水牛RNA聚合酶Ⅲ启动子的克隆与鉴定

[目的]获得有效的水牛RNA聚合酶Ⅲ启动子序列,为开展水牛源细胞的基因特异沉默研究奠定基础.[方法]通过启动子上、下游保守序列对水牛源启动子7SK、U6进行克隆和启动子关键顺式作用元件识别,利用一段针对EGFP的shRNA片段（shEGFP）对水牛7SK、U6启动子进行功能性分析,然后分别在水牛源及鼠源细胞中与pEGFP-N1共转染,转染48h后用荧光显微镜检测EGFP的表达情况,并用流式细胞仪和荧光实时定量PCR检测EGFP沉默表达情况.[结果]克隆获得水牛7SK、U6启动子序列分别为430和357 bp,其OCT-1（或CACCC盒）及TATA盒高度保守.连接shEGFP后与pEGFP-N1共转染细胞,通过荧光显微镜可观察到细胞发生了明显的荧光表达沉默现象;通过流式细胞分析,发现水牛7SK和U6启动子引导的shEGFP在水牛源细胞中沉默效率高达93.82％和87.45％;荧光实时定量PCR检测结果显示,在转染bu7SK-shEGFP和buU6-shEGFP的水牛源BFF细胞中,EGFP表达水平均显著低于其他物种启动子的细胞转染组（P＜0.05）,而在鼠源PT67细胞中,水牛启动子的启动效率与其他物种启动子差异不显著（P＞0.05）.[结论]水牛7SK和U6启动子可高效启动shRNA表达,且具有一定的物种特异性.     

油橄榄叶提取物对海洛因依赖小鼠肺组织结构及IL-1β和TNF-α表达的影响

将100只健康小鼠皮下注射海洛因(10mg/kg)40d,然后分别用不同剂量的(50、100、200mg/kg)油橄榄叶提取物(OLE)进行皮下注射治疗,观察肺脏组织结构的变化,检测肺脏中白介素-1β(interleukin-β,IL-β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-A,TNF-α)的表达情况.结果表明:与模型对照组相比,OLE使海洛因依赖小鼠肺泡直径、肺泡隔厚度减小,肺脏中IL-1β和TNF-α的表达明显减弱,且呈较好的量效关系,表明OLE能够对海洛因造成的肺损害起到保护作用,其作用机制可能是OLE抑制了IL-1β和TNF-α的在肺中的表达.     

马铃薯新品种毕薯6号的选育

为丰富马铃薯品种类型,贵州省毕节市农业科学研究所利用大西洋作母本、米拉作父本进行杂交,于2014年育成马铃薯新品种毕薯6号(黔审薯2014001-1),该品种在贵州省2012—2013年马铃薯新品种区域试验的平均产量为2 038.41kg/667m2,比对照米拉增产45.65%;2013年贵州省生产试验平均产量2 115.25kg/667m2,比对照米拉增产35.65%。适宜贵州省海拔495~2 450m地区及类似生态区推广种植。     

6-三氟甲基-3,4,5,6-四氢嘧啶-2(1H)-(硫)酮类化合物的合成及其除草活性

以取代苯甲醛、三氟乙酰乙酸乙酯和脲(或硫脲)为原料,以氨基磺酸作催化剂,以无水乙醇为溶剂,在加热搅拌条件下回流反应3 h,得到6个6-三氟甲基-3,4,5,6-四氢嘧啶-2(1H)-(硫)酮类化合物。初步生物活性测试表明该类化合物具有一定的除草活性,但活性不强,在浓度100μg/m L时,最佳抑制效果是化合物d对油菜根长生长抑制率为45%。     

岩-土介质中Cr~（6＋）、Mn~（2＋）复合污染的吸附相关性研究

[目的]探讨岩-土介质中Cr6＋、Mn2＋复合污染的吸附相关性。[方法]通过单一Cr6＋、Mn2＋及Cr6＋、Mn2＋复合污染吸附试验,研究Cr6＋、Mn2＋复合污染的吸附规律,并采用相关分析和回归分析法分析Cr6＋、Mn2＋的吸附相关性。[结果]吸附试验对比分析表明,在单一和复合污染吸附试验中,Cr6＋、Mn2＋在吸附时间、总吸附量、吸附速率方面存在明显差异;相关分析表明,Cr6＋、Mn2＋呈显著正相关,通过回归分析进一步确定两者存在加和作用,即在Mn2＋存在的情况下,能够增强供试土壤对Cr6＋的吸附作用。[结论]该研究为今后环境治理及环境管理等提供了科学依据。     

