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1.
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3.
ACC合酶cDNA克隆及其对美洲黑杨体内乙烯产生的反义抑制 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RTPCR技术克隆了大豆ACC合酶基因GMCACCSI编码区15kb的cDNA片段,经酶切图谱分析和序列分析鉴定后,反向插入到2元载体pBin438中,构建了表达ACC合酶反义RNA的植物表达载体,转化农杆菌后用该农杆菌侵染美洲黑杨叶片,在含卡那霉素的MS培养基上选择转化子和植株再生,通过PCR检测从抗卡那植株中选到15株转基因植株,Southern杂交分析初步确证了外源基因是以单拷贝插入到杨树基因组DNA中;对杨树幼苗乙烯释放的测定结果表明转基因杨树幼苗的乙烯释放量为对照的22%。 相似文献
4.
农杆菌介导法将反义蜡质基因转入杂交稻亲本 总被引:2,自引:0,他引:2
通过农杆菌介导法将反义蜡质基因导入特青(OryzasativaL.subsp.indica)和广粳1号(OryzasativaL.subsp.japonica)这两个杂交稻亲本的愈伤组织中,获得了经PCR检测证明外源基因已整合进植物基因组中的再生植株,其中含潮霉素抗性基因的植株有6株,但仅有2株能够扩增出反义蜡质基因的特异条带,其原因可能是在转基因植株中出现了基因丢失或沉默现象。试验表明,粳型稻广粳1号的不同外植体(成熟胚、幼胚、幼穗、花药)的愈伤诱导率比特青的高,且随着继代时间的延长,不同基因型水稻诱导的愈伤之间的转化率存在着极显著性差异(P<0.01);经过转染的水稻愈伤在一定的筛选压力下会出现“逃逸”现象,抗性筛选后成活愈伤PCR检测发现广粳1号和特青的愈伤转化率只有44.4%和29.4%;不同凝固剂对愈伤诱导的质量有着明显的影响,植物凝胶作凝固剂比琼脂作凝固剂时的愈伤褐化率低。 相似文献
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8.
miRNA是一类在转录后水平调节基因表达的非编码RNA。病毒编码的miRNA在调控病毒基因自身表达及病毒与宿主相互作用方面起着重要作用,这一类miRNA有助于提高病毒的致病性。因此,通过使用与病毒miRNA互补的单链核苷酸即抗miRNA寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotides,AMOs)来抑制病毒miRNA的表达,从而沉默其功能达到抑制病毒复制的效果,这可能成为一种治疗病毒性感染的新方法。文章描述了研究较深入的病毒miRNA与其功能及AMOs的修饰方式,并讨论了AMOs应用的可能性。 相似文献
9.
[目的] 探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响.[方法] 试验分为4组: I组,空白对照组;II组,脂质体组(不加寡核苷酸);III组(SCON),20 μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20 μmol/L反义寡核苷酸组.上述各组均在培养24、36、48 h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达情况的变化.[结果] VEGF和Flt-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24 h, VEGF mRNA I组相对表达量为0.076 9,II组为0.076 8,III组为0.076 9,3组之间无显著性差异(P>0.05),IV组VEGF mRNA 相对表达量下降为0.024 2,且与I、II、III组有显著性差异(P<0.05).培养36 h,前3组相对表达量分别为0.059,0.051,0.051 4,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.024 2,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).培养48 h,前3组相对表达量分别为0.061,0.055 2,0.052 1,3组之间无显著性差异(P<0.05),第IV组为0.011 5,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).培养24 h,Flt-1 mRNA I组相对表达量为0.078 6;II组为0.078 2,III组为0.078 1, 3组之间无显著性差异(P>0.05),IV组Flt-1 mRNA 相对表达量下降为0.025 6,且与I、II、III组有显著性差异(P<0.05).培养36 h,前3组相对表达量分别为0.078 1,0.078 4,0.078 2,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.022 8,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).培养48 h,前3组相对表达量分别为0.069 1,0.078 0,0.069 3,3组之间无显著性差异(P>0.05),第IV组为0.021 5,与前3组比较有显著性差异(P<0.05).可见,VEGF受体Flt-1mRNA的表达与VEGF相似.二者均在 I组、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在III组表达轻微下降,但与I组和II组无显著性差异(P>0.05);IV组的表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间的延长至逐渐下降.[结论] 反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用. 相似文献
10.
[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组:I组,空白对照组;II组,脂质体组;III组(SCON),20μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1mRNA表达情况的变化。[结果]VEGFmRNA在I、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在III组VEGFmRNA表达略有降低,但与I和II组间无显著性差异(P>0.05);IV组(反义寡核苷酸组)的VEGFmRNA表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1mR-NA的表达与VEGF相似。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。 相似文献