重组K88黏附素亚单位蛋白在大肠杆菌中的诱导表达

采用响应面分析方法,对肠毒素大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacoli)K88黏附素亚单位重组蛋白FaeG诱导表达的主要影响因素进行了优化研究。响应面分析结果表明:不同的诱导时机、IPTG浓度及诱导时间对目的蛋白表达量均有显著影响(P<0.01),三因素之间的交互作用对目的蛋白表达量也有极显著的影响(P<0.01)。通过进一步的模拟优化,得到了最佳诱导表达条件为培养BL21(K88ac)重组菌株2.5h后,加入IPTG至终浓度0.8mmol/L,37℃诱导培养5h。采用以上参数进行验证实验,得到目的蛋白在全菌蛋白中的表达含量为35.4%;与单次单因子法得到的最佳表达条件下的表达量(27.5%)相比,提高了28.7%。采用响应面分析法可以确定IPTG的诱导时机、诱导浓度及诱导时间等多个因素对重组蛋白在大肠杆菌中表达的最佳作用条件,有利于提高目的蛋白的表达量。     

影响籼粳稻杂交F1花药培养效果的因素分析

以津稻291/IRBB60籼粳杂交F1、反交F1及其亲本的花药为外植体,对诱导和分化培养基、激素配比及有机附加物和高温预培养时间等影响花药培养效果的因素进行研究。结果表明,在SK3基本培养基中添加2 mg/L 2,4-D,1 mg/L NAA和1 mg/L KT比只添加2 mg/L 2,4-D的愈伤诱导率高0.67～2.78个百分点;在诱导培养基中添加水解酪蛋白能明显提高正交F1的愈伤诱导率;MS 1 mg/L NAA 2 mg/L 6-BA 0.5 mg/L KT分化培养基得到了较高的绿苗分化率;正交F1的愈伤诱导率、绿苗分化率和花培力显著高于反交F1;30℃高温预培养36 h,正交F1花培力达到最高值。     

烟草K326叶片愈伤组织诱导及继代的初步研究

以烟草K326叶片为外植体,采用MS基本培养基,研究了不同激素组合对愈伤组织的诱导效果,以及继代培养过程中不同浓度的NAA和6-BA对愈伤组织生长的影响。研究结果表明:2.4-D2.0 mg/L,6!BA0.5 mg/L组合诱导效果最好,7d后叶块边缘长出愈伤组织,诱导率为100%。不同浓度NAA和6-BA组合的愈伤组织生长速度、结构、质地和颜色有显著差异。以NAA0.1 mg/L+6-BA3.0mg/L、NAA2.0mg/L+6-BA0.5 mg/L和NAA1.5 mg/L+6-BA0.5mg/L3种培养基组合的愈伤组织生长较快。其中前一组合愈伤组织为绿黄色,结构致密,质地硬;后两种组合愈伤组织为黄白色,结构疏松,质地脆。     

黄豆芽愈伤组织培养条件对Vc积累的影响

优化了黄豆芽愈伤组织培养条件,建立了合适的黄豆芽细胞悬浮培养体系。以在25℃无激素条件下自然生长的豆芽子叶、叶芽、芽茎、芽根等部位为外植体诱导愈伤组织,以次生代谢产物Vc积累最多为目标,考察外植体、基础培养基、萘乙酸(NAA)浓度以及pH值的影响。结果表明:叶芽在pH值为5.0的B5培养基中,能有效诱导愈伤组织,且目标产物Vc积累最多。低浓度NAA对黄豆芽愈伤组织诱导及次生代谢产物Vc积累影响不大,随浓度增加,影响加大。     

‘新海16’愈伤组织诱导及白霜的优化

为获得高品质、活力旺盛且具有分化能力的愈伤组织,本研究在已建立的海岛棉(Gossypium barbadense)‘新海16’再生体系基础上,以MSB附加0.1 mg/L 2,4-D及0.1 mg/L KT为基本培养基,采用单因素随机试验研究外植体不同部位、光照及培养基成分等对‘新海16’愈伤组织诱导的影响。结果表明:‘新海16’愈伤诱导的外植体选用下胚轴中上部绿色茎段诱导效果较优;除此之外,愈伤诱导效果最佳的处理为2 000 lx光照强度、90%MSB无机盐成分、3 g/L PVP及1.2~1.4 g/L Gelrite或Phytagel,均能够降低愈伤组织出现白霜现象,对愈伤组织疏松生长有促进作用。本研究通过优化愈伤组织的诱导方法,提高胚性愈伤组织发生率,为‘新海16’高频再生体系提供科学依据。     

