基于LC-MS技术研究氟氯苯氰菊酯对西方蜜蜂工蜂幼虫代谢的影响

【目的】氟氯苯氰菊酯（flumethrin）属于第二代拟除虫菊酯类杀虫、杀螨剂,应用于蜂群除螨。由于杀螨剂具有一定的毒性,在杀死螨虫的同时也会威胁到蜜蜂的健康。本研究采用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）检测氟氯苯氰菊酯处理后的西方蜜蜂工蜂幼虫代谢物,筛选差异代谢物,并分析涉及到的代谢通路,研究氟氯苯氰菊酯对蜜蜂的毒理作用,为蜜蜂饲养提供参考。【方法】控制蜂王在空的工蜂巢脾上产卵12 h,并将产卵区域分为4组,从第5天开始分别给各组小幼虫饲喂含氟氯苯氰菊酯的糖水（0、0.5、5、50 mg·kg^-1）,剂量从第5天至第8天逐日递增（1.5、2、2.5、3 μL）,第9天采集幼虫的淋巴液。运用代谢组学中的LC-MS技术分析蜜蜂幼虫的代谢物,结合主成分分析（PCA）、偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）,筛选差异显著的代谢物,并对氟氯苯氰菊酯处理组和对照组间共同差异代谢物进行代谢通路分析。【结果】0.5 mg·kg^-1组与对照组相比,共有差异代谢物190种,共鉴定87种;5 mg·kg^-1组与对照组相比,共有差异代谢物275种,共鉴定97种;50 mg·kg^-1组与对照组相比,共有差异代谢物275种,共鉴定131种。从鉴定的差异代谢物中筛选到29种氟氯苯氰菊酯处理组共同差异代谢物,其中16种代谢物上调,12种代谢物下调,1种代谢物在0.5和50 mg·kg^-1组中下调,在5 mg·kg^-1组中上调。这些差异代谢物包括核糖、嘌呤及其衍生物、脂肪酸及其偶联物等。经代谢通路富集分析,发现差异显著（P＜0.05）的代谢通路包括氨基糖和核苷酸糖代谢、药物代谢-其他酶类、α-亚麻酸代谢等途径。【结论】LC-MS技术能够有效地分析氟氯苯氰菊酯影响下蜜蜂幼虫代谢物的变化,氟氯苯氰菊酯会引起蜜蜂幼虫体内尿苷二磷酸-N-乙酰葡糖胺、硫唑嘌呤、愈伤酸、9-羟基壬酸、氢过氧化亚油酸等物质含量异常,这些差异代谢物的变化证实了氟氯苯氰菊酯引起蜜蜂体内各种物质代谢紊乱,对这些代谢过程分析可进一步阐释蜜蜂代谢有毒化合物的机制,并为杀螨剂及其他有毒化合物对蜜蜂的胁迫提供理论依据。     

Treatment of ibuprofen intoxication with charcoal haemoperfusion in two dogs

ABSTRACT

Case history: Two dogs presented separately to the Small Animal Hospital, University of Florida (Gainsville, FL, USA) for ingestion of ibuprofen. The first dog ingested 561.8?mg/kg ibuprofen in addition to paracetamol and caffeine and vomited prior to admission. This patient also received fluid therapy for 8 hours prior to charcoal haemoperfusion. The second dog ingested 500?mg/kg of ibuprofen and the owners induced vomiting with hydrogen peroxide prior to presentation. Due to the severity of clinical signs, both patients were treated with charcoal haemoperfusion.

Clinical findings: The concentrations of ibuprofen in the blood of the dogs prior to treatment were 478 and 301?mg/L. During the treatment ibuprofen concentrations were reduced by 95.8% and 45.5%, respectively, with no treatment side effects and minimal clinical signs after treatment.

Diagnosis: Toxicity due to ingestion of ibuprofen toxicity that was successfully treated with charcoal haemoperfusion.

Clinical relevance: In the cases described here minimal benefit was seen after 3 hours of treatment using one haemoperfusion cartridge. This is in contrast to a previously published report in which dogs were treated for 6 hours with two charcoal haemoperfusion cartridges. This suggests that one cartridge may be sufficient. The amount of ibuprofen ingested was not a reliable predictor of the concentration in blood at the initiation of treatment. Charcoal haemoperfusion is an effective means of reducing plasma concentrations of ibuprofen, however, its use may be limited by its cost and availability.     

乙烯利原药液谱串联质谱分析方法研究

本文介绍一种快速,有效的分析方法,采用液谱-串联四级杆质谱仪,以乙腈和水作为流动相,用2.1×50mm Poroshell 120 SB-C182.7-Micron柱和ESI源,在负离子模式下,外标法定量测定乙烯利原药的含量,该方法的线性相关系数为:0.998 6,标准偏差为:0.39,变异系数为:0.40%,平均回收率为:98.53%,结果表明:该方法可用于测定乙烯利原药与制剂的含量。     

LC-MS/MS测定猪尿中的黄曲霉毒素M1

建立LC-MS/MS检测猪尿中黄曲霉毒素M1的含量。猪尿样用超纯水稀释定容,充分漩涡振荡后经免疫亲和层析柱净化,甲醇洗脱,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测(MRM)方式检测。外标法定量。采用0.1%甲酸:乙腈+甲醇溶液(1+1)为流动相,梯度洗脱。0.3mL/min的流速。在0.01μg/kg～0.50μg/kg范围内具有良好的线性关系,最低检测限为0.01μg/kg,回收率在70%～95%之间。此法操作简便、快速、灵敏、准确、样品处理简便易行,适用于测定猪尿中的黄曲霉毒素M1。     

