一种柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白单抗的制备及初步应用

利用原核表达的柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白（EtRP）的重组蛋白免疫BALB／c小鼠，经4次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，经间接ELISA和Western blot筛选获得一株抗EtRP蛋白的特异性单克隆抗体细胞株，命名为2E3，亚类鉴定为IgG2a。细胞上清和小鼠腹水的效价分别为1：40和1：2．56×10^4。利用该单抗对EtRP在柔嫩艾关耳球虫子孢子中的分布进行分子定位，结果显示该蛋白主要分布于子孢子的顶端；而当子孢子在DMEM培养基中41℃孵育1h后，该蛋白则分布于整个虫体。研究结果表明，成功制备了EtRP单克隆抗体，为进一步研究球虫相关蛋白功能奠定了基础。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒中和性单克隆抗体的建立和应用

用氟利昂去除法氏囊组织杂蛋白,并经甘油-酒石酸钾密度梯度离心进一步纯化,通过电镜观察、光密度测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE).证明得到的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)形态完整。将纯化的IBDV 免疫 BALB/C 鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒中和试验(VNT)检测分泌抗体,获得了6株稳定分泌抗 IBDV 中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为 NIB_1、NIB_2、NIB_3、NIB_4、NIB_5、NIB_6。还建立了检测 IBDV 的单克隆抗体双抗体 ELISA。     

抗IBDV VP2单克隆抗体制备及其免疫学鉴定

采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒弱毒Gt株,并与Tj强毒株共同免疫BALB/c小鼠.利用淋巴细胞杂交瘤技术,取其脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合, 经过3次筛选克隆, 获得8株具有分泌抗IBDV抗体的杂交瘤细胞系,并对8株单抗进行了分子生物学及免疫学方面的鉴定.间接ELISA显示获得的8株单抗只与IBDV有特异性的反应,Western-blotting表明,部分单抗能够特异地与Sf9细胞表达的VP2蛋白反应;中和试验表明8株单抗均具有中和活性,而且有3株中和效价在26以上.研究推测,8株单抗中有2株针对的表位为构象依赖性,其余6株单抗所针对的为线性中和性表位.     

抗奶牛衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合, 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选, 以有限稀释法克隆３ 次, 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） , 选择抗体分泌较高的 Ｇ２ 、 Ｆ２３ 、 Ａ 株进行详细的研究, 结果表明, 其核内染色体数为９０３５ 、９２１４ 、９４４２ ; 抗体属性为 Ｉｇ Ｇ２ａ 、 Ｉｇ Ｇ１ 、 Ｉｇ Ｍ, 用交叉 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对３ 株 Ｍｃ Ａｂ 作特异性分析, 该 Ｍｃ Ａｂ 只与奶牛衣原体抗原, 猪衣原体抗原、羊衣原体抗原发生反应,而不与沙眼衣原体抗原、伪狂犬病抗原、布鲁氏杆菌抗原发生反应。     

抗鸡IgG单克隆抗体的研究

利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与纯化鸡IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,成功地建立了5株能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株。选择产生抗体效价高、生长快的C_(44)株,扩大培养后注射于小鼠制备腹水,经硫酸铵盐析粗提后,用HRP标记,制备出McAbs酶结合物。将制备的McAbs酶结合物和多克隆抗体(PcAbs)酶结合物,采用间接ELISA,对35份鸡血清中鸡新城疫病毒(NDV)抗体以及19份鸡血清中鸡嗜血杆菌(HG)抗体进行检测,McAbs和PcAbs两者的相关系数分别为0.928和0.921,证明制备的抗鸡IgG McAbs具有特异性强、效价高的特点.     

