大肠杆菌k88ac菌毛蛋白亚基因的克隆、表达及亲和层析纯化

利用PCR技术,从E.coli C83902中扩增出不含信号肽序列的K88ac菌毛蛋白亚基基因片段,将其克隆到表达载体pQE-30中,构建了原核表达载体pQE30-K88ac,并转入E.coli XL1-Blue中。经IPTG诱导后,由T5启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的以包涵体形式存在的K88ac蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化,并获得了高纯度的融合蛋白。     

First record of the little fire ant,Wasmannia auropunctata (Hymenoptera: Formicidae), in Chinese mainland

In January 2022, we received ant specimens collected from three field colonies from Shantou City, Guangdong Province, China. They were identified as the little fire ant, Wasmannia auropunctata, through morphological and molecular analyses. Wasmannia auropunctata is listed as one of the 100 most dangerous invasive species by the International Union for Conservation of Nature (IUCN) and has spread from its native range in South America to every continent except Antarctica. DNA analysis of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (COI) in nine specimens of W. auropunctata found that they had a close genetic relationship with specimens from Argentina. This study represents the first formal record of the establishment of W. auropunctata outdoor in Chinese mainland. However, the invasion stage and occurrence degree of W. auropunctata in China are not clear to date. The implementation of quarantine measures, investigation of the occurrence and distribution, and development of monitoring and control strategies are needed to actively respond to the threat posed by this highly invasive ant.     

动物布鲁氏菌病疫苗的来历及亚单位疫苗的研究概况

布鲁氏菌病是一种严重危害人和动物健康的人畜共患病,人群感染主要来源于感染的动物及被污染的畜产品,目前疫苗免疫仍是控制动物布鲁氏菌病的主要措施。现有国际参考疫苗主要有牛种疫苗株S19和羊种疫苗株Rev.1,这些疫苗为动物群布鲁氏菌病控制提供重要保障的同时也存在关键的技术瓶颈问题,如安全性差,接种动物出现流产;血清抗体体内持续时间较长,干扰常规诊断等。随着布鲁氏菌基因组测序工作的相继完成及DNA重组技术的发展,新型布鲁氏菌病疫苗的开发成为研究的热点。亚单位疫苗本着其较高的安全性和有效性,在动物群布鲁氏菌病控制过程中具有较大的应用前景。笔者综述了布鲁氏菌病疫苗的发展史,并对布鲁氏菌病亚单位疫苗的研究进展进行概述。     

表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白的工程菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5)及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原，免疫小鼠，结果免疫小鼠至少能抵抗2MLD的大肠杆菌强毒株C83902（K88ac,ST^ ,L^ )的攻击，用提取的包涵体免疫家兔后，采集的血清能够中和天然ST1的毒性，这表明构建的工程菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5)可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。     

豫南黑猪、杜洛克、长白和大白猪FSHβ基因多态性与产仔性能的关联分析

采用PCR-RFLP技术测定了豫南黑猪、杜洛克、长白、大白猪FSHβ亚基基因多态性,测序发现豫南黑猪BB型的128与129 bp位点上插入277 bp的片段而产生多态性,限制性内切酶BamHⅠ酶切后共产生6种基因型,运用最小二乘模型将不同基因型与产仔数进行关联分析,结果显示:豫南黑猪就初产而言,基因型CC型比BC型的TNB和NBA分别多2.67和2.79头(P<0.05);经产基因型CC型比AC型的TNB和NBA分别多2.03和2.14头(P<0.05);而引进猪种初产和经产都没有显著差异。     

Cloning of vacuolar H<Superscript>+</Superscript>-ATPase subunit c genes from Japanese iris,and functional characterization in yeast

Five different isoforms (IrlVHA-c1-c5) of V-ATPase subunit c (VHA-c) were cloned from a Japanese iris (Iris lactea Pall. var. chinensis Fisch. Koidz) cDNA library using degenerate primers PCR and the 5'-RACE technique. The sequence analysis showed the open reading frame (ORF) of the IrlVHA-c1 c5 to be 495 bp, corresponding to a protein of 164 amino acids. Among the five isoforms, IrlVHA-c1 and IrlVHA-c2 are completely homologous. The IrlVHA-c protein is localized at the vacuolar membrane as indicated by a g...     

