果实特异启动子调控薄皮甜瓜ACC合成酶cDNA反义表达载体的构建

应用反义RNA技术抑制甜瓜成熟过程中内源乙烯的合成,从而培育耐贮运品种是解决甜瓜延熟保鲜难题的可行新方法。根据GenBank中甜瓜、黄瓜ACC合成酶基因氨基酸保守序列设计引物,从成熟的薄皮甜瓜(齐甜1号)果肉组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到约0.7kb的ACC合成酶cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为777bp,编码258个氨基酸;从番茄(东农706)叶片组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约2.2kb的E8基因片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为2192bp;以pCAM2301为起始植物表达载体,pCAM-GT为中间载体,成功构建了果实特异启动子(E8)调控薄皮甜瓜ACC合成酶cDNA反义表达载体,采用冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。     

富硒麦芽对二乙基亚硝胺致SD大鼠肝癌细胞因子和血管生成的影响

雄性SD大鼠193只，体质量100～120g，随机分为5组。Ⅰ～Ⅲ组，日粮中添加富硒麦芽至硒含量分别为0．3、1．0、3．0mg／kg；Ⅳ组为模型组；Ⅴ组为正常对照组，不加硒也不诱癌，日粮中分别添加亚硒酸钠至硒含量达0．1mg／kg。Ⅰ～Ⅳ组，饮水中添加二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN，100mg／L）诱癌，维持DEN摄入量按体质量每天约10mg／kg，连续16周，然后改饮普通灭菌水至18周末。Ⅴ组始终以普通灭菌水自由饮用。每4周每组取5只鼠眼眶采血；18周末采血、处死所有大鼠。测定血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNFα）、白介素-2（interleukin-2，IL-2）、胰岛素样生长因子-Ⅱ（insulin—like growth factor-Ⅱ，IGF-Ⅱ）、一氧化氮（nitricoxide，NO）、一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）等的含量，并以免疫组化法观察大鼠肝肿瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达。结果发现，某些剂量富硒麦芽能有效地抑制肝癌大鼠TNFα、IGF-Ⅱ、NO和NOS水平的上升，提升血清IL-2水平，抑制肝肿瘤组织中VEGF的表达。结果提示，富硒麦芽能促进肝癌大鼠免疫功能，抑制肿瘤血管生成，从而发挥其抗癌作用。     

让乳酸菌制剂在动物肠道内就产生必需氨基酸和免疫保护造——新型乳酸菌制剂的理想构思

本文传达的信息是令人兴奋的，将基因工程技术应用于乳酸菌制剂，通过对一些优良菌种的遗传改造，导入有用基因如必需氨基酸合成酶基因、疫苗基因等，让乳酸菌制剂在肠道内就能产生必需氨基酸或某些传染病病原的免疫保护造。这将是最理想的乳酸菌制剂。而其基础是选择优良的乳酸菌，文章告诉说，他们通过从商品鸡盲肠当中分离出了6株乳酸菌，根据耐酸耐胆汁试验，病原菌生长抑制试验以及肠道粘膜粘附试验，筛选出两株优势菌株CX001和CX005。     

水稻田除草新星——稻杰

稻杰25克/升油悬浮剂是美国陶氏益农公司最新开发的磺酰胺类水稻田除草剂,有效成分为五氟磺草胺。它是通过抑制乙酰乳酸合成酶（ALS）,阻断支链氨基酸合成及蛋白质合成,进而影响植物细胞分裂。2004年在中国获得秧田和水稻田的登记,2005、2006年在市场得到了经销商和农民的普遍认可,迅速成为水稻田除草剂知名品牌。[第一段]     

乳糖诱导海藻糖合成酶基因工程菌条件优化

研究乳糖代替异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导海藻糖合成酶(Tres)在基因工程菌p ET-30a(+)Tres/BL21中的表达,分别对用乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式,确定了乳糖诱导的最佳条件。经过试验验证,工程菌对数生长中期,OD600 nm约为0.8时,分批次添加终浓度为0.5 mmol/L的乳糖于25℃条件下,诱导5 h,乳糖诱导的蛋白表达量达到最高值。通过试验证明,乳糖可以作为一种很好的诱导剂代替IPTG诱导p ET-30a(+)Tres/BL21中重组产物海藻糖合成酶,为今后海藻糖合成酶生产开发利用提供试验基础。     