6-BA对大白菜根肿病发病率的影响

[目的]研究细胞分裂素与大白菜根肿病的关系,探讨大白菜根肿病的发病机理。[方法]从发病植株的肿瘤提取孢子,再提取孢子DNA进行PCR检测。将鉴定出的根肿菌孢子于播种期、发芽期以及发芽后21 d接种到三角瓶内的培养土中,于发芽期在培养土中添加0.08μmol/L 6-BA。从接菌植株长出的肿瘤提取孢子,对孢子进行电镜检验,并统计6-BA处理及对照的根肿病发病率。[结果]在三角瓶内,根肿菌可引起大白菜植株发病;添加0.08μmol/L 6-BA处理的根肿病发病率为100%,未加细胞分裂素处理的发病率为57%,前者肿瘤体积也明显大于后者。扫描电镜显示大白菜根肿菌休眠孢子的大小为1.5～4.3μm。[结论]6-BA能明显促进大白菜根肿病肿瘤的形成。     

水稻中介体亚基OsMed6的表达及进化分析

中介体复合物是真核生物RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)通用转录装置的重要组成部分,是基因特异性转录因子与启动子信息传递的桥梁.本研究对水稻(Oryza sativa)中一个假定的中介体亚基OsMed6的表达和进化进行了分析.通过整合分析不同来源的基因芯片数据,发现OsMed6在各个组织(器官)里都有表达.构建了OsMed6与...     

表达抑制山羊痘病毒ORF095 shRNA的山羊成纤维细胞系的建立

将已经通过体外验证能够有效抑制山羊痘病毒复制的shRNA转入山羊体细胞,构建其表达细胞系.将已经通过验证能够靶向抑制山羊痘病毒ORF095基因并有效抑制GTPV的pGPU6/GFP-ORF095-siRNA-70转染山羊原代成纤维细胞,经800μg/mL G418抗性筛选7～8d后,用含200μg/mL G418和10～15ng/mL EGF的培养基进一步单克隆化并将单克隆细胞扩大、传代培养,应用RT-PCR检测及测序鉴定所构建的细胞系.结果表明:本试验获得的1株成纤维细胞系基因组含有ORF095-siRNA-70表达框架,为进一步进行体细胞克隆转基因动物的制备和RNAi体内抗山羊痘病毒的研究奠定了基础.     

云南和广东省流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6)的分离与遗传特性

【目的】分离流行于我国南方地区的流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6),掌握分离毒株的遗传特征。【方法】对设立于我国云南和广东省的哨兵动物定期采血,进行EHDV感染情况监测与病毒分离培养。通过血清中和试验确定分离EHDV的血清型,采用一步法RT-PCR对分离的EHDV-6毒株基因节段2、3、6(Seg-2、-3、-6)进行扩增与序列分析。【结果】2012—2016年,从云南省和广东省的哨兵动物中分离出25株EHDV毒株,其中,11株为EHDV-6型。中国EHDV-6型毒株的Seg-2、-3与-6均属Eastern型,核酸序列相似性分别为99.1%、98.9%和98.8%,在系统发生树上分别聚为1个独立的中国支系。在日本引起疫病暴发的EHDV-6型毒株与中国EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系。日本EHDV-6型毒株在系统发生树上处于中国支系内部,Seg-2、Seg-3与中国毒株的核酸序列相似性分别为98.5%和93.9%。【结论】云南和广东省流行的EHDV-6型毒株核酸与氨基酸序列高度相似;日本和中国的EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系,提示中日之间可能存在EHDV的流动。研究结果为进一步开展我国EHDV-6型毒株流行病学分析、致病性、病原学诊断与疫苗制备等研究提供了基础。     

The Application of ISSR Markers to Identify the Fertility Restorer Gene Rf6 in T.timopheevii Cytoplasmic Male Sterile Wheat(Triticum aestivum)

Inter-simple sequence repeat (ISSR) analysis was carried out on a F2 population of 147 plants derived from a cross between a wheat male fertility restorer line 2114 and a male sterile line ND44A. Out of 43 primers examined, 18 primers produced distinguishable, polymorphic bands between the two parents. Linkage analysis in the mapping population showed that two markers UBC-808 and UBC-848 were closely linked with the restorer gene R f6 of the Triticum timopheevii CMS system. The distance between the two markers and the restorer gene was 7.9 cM and 4.9 cM, respectively. Also two parents were screened with 181 pairs of SSR primers, of which, 34.3% showed polymorphisms. But no locus was found linked with the restorer gene.Compared with the SSR technique, the ISSR approach used in the experiment provided more information and proved to be a valuable method to identify alien fragments.