SARS-COV S蛋白在大肠杆菌和家蚕中的表达

将SARS-CoV S蛋白基因的部分序列(accession number为AY304495的22 908-23 542 nt区域),克隆到表达载体pET28 a(+)中,并在大肠杆菌BL21中诱导表达。SDS-PAGE、W estern b lotting分析表明,重组S蛋白的分子量约为27 kD,与理论分子量相符。将S蛋白基因的部分序列克隆入杆状病毒转移载体pBacPAK-H is后,与线性化家蚕杆状病毒BmBacPAK-6共转染BmN细胞,经空斑筛选获得重组杆状病毒BmBac-S,并将其在细胞和家蚕中进行表达。SDS-PAGE、W estern b lotting分析表明,表达产物的分子量约30 kD,用金属螯合亲和层析纯化得到家蚕细胞表达的重组S蛋白。     

维生素A、E对獭兔繁殖性能的影响

将 2 8只繁殖獭兔随机均分 2组 ,基础日粮相同 ,但试验组在配种前 3天妊娠第 7天于日粮中添加VA8mg/kg、VE10 0mg/kg。结果与对照组相比 :试验组产活仔数提高了 2 0 2 3 %(P <0 0 5 ) ,育成率提高了 6 5 8%(P <0 0 5 ) ,增重速度提高 7 11%(P <0 0 5 )。     

牛病毒性腹泻病毒牦牛分离株E0基因的克隆表达

将青海牦牛牛病毒性腹泻病毒(BVDV)青海泽库(QHZK)株的E0基因亚克隆入原核表达载体pET-32(a),构建了重组表达载体pET-32(a)-E0,然后用重组质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞,并利用IPTG诱导蛋白表达。表达的蛋白用His-Band镍柱进行亲合层析纯化,Western blot鉴定表达蛋白。结果显示,E0基因可在大肠埃希菌中获得表达,表达产物的分子质量约为44ku,与预期的蛋白分子质量大小一致;Western blot分析表明,该蛋白可以与BVDV标准阳性血清产生特异性结合反应。     

甘草查尔酮E对金黄色葡萄球菌的抗菌活性

应用肉汤微量稀释法测定甘草查尔酮E对金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）的抗菌活性,并通过溶血试验、Western blot分析和荧光定量PCR试验考察亚抑菌浓度的甘草查尔酮E对金葡菌α-溶血素表达的影响。结果显示,甘草查尔酮E对7株金葡菌的最低抑菌质量浓度为2～8mg/L;亚抑菌浓度的甘草查尔酮E能显著降低金葡菌α-溶血素的表达,且呈现剂量依赖性。     

Antibody response in vaccinated pregnant mares to recent G3BP[12] and G14P[12] equine rotaviruses

Background

Both the G3P[12] and the G14P[12] type of equine group A rotavirus (RVA) have recently become predominant in many countries, including Japan. G3 types are classified further into G3A and G3B. The G3A viruses have been circulating in Europe, Australia, and Argentina, and the G3B viruses have been circulating in Japan. However, only an inactivated vaccine containing a single G3BP[12] strain is commercially available in Japan. To assess the efficacy of the current vaccine against recently circulating equine RVA strains, we examined antibody responses in pregnant mares to recent G3BP[12] and G14P[12] strains by virus neutralization test.

Findings

After vaccination in five pregnant mares, the geometric mean serum titers of virus-neutralizing antibody to recent G3BP[12] strains increased 5.3- to 7.0-fold and were similar to that against homologous vaccine strain. Moreover, antibody titers to recent G14P[12] strains were also increased 3.0- to 3.5-fold.

Conclusions

These results suggest that inoculation of mares with the current vaccine should provide foals with virus-neutralizing antibodies against not only the G3BP[12] but also the G14P[12] RVA strain via the colostrum.     

扬子鳄大肠杆菌病的发生与防治

对人工养殖的 2 0 0 0余条扬子鳄所发生的大肠杆菌病进行治疗。结果表明 ,该病传播方式以内源性传播为主 ,在鳄体质不佳时即可爆发此病。如措施不当 ,最高发病率可达 90 %以上 ,死亡率达 30 %以上。     