抗破伤风毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应

应用破伤风类毒素多途径免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取小鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤在聚乙二醇（ＰＥＧ，４０００）作用下进行细胞融合，克隆化，经ＥＬＩＳＡ及毒素中和试验检测，获得了１１株具有一定毒素中和活性的单克隆抗体细胞株。经单一单抗和群单抗中和试验证实，其中４株具有较强的产生抗毒素活性，而且这４种单克隆抗体（１Ｄ９Ｂ１０、５Ｇ８Ｂ９Ｅｌ、５Ｇ８Ａ１０、５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１）协同作用可完全中和标准量毒素的攻击。     

C型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定

将灭活的C型FMDV背部皮下多点注射免疫BABL/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG1 500作用下融合,用有限稀释法进行亚克隆.以C型FMDV重组VP1蛋白为抗原,间接ELISA法筛选单抗.以O、Asial、A型FMDV以及猪水疱病病毒为抗原,间接ELISA法检测单抗特异性.获得2株抗C型FMDV的单抗3B3和6D5,亚型鉴定为IgG1、IgG3;腹水效价分别为1∶25 600和1∶51 200;中和效价分别为1∶1 280和1∶640;2株单抗与O、Asial、A型FMDV以及猪水疱病病毒间无交叉反应,表明这2株单抗为高特异性抗C型FMDV单抗.研究结果可为C型FMD的诊断及预防提供基础材料,也可用于病因学及免疫学研究.     

抗伪狂犬病病毒gG蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以大肠杆菌表达的猪伪狂犬病病毒 (PRV) g G蛋白作为抗原 ,免疫 BAL B/c小鼠 ,经细胞融合、克隆后 ,获得了1F6、2 B92株稳定分泌抗伪狂犬病病毒 g G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。 1F6、2 B9培养上清及小鼠腹水效价(EL ISA)分别为 1∶ 2 1 1 、1∶ 2 1 1 及 1∶ 10 0× 2 1 1 、1∶ 10 0× 2 1 2 。 1F6、2 B9的染色体众数分别为 87(80～ 94 )、84 (81～ 87)。经间接 EL ISA鉴定 ,1F6、2 B9单抗分别属于 Ig G2 a、Ig G3亚类。1F6、2 B9与猪伪狂犬病病毒 Ea株感染细胞的间接免疫荧光试验结果表明 ,1F6、2 B9确实为伪狂犬病病毒 g G蛋白的单抗。所得单抗与牛传染性鼻气管炎病毒 (IBRV)、猪细小病毒 (PPV)、猪繁殖与呼吸道综合征病毒 (PRRSV)之间无交叉反应     

用单抗介导的交叉ELISA对IBV毒株的分型研究

用针对IBV 3种结构蛋白的一组单抗（C1、C2、C3、J1、J2、J3）和6个不同血清型的IBV标准株（Gray株、Connectic株、Holte株、T株、M41株、Arkavas株）进行交叉ELISA试验，显示了6种不同的反应模式；与同一Mass血清型内M41、H52、H120 3毒株进行交叉ELISA反应显示出相同的反应模式；通过地方分离株和标准株与6株单抗的ELISA反应模式比较可将来自河南、山东、江苏、广东、广西、西川等省22个地方株划分为7个不同的抗原群，其中M41抗原群占10株，其仍是我国当前主要的流行型。根据两株中和单抗C2、J1与22个地方株ELISA反应结果，可将地方株分为三大类群，即与J1反应的M41类群，与C2反应的Y类群和J1、C2均不反应的第三类群，C2和J1两株中和单抗可与85％以上毒株发生反应，可为IBV制苗毒株的选择（M41和Y）提供参考依据，此种分型方法较传统的分型方法简便、快速。     

副猪嗜血杆菌OMP5单克隆抗体的制备与鉴定

用副猪嗜血杆菌（HPS）血清5型灭活菌液免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以HPS外膜蛋白5（OMP5）为抗原,经间接ELISA法筛选阳性融合孔,并用有限稀释法对筛选的阳性孔进行亚克隆,获得2株分泌抗HPS OMP5单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E2和8D9;间接ELISA法效价检测,1E2和8D9细胞培养上清抗体效价均为1∶2 560,纯化后腹水抗体效价分别为1∶204 800和1∶51 200;抗体型别鉴定,1E2和8D9分别分泌IgG2b、IgG2a型抗体;特异性检测表明,2株单抗均能特异识别OMP5。将2株杂交瘤细胞反复冻融3次复苏后仍能稳定分泌抗体。2株抗HPS OMP5单克隆抗体的成功制备,将为HPS感染快速检测方法的建立以及检测试剂的研制奠定基础。