水产动物益生菌的筛选及应用

正随着水产养殖业的发展和养殖强度的增加,水产动物病害爆发频繁。传统的抗生素药物虽然对治疗疾病有积极效用,但长期使用会产生巨大的负面效应:病原菌产生耐药性,效力下降[1];药物残留干扰水产动物肠道内有益微生物菌群的生长和繁殖,影响水产动物的健康;残留在水体中的抗生素破坏养殖生态环境,水产品质量下降。近年来,我国水产品因药物残留而出口受阻的事件屡见不鲜,给我国水产业造成巨大损失。1974年Parker[2]首创益生菌一词,最早提出益     

鲤益生茵筛选及部分菌株对鲤前肠黏液的体外黏附作用

从养殖池、水族箱和健康鲤肠道等分离20株细菌,通过耐热和体外拮抗试验筛选出5株细菌,经生化试验和细菌:16SrDNA测序鉴定为2株芽孢杆菌(Bacillus)、2株肠球菌(Enterococci)和1株柠檬酸杆菌(Citrobacter).进一步采用体外固定鲤前肠黏液蛋白,结合同位素32P标记细菌并示踪的方法,研究来源于鲤肠道的肠球菌和柠檬酸杆菌以及鲤养殖水体中的芽孢杆菌对鲤前肠黏液的体外黏附活性,建立筛选鲤(Cyprinus carpio)益生菌的方法.结果表明,5株细菌均能黏附到黏液体外模型,肠球菌的相对黏附率极显著高于芽孢杆菌与柠檬酸杆菌(P<0.01),柠檬酸杆菌与芽孢杆菌的相对黏附率差异不显著(P>0.05),而肠球菌L2的相对黏附率极显著高于肠球菌E2(P<0.01).研究证明,鱼源的肠球菌对鲤前肠黏液的黏附率高于异源的芽孢杆菌,而且不同种属的肠球菌在黏附能力上也存在差异.     

仿刺参肠道潜在益生菌对稚参生长、免疫及抗病力的影响

以稚参期仿刺参为研究对象,探讨了分离自仿刺参肠道的潜在益生菌在稚参养殖中的应用效果。采用16S rDNA序列分析法将3株潜在益生菌分别鉴定为Bacillus sp.(GSC-1)、Bacillus sp.(GSC-2)和Enterococcus sp.(GSC-3)。分别以10³、10⁵或10⁷ CFU/mL的GSC-1、GSC-2、GSC-3或灿烂弧菌浸浴稚参以检验潜在益生菌对稚参期仿刺参的安全性,7 d后各潜在益生菌浸浴组的稚参成活率均高于同浓度的灿烂弧菌处理组;GSC-1和GSC-3在实验浓度下对稚参成活率无显著影响(P>0.05),可作为稚参的潜在益生菌;而10⁷ CFU/mL GSC-2浸浴组稚参的成活率显著低于对照组(P<0.05),因此GSC-2不适合作为稚参的潜在益生菌。将潜在益生菌GSC-1和GSC-3以10⁹ CFU/g的比例与鼠尾藻粉混合后饲养稚参20 d,潜在益生菌处理组的稚参成活率、特定生长率和变色率均高于对照组,其中GSC-1处理组稚参的成活率和变色率显著提高(P<0.05),GSC-3处理组稚参的成活率和特定生长率显著提高(P<0.05);与对照组相比,潜在益生菌GSC-1和GSC-3均有效增加了稚参的总菌数(P<0.05),GSC-1还有效降低了稚参的弧菌数(P<0.05);潜在益生菌GSC-1和GSC-3均可显著提高稚参体组织中的酚氧化酶和溶菌酶活力(P<0.05),GSC-1亦显著提高了其酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力(P<0.05);GSC-1和GSC-3处理组稚参的抗灿烂弧菌感染能力均高于对照组,其中GSC-3显著降低了灿烂弧菌攻毒后稚参的死亡率(P<0.05)。综上所述,潜在益生菌GSC-1和GSC-3对稚参期刺参安全无毒,能够促进稚参的健康生长并提高其抗病能力,因而GSC-1和GSC-3均可作为益生菌应用于稚参养殖中。     