露地菊‘纽9717’的茎叶离体快繁体系

以露地菊‘纽9717’(Chrysanthemum×grandiflora ‘niu9717’)无菌苗为试验材料, 进行茎段(含腋芽)离体快繁体系和离体叶片不定芽再生体系的研究。结果表明, 最佳茎段增殖培养基为MS+6-BA 0.3 g·L-1+KT 0.5 g·L-1+NAA 0.5 g·L-1, 平均增殖系数为3.2;最佳叶片离体再生培养基为MS+6-BA 2.0 g·L-1+NAA 0.5 g·L-1, 6-BA与NAA组合更有利于愈伤组织分化, 愈伤组织诱导率为100%, 愈伤组织分化率为92.3%, 繁殖系数为8.9, 其中分裂素KT及TDZ不利于愈伤组织诱导及不定芽分化, 生长素2, 4-D能有效诱导愈伤组织, 但抑制不定芽分化;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.05 g·L-1, 生根率达100%, 平均生根数为12.08, 平均根长1.5 cm, 移栽成活率为100%, 高浓度生长素能诱导根形成但抑制根的伸长。     

栀子、龙胆、茵陈水煎剂对獭兔胆汁分泌和胆囊平滑肌运动调节研究

为了研究栀子、龙胆、茵陈水煎剂对獭兔胆汁分泌和离体胆囊平滑肌肌条运动的影响,通过对獭兔实施胆管插管术,建立胆汁引流模型,应用 BL-420E 生物机能实验系统观察记录上述中药对胆汁分泌的影响;并取獭兔胆囊平滑肌,应用 HW-400S 恒温平滑肌槽和 BL-420E 生物机能实验系统,观察记录上述中药对胆囊平滑肌运动的影响。结果显示,栀子水煎剂可显著增加胆汁的分泌（P ＜0．05）和胆囊平滑肌收缩张力（P ＜0．05）;龙胆和茵陈水煎剂可显著增加胆汁的分泌（P ＜0．05）,但对胆囊平滑肌收缩张力作用不显著（P ＞0．05）。说明栀子、龙胆、茵陈水煎剂均可促进獭兔胆汁分泌,且栀子可提高胆囊平滑肌收缩张力,但龙胆、茵陈水煎剂对胆囊平滑肌收缩张力影响不显著。     

蓝狐多重感染的病原学及主要病原的分子生物学特性

2006-2007年期间,山东6地区规模化毛皮动物养殖场出现母狐空怀、流产,幼狐呼吸困难,鼻孔出血,气喘并伴有腹泻、死亡等症状,为探明病因,对发病场进行流行病学调查和送检的236份病料组织进行病原学检查,结果表明造成该病的主要原因是由绿脓杆菌(Pseudomonas aerudinosa)、沙门菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)和普通变形杆菌(Proteus vulgaris)共感染所致.这4种细菌单独感染、二重感染、三重感染和四重感染的平均感染率分别为50%、45.8%、3.8%和0.4 0%.在分离的4种细菌中以绿脓杆菌的分离率为最高,达到86%,对该痛原又进行(G+C)mol%、16SrRNA序列同源性和系统发育分析,构建了包括9株邻近种属细菌在内的系统发育树,其中与绿脓杆菌(AJ249451)同源性最高,为99.2%,进一步确定该病原菌属于假单胞菌属中绿脓杆菌.本研究为目前规模化毛皮动物养殖场蓝狐病的原因提出了新的思路,为疾病的防治提供了依据.     

产肠毒素大肠杆菌感染IPEC-J2细胞后IL-17细胞因子表达变化及其功能初探

产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli, ETEC)是引起新生和断奶仔猪腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)的最重要的病原之一。ETEC进入肠道后与肠上皮细胞的相互作用既是该细菌致病的前提条件,也是激发宿主免疫反应的基础。本研究旨在分析ETEC感染猪肠上皮细胞后IL-17细胞因子表达变化,同时探索细胞因子在抵抗ETEC感染中的免疫防御机制。本研究采用猪肠上皮细胞系IPEC-J2和产肠毒素大肠杆菌标准株(C83901)为主要研究材料,通过RT-PCR、ELISA、免疫荧光及免疫印迹的方法分析了IL-17细胞因子及肠黏膜免疫防御相关基因在感染前后的变化。同时,进一步研究了IPEC-J2细胞中相关IL-17细胞因子刺激对肠黏膜防御相关基因的调控作用。结果表明,除IL-17D未检测到外,C83901能促进所有IL-17细胞因子mRNA的转录,尤其能显著上调IL-17A、IL-17C在基因和蛋白水平的表达。ETEC感染或者体外添加IL-17A/IL-17C有利于IPEC-J2细胞中黏蛋白(mucin-2)、紧密连接蛋白(claudin-1、 claudin-2)及防御素pBD-2的表达。结果提示,ETEC感染后,肠上皮细胞通过调节IL-17细胞因子的表达进而增强肠黏膜屏障功能以抵抗该细菌的入侵。