N was lower in restricted animals, as MNS (p ≤ 0.045). The use of yeasts did not significantly change the N balance or MNS, but retained N tended to be higher in supplemented animals (p = 0.090). Neither ruminal pH nor ammonia concentrations were affected by the restriction, but restricted animals had a lower ruminal activity evidenced by a lower volume of gas (p = 0.020). The addition of yeast overcame this limitation, noted by a higher volume of gas of inocula from supplemented animals (p = 0.015). Yeast addition emerged as a useful tool to improve digestibility of forage cell walls in ovines under restricted time of access to forage.