山西猪场猪蓝耳病并发猪胸膜肺炎放线杆菌的病毒鉴定及细菌分离鉴定以及治疗方案

2020年2月份山西某大型规模猪场育肥猪突发呼吸困难,无过多症状表现,即突然死亡,发病率为2%,死亡率1.5%左右。实验室以病死猪为研究对象,综合死亡猪只脏器病变状况观察,无菌采集病死猪的肺脏、肝脏、脾脏病料,进行RT-PCR检测猪蓝耳病原;用含1%NAD和5%胎牛血清的TSA琼脂培养基进行细菌分离培养和纯化,经形态学鉴定、PCR鉴定、16Sr RNA基因序列进化树构建等方法,结果显示:该发病猪群为猪繁殖与呼吸障碍综合征并发猪胸膜肺炎放线杆菌感染。药敏试验结果显示:该猪胸膜肺炎放线杆菌对安普霉素、硫酸黏菌素、替米考星+氟苯尼考、替米考星+阿莫西林、氟苯尼考、头孢噻呋钠+硫酸黏菌素、头孢喹肟、头孢噻呋钠+新霉素、替米考星+头孢噻呋钠、多西环素+氟苯尼考、头孢噻呋钠+阿莫西林、阿莫西林+克拉维酸钾、头孢噻呋钠+恩诺沙星、新霉素、头孢噻呋钠、安普霉素+头孢噻呋钠敏感。对恩诺沙星耐药。本实验室根据临床及检测结果制定治疗方案,为该猪场的猪繁殖与呼吸障碍综合征并发猪胸膜肺炎的临床诊断及用药提供了理论依据。     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立

本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》     

猪瘟、猪口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗有效免疫试验初探

为推广猪瘟、猪口蹄疫和高致病性猪蓝耳病3种疫苗有效免疫,在前期开展"猪瘟疫苗(脾淋源)、猪O型口蹄疫疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗有效免疫试验"确定新的免疫程序基础上进行扩大试验,进一步验证猪瘟疫苗1头份免疫剂量足以产生可靠的免疫保护;先免疫接种猪瘟疫苗,1周后免疫接种口蹄疫和高致病性猪蓝耳病疫苗,二者有明显的协同促进作用,适宜在农村散户中使用;3种疫苗同时分点注射,相互之间干扰较大,猪瘟病毒抗体产生时间推迟,不宜推广使用。     

2010年上半年11省市规模猪场疫病监测与剖析

为了解近期发病猪场几种病毒性疫病的流行状况,采用RT-PCR和PCR方法,对2010年1月至6月期间,来自11省(市) 50个猪场共147份病料进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）、伪狂犬病毒（PRV）和猪圆环病毒2型（PCV2）检测,并采用ELISA方法对其中26个猪场458份血清样品进行伪狂犬gE野毒抗体检测。结果表明,PCV2阳性率最高,为75.3%（70/93）;PRRSV阳性率次之,为57.4%（78/136）,HP-PRRSV阳性率为43.5%（54/124）;CSFV和PRV的阳性率分别为37.7%（52/138）和21.0%（21/100）;伪狂犬gE野毒抗体阳性率为16.4%（75/458）。同时检出2种及2种以上病毒的样品占46.9%（69/147）,其中以HP-PRRSV+PCV2、CSFV+PCV2及CSFV+HP-PRRSV+PCV2三种形式最为常见。PRRSV（50.0%）是猪场繁殖障碍性疾病中的最常见病原;CSFV（56.0%）和PCV2（48.0%）是断奶前后仔猪腹泻的常见病原;HP-PRRSV（53.5%）、CSFV（50.7%）和PCV2（48.0%）是保育猪发生高热症的常见病原。该检测结果为猪场疫病的诊断与防控提供了参考。     

重组白细胞介素-2提高PRRS抗体阳性猪的猪瘟疫苗免疫效果试验

观察了重组白细胞介素-2（IL-2）对健康成年猪和PRRS抗体阳性猪的猪瘟疫苗免疫效果的影响。结果显示,重组IL-2和猪瘟疫苗一起免疫健康猪,20d后间接血凝抗体滴度达到1∶64的猪的比例为87.5％,而不注射IL-2的对照组抗体滴度可以达到这一水平的比例只有25％。给经2次猪瘟疫苗免疫但抗体滴度在1∶32以下的PRRS抗体阳性猪单独注射IL-2,20d后,注射前检测不到抗体的猪都检测到了抗体,注射前抗体滴度在1∶8～1∶16之间的猪的抗体滴度提高到1∶32～1∶64。再次用猪瘟疫苗和IL-2共同免疫,可使抗体滴度提高4倍以上。而不注射的对照组抗体滴度则略有下降。说明重组IL-2可以减轻PRRS感染所引起的免疫抑制,提高猪瘟疫苗的免疫效果。     

