抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的研制及应用

将纯化的猜传染性胃肠炎病毒免疫 BALB/C 小白鼠后,取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞在 PEG 存在下进行融合,HAT-1640培养液筛选,并用 ELISA 间接法检测阳性克隆。通过有限稀释法进行三次克隆化后,获得了二株稳定分泌抗 TGEV 的单克隆抗体杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞染色体皆在95条以上;其分泌抗体均属 IgG_1亚类。通过阻断试验证明其作用的特异性。对该单抗在诊断上的初步应用作了探讨。     

猪生长激素ELISA检测体系的建立

本文分别以自制猪生长激素单克隆抗体及兔抗猪生长激素IgG就影响检测elisa(酶联免疫吸附法)体系因素进行探讨,建立了检测猪生长激素的elisa方法。猪生长激素单克隆抗体的最适操作参考值为：单抗最佳包被浓度为3μg/mL,包被条件为4℃过夜,5%羊血清封闭1h,兔抗猪生长激素IgG 最佳工作浓度为2μg/mL。     

单抗对禽病原性大肠杆菌菌毛粘附抑制的研究

应用８株鸡病原性大肠杆菌研究了菌毛作为分型抗原和共粘附特性,以抗Ⅰ型菌毛单克隆抗体（单抗）ｂＧ５和甘露糖进行了抑制作用试验。在血凝试验中、单抗和甘露糖都能抑制血凝反应,说明这些株都属于Ⅰ型,通过以单抗或甘露糖的粘附抑制程序这些Ｅｃｏｌｉ株对鸡气管上皮都不能特异粘附。     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用聚乙二醇沉淀浓缩纯化猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫 BALB/C 小鼠,取其脾脏,制备淋巴细胞,与 FO 骨髓瘤细胞融合,经 EliSA 检测和有限稀释法克隆化,最后筛选出5株对SFV 的单克隆抗体杂交瘤细胞.所制成的腹水抗体,一株只对 SFV-C 发生特异性反应,四株与SFV-S,SFV-F 及 BVDV oregon 发生微弱的交叉反应.细胞上清液的 EliSA 效价为1:800～1600,腹水效价为1:10~6～10~7.     

抗猪传染性胃肠炎M蛋白单克隆抗体的制备及部分特性鉴定

以纯化的猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合、筛选,最终获得3株抗TGEVM蛋白的杂交瘤细胞系1B3、3C2、4A5,染色体平均记数为89对、92对、90对,间接ELISA检测1B3、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1/4000、1/1000、1/4000,腹水效价分别为2×10~4、2×10~5、2×10~5。通过间接ELISA做病原检测,这3株单抗不与猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪轮状病毒发生交叉反应,而与传染性胃肠炎病毒显示良好的特异性。用制备的单抗通过间接免疫荧光做病原检测,发现染色后TGEV感染的细胞培养物在胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,结果表明,所制备的抗重组TGEVM蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为TGEV准确快速的病原诊断和TGEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。     

分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用单克隆抗体制备技术,建立了分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,液氮保存4年后复苏,细胞在HAT选择培养基中生长旺盛,分泌抗体稳定,分别命名为YNF1,YNF2,YNF3,YNF4,杂交瘤细胞染色体数介于96~115条。细胞培养上清和腹水的单抗间接ELISA效价分别为1∶80~1∶160和1∶5 000~1∶10 000。在间接ELISA和夹心ELISA检测中单抗与猪瘟病毒呈特异性反应,与正常的猪、兔肾组织提取液及其血清Ig无交叉。抗体蛋白属IgG类,亚类及轻链分别为IgG1/λ,IgG2a/κ,IgG2a/λ,IgG1/λ。结果表明,4株杂交瘤是分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的细胞株,可长期传代无限分泌单抗,是进一步研究猪瘟病毒和开发敏感、特异、快速诊断猪瘟试剂盒和试纸探针的免疫学特异性试剂来源。     

小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立

以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12 80     

抗绵羊进行性肺炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用提纯的OPPV细胞抗原免疫BALB/c小鼠脾脏与SP2/0小鼠骨髓细胞融合,融合率为70%,以ELISA双抗体夹心法进行检测,阳性率为20%,经过有限稀释法克隆出1A₆、2B₈、1G₃、2G₄4株分泌抗OPPV抗原的单克隆体杂交瘤细胞株.选择抗体分泌滴度高的1A₆细胞进行了较详细的研究,结果表明,其核内染色体数为96～110条,抗体属性为IgG1,轻链为K链,IFA试验表明产生的McAb对OPPV有特异性,细胞传30代并在液氮中保存半年后复苏仍能稳定地分泌抗OPPV McAb,细胞分泌抗体的ELISA滴度腹水为6.4×10⁴,上清为640,McAb经硫基乙醇还原后在SDS-PAG上呈现2条区带,一条为重链部分,MW50000,另一条为轻链部分,MW为25000.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单克隆抗体的制备及生物学特性研究

通过差速离心和蔗糖密度梯度了心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪1（PRRSV－S1）株进行抗原纯化。免疫BAIB／c小鼠，取脾细胞与SP2／O融合，用间接ELISA和有限稀释法,获得2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为AG、BD3。ELISA交叉试验和阻断试验表明，2株单抗具有高度特异性。AG1可与PRRSV－S1，欧洲株LV，美洲株VR－2332反应，而BD3与美洲株VR－2332反尖较弱，2株单抗对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是：1：256－1：5123，腹水效价分别在1：10^3－1：10^5之间。AG1和BD3各有100条染色体，琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b，BD2属于IgM。Western blot试验表明AG1和BD3是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。     

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中应用——Ⅲ.在细菌快速检验中的应用

应用抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体(4A7),建立了适用于空肠弯曲菌快速检验的间接-ELISA和BA-ELISA。两种方法的特异性检查表明,对受试的32种其它细菌,除与幽门弯曲菌发生交叉反应外,其余均为阴性反应。对空弯菌纯培养物检测的敏感性,BA-ELISA为3.2×104个菌/mL,间接-ELISA为1.6×105个菌/mL;对细菌动态培养物检测,BA-ELISA可检出接种约5个菌/mL、间接-ELISA可检出接种约10个菌/mL的24 h增菌培养物。应用BA-ELISA对人(140份)、猪(140份)、禽类(364份)及特种经济动物(265份)标本进行检测,阳性率依次为121%、52%、58.2%和32.8%;应用间接-ELISA对人(140份)、禽类(222份)及特种经济动物(265份)标本进行检测,阳性率依次为11.4%、61.7%、31.3%。两种方法的结果均与常规培养法相差不显著,可在27h内报告结果。