水稻愈伤组织体细胞胚胎发生的细胞学研究

从水稻的成熟胚诱导的愈伤组织,通过分化培养基的再诱导,产生体细胞胚胎(胚状体)。培养条件对胚状体的形成是很重要的。胚状体发生过程中,形成胚原细胞;原胚;球形胚;心形胚;以及不很明显的鱼雷胚(或梨形胚)等形态。胚原细胞可以单个发生,也可群体发生,因此可以形成胚胎群。     

花楸嫩叶和茎段的愈伤组织诱导

以花楸嫩叶和茎段为外植体,在添加BA、TDZ、IBA、NAA、2, 4-D组成的不同激素组合的MS培养基上培养,以诱导愈伤组织。以幼嫩的茎段为外植体时,从愈伤组织的诱导率、体积和生长状态综合考虑,得出生长素的效应为NAA>2, 4 -D>IBA;最佳激素种类组合为NAA1. 0mg/L+BA0. 5 ~3. 0mg/L、2, 4 -D1. 0mg/L+BA0. 5~3. 0mg/L或TDZ0. 01~0. 5mg/L。以幼嫩的叶片为外植体时,虽然诱导率可达100%,但只是在切口处长小米粒大小的愈伤组织,生长素的诱导效应大小为2, 4-D>NAA>IBA,最佳激素组合为2, 4-D1. 0mg/L+BA0. 5 ~3. 0mg/L。将初代培养的愈伤组织转入增殖培养基,增殖效果都非常好, 4周后愈伤组织长满培养瓶。     

狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化

将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中,转化至大肠杆菌Rosetta株,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析显示,相对分子量约为82 kD,与预期大小一致。Western-blot检测结果表明,融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应。为获取大量ELISA包被用核蛋白,试验还借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、菌密度I、PTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。结果表明:27~32℃,OD5500.3~0.4,IPTG 0.06 mmol/L、诱导至OD550值不再增加时为最佳诱导表达条件。优化后经扫描分析显示,所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20%以上。经包涵体纯化和亲和层析纯化,可获得纯度较高的GST融合蛋白。     

甘蔗愈伤组织诱导与植株再生研究

以甘蔗粤糖95-168号心叶为材料,分别在添加2,4-D1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5和5.0 mg/L8个处理的MS培养基上培养。试验结果表明,不同浓度的2,4-D对愈伤组织诱导有明显影响,并对愈伤组织分化诱导培养产生影响,其中以2,4-D 2.5 mg/L最佳。幼苗经1/2 MS+NAA1.0 mg/L+AC0.05%培养基诱导生根后成为完整的植株。     

玉米孤雌生殖诱导系的选育方法研究

本试验通过对北农大高油（ＢＨＯ）与Ｓｔｏｃｋ６ Ｆ１的自交后代、ＢＣ１和ＢＣ２后代分离群体单株单倍体诱导率的分布趋势分析发现,在３个群体中均以诱导率最低的类型占绝大部分,诱导率较高（相对于Ｓｔｏｃｋ６）的类型所占比率很小,而诱导率突出的类型所占比率更小,在Ｆ１自交后人系统中出出了诱导率大大超出高亲的极端类型而在ＢＣ１和ＢＣ２的后代系统中未见有诱导率超高的跳跃性分布类型随着Ｓｔｏｃｋ６回交次数的增加,后代中分离出诱导率超亲类型的可能性越来越小。因此ＢＨＯ中可能存在不同于Ｓｔｏｃｋ６的诱导单倍体基因。与ＢＣ１和ＢＣ２后代相比,ＢＨＯ／Ｓｔｏｃｋ６的自交后代中籽粒Ｎａｖａｊｏ标记更向于深标记类型,表明ＢＨＯ中也具有增强籽粒色素的修饰基因。ＢＣ１和ＢＣ２的后代中,没有发现大胚类型,而Ｆ１的自交后代中则获得了一些大胚面的