凡纳滨对虾肠道内产消化酶益生菌的分离与筛选

为获得具有消化酶活性且安全的益生菌,从凡纳滨对虾肠道中初步分离得到576株细菌,对菌株进行产蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶能力的定性及定量测试,筛选出产酶种类多且产酶能力强的菌株11株。对筛选出的11株菌进行了幼虾浸浴实验、药敏性实验和溶血性实验,以评价其生物安全性。将11株菌的菌悬液添加到凡纳滨对虾幼虾的养殖水体中进行浸浴实验,浸浴结束后用鳗弧菌进行刺激,测定不同浸浴组幼虾相关免疫基因的相对表达量,以确定其对幼虾的保护效果。综合消化酶活性、菌株对幼虾的保护效果及生物安全性,筛选得到4株效果较好的菌株。菌株的16S r DNA分子鉴定结果表明,细菌1号、2号和4号分别与芽孢杆菌(Bacillus sp.PCSAS2-38,GQ284495.1)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus strain N419,JN400121.1)及苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis strain EA26.1,KC758847.1)的相似性均为100%,9号菌株与荚膜红细菌(Rhodobacter capsulatus strain PSB-03,FJ866782.1)相似性达到99%,为后续益生菌制剂的开发奠定了前期基础。     

复合益生菌对草鱼养殖水体水质和菌群结构的影响

为研究草鱼养殖水体中添加复合益生菌水质调节剂对水体水质和菌群的调节作用,实验采用氮磷等指标监测水质,采用454焦磷酸盐测序方法分析菌群结构,结果显示,处理组的氨氮、亚硝酸盐氮和总氮浓度一直低于对照组,但差异不显著;处理组硝酸盐氮浓度低于对照组,且在18d下降了56.59％;处理组的总无机氮含量低于对照组,且在15d下降了28.75％.处理组正磷酸盐和总磷浓度略低于对照组,无显著差异.15 d水样的454焦磷酸盐测序结果与对照组相比,处理组菌群多样性更高,厚壁菌门和变形菌门分别减少了91.21％和21.75％,拟杆菌、放线菌和蓝细菌分别增加了288％、435％和848％.在变形菌门中,α-变形杆菌和β-变形杆菌分别比对照组提高了318％和18％,γ-变形杆菌比对照组降低了78.82％.研究表明,该复合益生菌具有一定水质调控功能,且能显著改变菌群结构.     

育肥绵羊胃肠道乳酸菌的分离鉴定及部分体外益生特性评价

本研究旨在探寻益生特性优良、可作为抗生素替代品的羊源乳酸菌,为后续饲用益生菌的开发与利用提供依据。以育肥羊不同肠段和瘤胃内容物为菌株分离的来源,采用碳酸钙-MRS固体培养基分离纯化乳酸菌,通过初筛、溶血试验复筛获取安全菌株,对安全菌株进行形态学、生化鉴定和16S rRNA测序鉴定,并评价其抑菌能力、抗生素敏感性和耐受性。结果显示：共获取12株同型乳酸菌——海氏肠球菌的安全菌株,分别来源于空肠（K1、K2、K3、K4）、回肠（H1、H2、H3、H4、H5、H6）、直肠（Z1）和瘤胃（L1）。在抑菌能力方面,12株海氏肠球菌对2种典型致病菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有一定的抑制性,且对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径极大于大肠杆菌,对这2种指示菌的抑菌圈直径分别为7.30～12.30 mm（平均为9.90 mm）和6.90～9.47 mm（平均为8.43 mm）,尤其是来自空肠的K2菌株对这2种指示菌的抑菌圈最大;从抗生素敏感性分析,K2和H5菌株具广泛的抗生素敏感性,对6种抗生素敏感,其余菌株（L1除外）对5种抗生素敏感;从耐受性上看,这12株海氏肠球菌对胃肠液均具有一定的耐受性,L1和K2...     

