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11.
[目的] 探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响.[方法] 试验分为4组: I组,空白对照组;II组,脂质体组(不加寡核苷酸);III组(SCON),20 μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20 μmol/L反义寡核苷酸组.上述各组均在培养24、36、48 h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达情况的变化.[结果] VEGF和Flt-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24 h, VEGF mRNA I组相对表达量为0.076 9,II组为0.076 8,III组为0.076 9,3组之间无显著性差异(P>0.05),IV组VEGF mRNA 相对表达量下降为0.024 2,且与I、II、III组有显著性差异(P<0.05).培养36 h,前3组相对表达量分别为0.059,0.051,0.051 4,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.024 2,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).培养48 h,前3组相对表达量分别为0.061,0.055 2,0.052 1,3组之间无显著性差异(P<0.05),第IV组为0.011 5,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).培养24 h,Flt-1 mRNA I组相对表达量为0.078 6;II组为0.078 2,III组为0.078 1, 3组之间无显著性差异(P>0.05),IV组Flt-1 mRNA 相对表达量下降为0.025 6,且与I、II、III组有显著性差异(P<0.05).培养36 h,前3组相对表达量分别为0.078 1,0.078 4,0.078 2,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.022 8,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).培养48 h,前3组相对表达量分别为0.069 1,0.078 0,0.069 3,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.021 5,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).可见,VEGF受体Flt-1mRNA的表达与VEGF相似.二者均在 I组、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在III组表达轻微下降,但与I组和II组无显著性差异(P>0.05);IV组的表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间的延长至逐渐下降.[结论] 反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用. 相似文献
12.
[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组:I组,空白对照组;II组,脂质体组;III组(SCON),20μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1mRNA表达情况的变化。[结果]VEGFmRNA在I、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在III组VEGFmRNA表达略有降低,但与I和II组间无显著性差异(P>0.05);IV组(反义寡核苷酸组)的VEGFmRNA表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1mR-NA的表达与VEGF相似。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。 相似文献
13.
为了解不育株系03039S的不育特点并明确其在育种中的利用价值,应用形态学与细胞学方法对其小孢子发育、雌性育性及异交后代育性分离比例等特性进行了观察与研究.结果表明:(1)03039S不育植株矮小瘦弱,颖壳开张角度大,有蓬松透明感,花药瘦秕,不开裂,花丝长,花药外露,不育特征明显;(2)不育植株花药单核期小孢子异常率达到86.12%,主要表现为核变小,细胞质稀薄不均,内含物减少,皱缩变形.二核期、三核期皱缩加重,核消失,不能染色,三核期败育率达100%.(3)03039S杂交结实率与对照LK906无差异,雌性育性器官活力未受影响;(4)03039S及其衍生系F1代不育株与可育株出现95∶97的分离,经χ2测验符合1∶1的分离比例. 相似文献
14.
通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导将CaMV 35S启动子驱动的反义class Ⅰ patatin基因导入马铃薯(Solarium tuberosum)品种鄂马铃薯3号中。PCR扩增和PCR—Southern杂交证明,反义class Ⅰ patatin基因已整合到马铃薯基因组中。Northern杂交分析表明,该反义基因在转基因植株中能正常转录并导致内源classⅠ patatin mRNA含量的下降。对转基因植株试管块茎分析显示,其蛋白质含量和酯酰水解酶的活性较对照有不同程度的下降,其中下降程度最大的株系分别比对照减少36.4%和31.4%。同时部分转基因株系在组织培养条件下的结薯株率、单株结薯数和有效薯率较对照有一定程度的降低。 相似文献
15.
利用PCR技术从番茄基因组中扩增了长约1.1kb的E8基因启动子,构建了中间表达载体pCAMBI-AE8;利用RT-PCR方法从拟南芥中扩增了长约1 197bp的2A6基因全长cDNA编码区,将其定向插入pCAMBI-AE8,构建了正义植物表达载体pCAMBIAE8-2A6;同时扩增了长约500bp的cDNA片段,定向插入pCAMBI-AE8,构建了反义植物表达载体pCAMBIAE8-2A6anti.以此为基础,可以进一步研究2A6基因的差异表达对转基因拟南芥角果发育的影响,达到揭示2A6基因功能的目的. 相似文献
16.