水产品中氨基糖苷类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法研究

建立了高效液相色谱一串联质谱方法测定水产品中链霉素、双氢链霉素、新霉素、庆大霉素和卡那霉素5种氨基糖苷类抗生素的检测方法。样品中的氨基糖苷类抗生素用磷酸缓冲溶液提取液提取后,经固相萃取进行净化,改进了前处理方法,并对液相和质谱的条件进行了优化。通过实际样品的添加回收试验,方法的定量下限（S／N=10）为10．0μg,／kg。三个添加水平分别为10．0、20．0和50．0μg／kg时,龙虾、鲴鱼的加标回收率均在60％一110％,日内相对标准偏差不超过15．0％。结果表明,该方法简单、灵敏、特异性强,适用于水产品中氨基糖苷类药物残留的检测和确证。     

河水及淤泥中农药残留的液质联用检测及江苏稻田区污染现状

采集江苏稻田种植区872份河水和近河淤泥样品,分析稻田常用农药对河水污染现状,建立丙溴磷、三唑磷、丙环唑和咪鲜胺液质联用检测方法。河水样品经饱和氯化钠溶液和二氯甲烷+丙酮混合溶液萃取,淤泥样品经无水硫酸钠和氯化钠及丙酮+正己烷混合溶液提取,C18反相色谱柱分离,三重串联四极杆质谱仪检测。结果表明:建立的液相色谱质谱联用仪检测方法对丙溴磷、三唑磷和丙环唑在河水和淤泥中的检测限均为0.001 5mg.kg-1,定量限均为0.005mg.kg-1。咪鲜胺在河水和淤泥中的检测限均为0.003mg.kg-1,定量限均为0.010mg.kg-1。各农药在0.01～1.0μg.mL-1范围内与响应值线性相关,决定系数均在0.99以上。对丙溴磷、三唑磷和丙环唑在河水和淤泥中分别添加0.005、0.05和0.5mg.kg-1 3个水平,对咪鲜胺在河水和淤泥中分别添加0.01、0.1和1.0mg.kg-1 3个水平,结果表明,平均回收率为80%～110%,相对标准偏差均在20%以内。对江苏稻田种植区河水及淤泥样品进行分析,河水中丙溴磷、三唑磷和咪鲜胺检出率分别为3.7%、1.7%和2.5%,淤泥中三唑磷检出率为1.4%,表明河水污染程度高于淤泥。试验建立的方法简便、快速,且灵敏度、准确度高、精密度好,符合农药残留检测规范要求,适用于高通量农药残留检测。     

瑞香狼毒活性物质对草莓灰霉病菌的抑制作用

 为探索瑞香狼毒（Stellera chamaejasme）提取物对草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）的抑菌活性,采用生物活性跟踪法对瑞香狼毒的抑菌活性成分进行初步研究,柱层析法对其甲醇萃取物高活性成分进行分离,经LC-MS和核磁共振仪对最终成分进行结构鉴定,结果表明瑞香狼毒最高活性流份3的主要抑菌活性成分为伞形花内酯,并且随着浓度的提高,该活性成分对草莓灰霉病菌的抑制作用也增强,其抑菌中浓度为1.52 mg·mL^-1。通过扫描电镜观察流份3对草莓灰霉病菌超微结构的影响,结果发现伞形花内酯严重破坏了草莓灰霉病菌孢子和菌丝体的形态结构。     

超高效液相色谱串联质谱法测定马铃薯和土壤中氟啶胺残留

建立超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱快速测定马铃薯和土壤中氟啶胺残留的分析方法。样品经固相萃取净化,以液相色谱-质谱联用仪测定和确证,外标法定量。结果表明。该方法对氟啶胺的最低检出限为8μg／kg。在8．150-521．6μg／L线性范围内,相关系数为0．9999,回收率在81．96～116．66％之间,相对标准偏差〈10％（n=5）。     

超高效液相色谱串联质谱测定黄瓜和土壤中乙嘧酚磺酸酯残留量

建立超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱快速测定黄瓜和土壤中乙嘧酚磺酸酯残留的分析方法,该方法具有快速、准确、灵敏度高,检测限低等特点。样品经固相萃取净化,应用超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱仪选择反应监测(SRM)定量法检测乙嘧酚磺酸酯。结果表明,该方法对乙嘧酚磺酸酯的最低检出限LOD为7.734μg/kg。在7.552～241.675μg/L线性范围内,相关系数为0.996 7,回收率在85.30%～118.17%之间,相对标准偏差<10%(n=5)。     

阿诺宁两活性成分在大鼠肝微粒体中的酶动力学研究

[目的]建立番荔枝内酯类化合物squamocin和bullatacin的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,并测定其在大鼠肝微粒体中的酶动力学参数。[方法]建立微粒体孵育体系,启动反应后测定不同时间孵育体系内剩余的squamocin和bullatacin的浓度,用底物消除法计算其酶动力学参数。[结果]在大鼠肝微粒体中,squamocin和bullatacin的表观米氏常数KM值分别为(1.6±0.5)和(2.0±0.4)μmol/L。[结论]该方法适用于squamocin和bullatacin的酶动力学常数的测定。