上海PMWS并发PRRS自然病例的病理组织学观察

对上海5例5～13周龄断奶仔猪多器官衰竭综合征（PMWS）并发猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）自然病例进行了病理组织学观察。结果：5例病猪均出现坏死性淋巴结炎、间质性肺炎以及不同程度的坏死性脾炎、间质性肾炎和肝炎。2例病猪出现心肌炎，表现为心肌纤维断裂、溶解和心肌间质中淋巴细胞局灶性浸润。2例病猪出现脑炎，在大脑白质区出现神经胶质细胞结节。     

猪瘟免疫猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后免疫应答及T细胞表型变化特征

选择17头28日龄的CSFV和PRRSV抗体均为阴性的仔猪,于试验的第1天和第14天分别对其进行猪瘟耐热保护剂活疫苗（兔源）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征Nsp2A1882—2241弱毒疫苗免疫。在免疫后的第28、42天采集外周血液,分析特异性抗体表达量和外周血T淋巴细胞表型的变化,评估猪瘟免疫对猪繁殖与呼吸综合征免疫的影响。结果显示,在CSF免疫后第28、42天,CSFV高抗组中的CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、CD4^＋CD8^＋和CD4-CD8数目均比CSFV低抗组高,CD3^＋和CD8^＋细胞数量比CSFV低抗组低;PRRS高抗组中,CD4CD8-细胞含量高于PRRS低抗组;在CSF免疫后第28天,CSFV抗体产生较高（阳性比率为73．33％）,PRRSV抗体产生较低（阳性比率仅为6．67％）。在CSF免疫后的第42天,CSF高抗组中PRRSV抗体阳性比率较CSF低抗组高8．33％。结果表明,CSFV特异性抗体产生高时能增加PRRSV特异性细胞免疫应答,增加CD4^＋细胞、CD4^＋CD8^＋细胞数量,提高机体免疫水平。CD3＋和CD4CD8-细胞应答作用值得重视。     

猪繁殖——呼吸综合征病理学的研究

本研究利用猪繁殖—呼吸综合征血清学阳性母猪生产的弱胎１日龄活仔猪１２头，经隔离饲养后，采用普通光学显微镜技术和电子显微镜技术，对实验仔猪的肺脏、脾脏、大脑、肾脏等组织器官进行了病理组织学、病毒包涵体染色和超微结构的观察。结果表明，试验仔猪体表皮下血管轻度淤血、肌肉灰白色。肺间质增宽，有不同程度的水肿，肺泡及肺泡膈水肿和炎性细胞浸润。大脑软脑膜及脑实质毛细血管淤血，透明血栓形成。肾小囊扩张、积液，肾小管出现蛋白管型或细胞管型，肾髓质出血。肝脏髓外造血较明显等病理组织学变化。肺脏、肺门淋巴结、脾脏、肝脏和大脑组织均无病毒包涵体染色反应。肺脏和脾脏巨噬细胞胞浆内观察到一些特殊的病理性结构。表现为圆形、电子密度低、直径为５０～９０ｎｍ，呈团块状或弥散性分布的颗粒。呈团块状分布的颗粒团外围似有１层囊膜包裹     

Analysis of the Immune Efficacy of Attenuated Live Vaccine in the Pig Herds Previously Infected with Wild-type Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

To evaluate the immune efficacy of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) attenuated live vaccine,this study selected 4 litters from two small pig farms (two litters each farm) and vaccinated with porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) attenuated live vaccine.Sera were collected on different days post vaccination (dpv) to detect PRRSV nucleic acid by RT-PCR,and PRRSV antibody using two different ELISA Kits,i.e.N-ELISA and G-ELISA.The results showed that PRRSV nucleic acid were positive on 0 dpv until 30 dpv in piglets and also positive on 0 dpv in the corresponding sows.All piglets were negative for PRRSV antibody on 0 dpv,but were positive on 30 dpv until 150 dpv.The positive rates detected by N-ELISA Kit were higher than those of G-ELISA Kit on 30 and 60 dpv,but lower than those of G-ELISA Kit on 120 and 150 dpv.A total of 216 sera were detected respectively by two ELISA Kits and the coincidence rate of the results was 95.83%.The P value of χ² test was more than 0.05,showing there was no significant difference between the results of two Kits.The Kappa value was 0.87,showing there was strong consistence between them.The correlation coefficient was 0.605,showing there was significantly linear correlation between them.The results indicated that the wild-type PRRSV in the previously infected pig herds could be eliminated by vaccination with attenuated live vaccine and both N-ELISA and G-ELISA Kits could be used to estimate the immune efficacy of the attenuated live vaccine effectively.