F亚群禽白血病病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立检测F亚群禽白血病病毒(ALV-F)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-F分离株FGD1803基因组为模板,PCR扩增其env基因,构建重组质粒pMD18-T-F作为标准品.利用该重组质粒建立了 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法(qPCR)的标准曲线,并经反应条件优化建立了检测...     

蒙牛乳业泰安有限责任公司获得“C”标志证书

近日，蒙牛乳业泰安有限责任公司获得《定量包装商品生产企业计量保证能力证书》，即“C”标志，“C”标志是定量包装商品生产企业计量保证能力合格标志。“C”标志证书的核发，是由国家质量技术监督部门根据国家有关规定，参照国际通行做法，[第一段]     

蓝舌病病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立及初步应用

<正>蓝舌病最早于1905年发现于南非,主要存在于南纬40°至北纬53°之间的地区,包括美洲、非洲、澳洲以及亚洲。我国自1979年在云南分离到蓝舌病病毒以来,湖北(1983)、安徽(1985)、四川(1988)、山西(1993)、广西(1985)等省份分别报道发现了蓝舌病,此后蓝舌病普查中有29个省(市、地区)发现该病〔1〕。2006~2008年蓝舌病相继出现在荷兰、卢森堡、丹麦、瑞士、捷克以及英国,同年受到感染的     

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据Gen Bank报道的N基因高度保守核苷酸序列,设计并合成一对引物。上下游引物与Gen Bank中登录的153株猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板,利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增,获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照,建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验,变异系数0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证,核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点,可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。     

鸡lncRNA-MSTRG.15568.9及其预测靶基因的表达

试验旨在了解在鸡睾丸中高表达的1个长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）及其预测靶基因的时空表达规律,研究二者在鸡弱精子症中的调控作用。根据弱精子症和正常北京油鸡公鸡睾丸转录组测序筛选到的1个高表达的lncRNA （MSTRG.15568.9）,采用顺式（cis）作用模式预测其潜在靶基因SPAG4（sperm-associated antigen 4）,进一步采用实时荧光定量PCR方法进行表达量分析。分别选择3只0、5、20、30、45、60周龄正常北京油鸡公鸡,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同周龄公鸡睾丸中的表达量差异;选择30周龄3只正常公鸡,采集睾丸、肝脏和脾脏等8个部位组织样品,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同组织间的表达规律;选择45周龄弱精子症公鸡和正常公鸡各3只,对比MSTRG.15568.9与SPAG4基因在睾丸的表达量差异。结果显示,MSTRG.15568.9与SPAG4存在明显的时空表达差异,且二者表达趋势基本一致。在不同周龄的鸡睾丸组织中,MSTRG.15568.9和SPAG4的表达趋势相近,MSTRG.15568.9在20周龄的表达量显著高于0、5、30、45、60周龄（P<0.05）,0和5周龄表达量显著低于20、30、45和60周龄（P<0.05）;SPAG4在45周龄表达量最高,其次是20周龄（P<0.05）。MSTRG.15568.9和SPAG4在睾丸和肝脏中的表达量均显著高于脾脏、肾脏等组织（P<0.05）;在正常睾丸组织中的表达量均显著高于弱精子症睾丸组织（P<0.05）。综上所述,MSTRG.15568.9与SPAG4基因具有较明显的组织表达特异性,且MSTRG.15568.9可能调控SPAG4基因的表达,参与精子发生与精子活力调控;但其具体作用机制需要进一步探索。本研究可为鉴定与鸡弱精子症调节机制相关的功能基因提供参考。     

结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0...     

甲酚纳米乳消毒剂的中和剂筛选及杀菌效果观察

为研究甲酚纳米乳消毒剂的杀菌效果,采用中和剂悬液定量鉴定方法,对3种中和剂:3%吐温-80磷酸盐缓冲液(PBS)、0.5%硫代硫酸钠PBS、1%吐温-80+1%卵磷脂+0.5%硫代硫酸钠PBS中和甲酚纳米乳消毒剂的效果进行了筛选,然后利用筛选出的中和剂和悬液定量杀菌试验方法,观察了甲酚纳米乳消毒剂的杀菌效果。结果表明:3%吐温-80 PBS对试验菌及培养基无不良影响,可作为甲酚纳米乳消毒剂的适宜中和剂;甲酚纳米乳消毒剂的杀菌效果随着消毒剂浓度的升高和作用时间的延长而增强,2%和2.5%的消毒剂对细菌分别作用5 min以上、3%的消毒剂作用1 min以上,杀灭对数值均已大于5,消毒合格。结果提示,甲酚纳米乳消毒剂的杀菌效果好,适宜于在兽医临床中推广应用。     

诊断畜禽寄生虫病的一种新技术

多年来，我们研究了一种定性、定量检测寄生虫病的新技术，包括新虫卵计数器(已获国家专利)、操作程序、每克粪中虫卵数计算公式、对被检粪便采样量、粪便沉淀液的稀释体积和技术的可行性(即在粪便沉淀液中难以分布均匀的蛭形巨吻棘头虫虫卵、片形吸虫虫卵的分布均匀性进行了测定)进行了研究，并进行了临床试验检验，结果表明本技术用于定性、定量检测诊断寄生虫病是可靠的。     

饲料添加剂砷含量测定方法探究

<正>砷是一种损害机体全身组织的有毒物质,与动物组织中酶的疏基结合,使之灭活而产生毒性,尤其以消化道、肝、肾、肺、皮肤及神经组织更为敏感。因此,为了减少和避免砷的危害,保障人们的身体健康,严格检测饲料及原料中砷的含量具有重要意义。目前,饲料中砷含量检测最常用的方法是银盐法(仲裁法),     

青贮饲料中有机酸的毛管电移动分析方法

调制优质青贮饲料是贮藏利用粗饲料的重要条件。青贮饲料品质,一般根据发酵成分的含量组成判定,青贮饲料发酵生成的有机酸,主要是乳酸和挥发性脂肪酸(VFA)。通常评价品质的方法根据乳酸、醋酸及酪酸的含量比。作为青贮饲料中有机酸的定量法,多是采用气相色谱法与高速液相色谱法。但是,这些方法须进行诱导体化等前处理,分析时间也长,并且对某种有机酸异构体(iso-及n-)分离困难,因而,用作常规实