反义Waxy基因转化籼稻9311的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以籼稻品种9311为材料,研究了不同诱导培养基对籼稻9311的诱导率,以及农杆菌浓度、浸染时间和干燥处理时间对抗性愈伤率的影响,进而采用农杆菌介导的共转化方法将含有反义Waxy基因的p13W8质粒和含有潮霉素抗性标记基因的p1300质粒同时转化受体材料.结果表明:籼稻9311成熟胚在含质量浓度为3.0 mg/L的2,4-D的N6基本培养基上具有较高的愈伤组织诱导率,且愈伤的胚性性状良好;愈伤组织在OD600值为0.6的农杆菌菌液中浸染10 min、干燥1.5~2.0 h处理后能够获得较多的抗性愈伤组织;对转化水稻的再生植株进行PCR检测表明,反义Waxy基因已整合进T0代水稻基因组中. 相似文献
17.
《天津农业科学》2017,(7):1-5
为进一步研究CsNR的作用机制,从黄瓜幼叶中克隆获得硝酸还原酶基因编码区序列(CDS)全长和片段(CsNR;EC1.6.6.1),并运用生物学软件对该基因进行序列分析。其中CDS全长2 748 bp,编码915个氨基酸;CDS片段360 bp。CDS全长和p ROKⅡ经Kpn I单酶切和连接,构建了CsNR正义表达载体;CDS片段和p ROKⅡ经Kpn I和Sac I双酶切,构建了CsNR反义表达载体。通过与其他高等植物NR蛋白进行同源性比对分析,结果发现,CsNR基因的氨基酸序列与甜瓜、烟草、拟南芥、油菜NR基因编码的氨基酸序列高度同源,其中与甜瓜NR蛋白之间同源性最高,为98.25%。 相似文献
18.
19.
灿稻不同品种的遗传转化和植株再生 总被引:1,自引:1,他引:1
用携带水稻蜡质基因反义RNA片段的p13W4质粒的根癌农杆菌EHA105,分别感染灿稻品种龙特甫B、协青早B、珍灿97B和Ⅱ-32B的幼胚愈伤组织,经共培养和潮霉素25~50mg/L浓度下的二次筛选后,获得了对潮霉素表现抗性的愈伤组织,抗性愈伤组织的频率在20.1%~27.1%之间;抗性愈伤组织经分化培养,分化频率在12.0%~21.2%。品种间绿菌分化情况存在较大差异,龙特甫B的抗性愈伤组织分化成绿苗的频率为8.8%;珍汕97B的抗性愈伤组织虽能分化,但是,无法获得绿苗。 对转基因植株分别进行了GUS活性测定和PCR检测。结果显示:获得的转基因植株,92%的植株GUS检测呈阳性反应,并能正常结实,在T1种子的胚乳中也能检测到GUS染色的分离,证明外源基因确已导入这些植株中,而且,能正常遗传。在抗性愈伤组织的分化中,试验了潮霉素对分化的影响,结果显示:不添加潮霉素,能明显地提高绿菌频率,但转基因植株的可靠性也随之下降。 相似文献
20.
番木瓜果肉果胶裂解酶基因克隆及反义植物表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
采用cDNA末端快速扩增方法.获得了番木瓜果肉果胶裂解酶(Pectate lyase,PL)基因的完整3′端和部分5′端序列.然后,根据本实验室已经获得的PL基因5′端DNA序列及笔者得到的3′端序列设计上、下游引物,以番木瓜基因组DNA为模板扩增得到PL基因的开放性阅读框.该序列编码385个氨基酸,与草莓、桃、芒果、拟南芥氨基酸序列的同源性分别为83.38%、75.76%、73.68%、65.96%.根据PL基因设计特异引物,扩增其保守区片段,将其反向插入pBI 121的CaMV 35 S启动子和Nos终止子之间,成功构建反义植物表达载体pBP,并导入到根癌农杆菌EHA 105中. 相似文献