昆虫几丁质合成关键酶功能及其RNAi技术在害虫防治中的研究进展

几丁质对昆虫的生长发育至关重要,且不存在于植物和哺乳动物中,因此其合成途径的关键酶是较为理想的杀虫剂靶标。近年来,多种害虫的几丁质合成关键酶基因被克隆和鉴定,通过RNAi技术应用于一些重要害虫的防治研究工作中。本文较为系统的总结了近些年害虫几丁质合成关键酶的基因克隆及功能研究进展,重点阐述了几丁质合成酶、海藻糖酶基因基于RNAi技术应用于害虫防治取得的研究进展,分析了RNAi技术通过转基因植物表达dsRNA（RNAi抗虫作物）以及作为核酸农药（dsRNA）直接进行作物喷施的两种应用途径,文章最后还探讨了RNAi在害虫防治中面临的主要瓶颈问题以及主要应对策略。上述较为系统的归纳和总结,目的是为今后基于几丁质合成关键酶的RNAi技术应用于害虫绿色防控研究提供有价值的理论指导。     

橡胶树胶乳高表达的法尼基焦磷酸合成酶的功能

【目的】天然橡胶生物合成途径是典型的植物类异戊二烯代谢途径,MVA代谢途径是天然橡胶与萜类化合物所需的五碳构成单元IPP和DMAPP生物合成的主要途径之一。由2分子IPP和1分子DMAPP聚合形成的法尼基焦磷酸是乳管细胞天然橡胶生物合成的起始前体,厘清该起始物的合成酶酶学性质不仅有助于阐明天然橡胶生物合成机制,同时也为天然橡胶遗传改良提供酶学理论基础。【方法】对橡胶树热研7-33-97基因组中同源的3个预测的法尼基焦磷酸合成酶(HbFPS1、HbFPS2、 HbFPS3)进行序列特征分析,优选胶乳中高表达的2个法尼基焦磷酸合成酶基因构建原核表达载体,经蛋白纯化与MALDI TOF质谱确证,并同时进行体外酶活性检测,最终评价其对体外橡胶合成效率的影响。【结果】橡胶树基因组含有的3个预测的法尼基焦磷酸合成酶都含有特征性的2个保守结构域“DDIMD”和“DDYXD”及相似的三维空间结构,其中胶乳高表达的HbFPS1和HbFPS2基因编码的蛋白氨基酸序列相似性达到95%,说明HbFPS1和HbFPS2 2个冗余基因可能经历了基因组中同源基因的后期拷贝事件。同时HbFPS1和HbFPS2基因能够...     

番茄抗病品种吉美08 SlDFR基因的克隆与表达

【目的】克隆番茄（Solanum lycopersicum）抗病品种吉美08二氢黄酮醇4-还原酶（dihydroflavonol 4-reductase,DFR）基因,并分析枯萎病菌尖孢镰刀菌番茄专化型（Fol4287）诱导下其在番茄不同组织中的表达模式,为深入研究SlDFR基因在番茄抗病过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用同源克隆技术从番茄中克隆SlDFR基因cDNA全长序列,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测番茄根、茎、叶中SlDFR基因在枯萎病菌诱导下的表达模式。【结果】从番茄抗病栽培品种吉美08中克隆得到SlDFR基因,cDNA序列全长1659 bp,包含1个1149 bp的开放阅读框（ORF）,编码379个氨基酸。SlDFR蛋白的相对分子质量为42.43 kD,等电点（pI）为6.08,是一个亲水的、稳定的酸性蛋白,亚细胞定位在高尔基体上,无信号肽和跨膜结构域,有38个磷酸化位点,其中,丝氨酸18个,苏氨酸15个,酪氨酸5个。SlDFR蛋白的二级结构中α-螺旋占37.73%,延伸链占13.98%,无规则卷曲占40.69%。系统发育进化树分析结果表明,SlDFR蛋白序列与同属茄科马铃薯（Solanum pennellii）亲缘关系较近,其次为黑果枸杞（Lycium ruthenicum）。qRT-PCR分析结果显示,SlDFR基因在番茄叶中表达量最高,在根中表达量最低。SlDFR基因在番茄根、茎、叶中表达量受番茄枯萎病菌诱导,均呈现不同程度上调,其中,在根中表达量变化最大,在叶中表达量变化较小,推测SlDFR基因的表达量与番茄枯萎病菌胁迫响应有关,且番茄根部类黄酮的合成为重要胁迫响应途径。【结论】SlDFR基因表达量受Fol4287的诱导,可能参与番茄枯萎病胁迫响应过程,且对番茄枯萎病菌的响应在番茄根部更强烈,并通过调控番茄根部黄酮类物质的合成提高根系分泌物的抑菌活性从而增强番茄对枯萎病的抗性。