益生菌对育肥猪育肥后期生长性能、养分表观消化率、粪便菌群和短链脂肪酸的影响

本试验旨在探讨益生菌对育肥猪育肥后期生长性能、养分表观消化率、粪便菌群和短链脂肪酸(SCFAs)的影响。选取平均体重为(92.01±0.91) kg的“长×大”育肥猪100头,随机分为对照组和益生菌组,每组5个重复,每个重复10头。对照组饲喂基础饲粮,益生菌组在基础饲粮中添加益生菌制剂(每千克饲粮含干酪乳杆菌2.0×10⁹CFU、酿酒酵母2.0×10⁸CFU)。饲喂期为31 d。结果显示：与对照组相比,益生菌组育肥猪的平均日增重提高了9.42%(P<0.05),料重比降低了6.90%(P>0.05);益生菌组育肥猪的钙和总磷表观消化率显著提高(P<0.05);益生菌组粪便低丰度菌群中普氏菌属、Alloprevotella、考拉杆菌属、粪球菌属、脱硫弧菌属、粪杆菌属、丁酸球菌属和琥珀酸弧菌属的相对丰度显著增加(P<0.05),未标记颤螺菌科、惰性真杆菌群、Anaeroplasma和短优杆菌群的相对丰度显著降低(P<0.05);益生菌组育肥猪粪便中总短链脂肪酸、丙酸和戊酸含量显著增加(P<0.05),总短链脂肪...     

不同益生菌对猪流行性腹泻病毒-德尔塔冠状病毒二联灭活疫苗小鼠免疫及肠道微生物的影响

【目的】旨在探究日粮中添加益生菌对猪流行性腹泻病毒（PEDV）—德尔塔冠状病毒（PDCoV）二联灭活疫苗免疫效果及宿主肠道微生物的作用。【方法】以42 d SPF级雌性昆明鼠为试验材料,以基础日粮为对照组（NC组）,分别在基础日粮中添加EM益生菌（EM组）、枯草芽孢杆菌（Bac组）、乳酸杆菌（Lac组）,在试验1和14 d,分别对小鼠免疫PEDV—PDCoV二联灭活疫苗,检测分析7,14,21,28 d小鼠血液中PEDV和PDCoV的中和抗体与血清免疫因子水平,16S rRNA高通量测序分析肠道菌群差异,以及肠上皮细胞绒毛、隐窝变化。【结果】（1）与对照组（NC组）相比,饲喂不同益生菌小鼠血清中PEDV和PDCoV的中和抗体水平均有不同程度提高,其中EM组小鼠血清中PEDV和PDCoV的中和抗体水平要明显高于其他组（P<0.01）;(2)血清免疫因子表达量分析发现,EM组小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-5、IL-6、IL-10、CXCL1表达量均极显著高于NC组（P<0.01）;(3)肠道形态结果显示,益生菌试验组回肠绒毛长度均显著大于NC组（P<...     

益生菌在水产动物肠道内黏附机制的研究进展

双歧杆菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌、酵母是益生菌制剂中最常用、最具代表性的菌种。大多数商品化的益生菌制剂是将这些菌以单一的或复合的形式,混合在粉料载体中或添加些蛋白性原料,然后将益生菌制剂直接混合在饲料中添加或制成混合液直接加入水体。各种菌通过肠道并在肠道壁黏附发挥益生作用,能否黏附定植于肠道壁是益生菌作用的前提,也是菌种筛选的重要指标。已有的研究表明,各类微生物的黏附是非特异性的,即与菌体的结构有关,菌体能接近肠道上皮细胞,菌体的特殊配体进一步与宿主细胞相应的受体之间特异性结合,既黏附素一受体学说。     

二株鳗鲡益生菌对欧洲鳗鲡免疫应答的初步研究

由养殖鳗鲡肠道分离、筛选出的益生菌A40209CDC4和A31009NA,添加鳗鲡饲料,细菌浓度达107cfu·g-1,连续投喂30d,测定试验鳗鲡白细胞吞噬活性、溶菌酶活力和血清抗体滴度.结果显示:与未添加细菌的对照组相比,添加益生菌试验组的白细胞吞噬百分比、吞噬指数、溶菌酶活力和血清抗体滴度无显著变化,说明筛选菌株作为饲料添加剂应用于欧洲鳗鲡未产生特异性刺激.