沙门氏菌菌蜕佐剂增强结核分枝杆菌4种蛋白的免疫作用研究

探究肠炎沙门氏菌菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4种抗原的免疫增强作用,本研究以MTB中的Rv3802、Rv0394c(SEC)、Rv0199及E6c10(ESAT6与CFP10融合蛋白)蛋白为免疫原,应用小鼠模型评价沙门氏菌菌蜕对MTB4种抗原的免疫佐剂效应。结果显示,蛋白加菌蜕佐剂组可以刺激小鼠产生持久高水平的抗体,并且菌蜕佐剂的免疫增强效果高于弗氏不完全佐剂;IgG1/IgG2a的比率增高,提示蛋白加菌蜕佐剂组小鼠趋向于Th2型免疫反应,同时可以诱导淋巴细胞分化为CD4+T细胞亚群并产生IFN-γ及IL-4细胞因子;病理组织学显示以菌蜕佐剂配伍蛋白制备的亚单位疫苗具有良好的安全性。本研究为结核病的预防和新型疫苗的研发奠定了一定的基础。     

高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14转化小麦

 【目的】利用基因枪将优质高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14导入普通小麦栽培品种绵阳19,为利用优质基因进行小麦品质改良奠定基础。【方法】构建小麦优质高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14的胚乳特异性植物表达载体,利用基因枪将其转入不含该亚基的小麦品种绵阳19幼胚愈伤组织中,经潮霉素抗性筛选、PCR检测后,阳性植株进行PCR-Southern和Southern杂交验证,利用SDS-PAGE分析目的基因在转基因后代籽粒中的表达。【结果】从转化的652块愈伤组织中共获得6株转基因阳性植株,转化效率0.92% 。转化后代种子分析表明,1Bx14在部分转基因后代种子中表达,但同时也导致部分内源高分子量麦谷蛋白亚基基因不同程度的沉默。【结论】本研究成功地将小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14导入普通小麦绵阳19中,并在部分后代种子中得到了表达。     

鲤疱疹病毒3型ORF57基因工程亚单位疫苗制备及免疫保护研究

旨在研究鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)囊膜蛋白ORF57作为疫苗候选抗原的可能性。根据已经发表的鲤疱疹病毒3型全基因组(GenBank登录号为DQ657948.1),设计特异性引物,扩增、克隆ORF57序列并进行生物信息学分析。构建重组原核表达载体pET-32a(+)-CyHV-3-ORF57,大肠埃希菌体外表达获得重组蛋白ORF57。此外,对ORF57亚单位疫苗的免疫保护性进行研究。鲤鱼免疫4周后CyHV-3攻毒具有75%的存活率,ORF57亚单位疫苗组鲤鱼的存活率显著高于PBS和pET-32a(+)组。实验结果证明,重组ORF57亚单位疫苗具有较强的免疫保护性,为免疫学临床的应用和CyHV-3疫苗的开发提供了实验基础。     

北方麦区小麦品种高分子量谷蛋白亚基组成及其与品质性状的关系

为了解北方麦区小麦品种的遗传多样性,挖掘可供利用的优异高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)类型,为品质改良提供基础材料,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法(SDS-PAGE),分析了172份北方麦区部分小麦品种的HMW-GS组成,并对其与蛋白质含量和沉降值之间的关系进行了研究。结果表明:Glu-A1、Glu-B1和Glu-D1分别具有3种、6种和3种不同的亚基类型。亚基1、7+9和5+10在各自位点上出现的频率最高,分别达到了54.07%、48.26%和49.42%。3个位点亚基对蛋白质含量的效应可分别表示为:1≥2*Null,13+16≥14+15≥17+18≥7+87+96+8,5+102+124+12;对沉降值的作用可分别表示为:2*≥1Null,14+15≥17+187+8≥13+167+96+8,5+102+124+12。亚基组成类型共有24种,在蛋白质含量水平上,亚基组成1/14+15/5+10、1/14+15/2+12、1/7+8/5+10、1/17+18/5+10和1/7+9/5+10相对较高;在沉降值水平上,亚基组成1/14+15/5+10、1/17+18/5+10、1/7+8/5+10、2*/7+9/5+10和1/14+15/2+12相对较高。综上所述,在24种亚基组成类型中没有发现明显优势的组合类型,优质亚基2*、17+18和14+15出现的频率较低。江苏省中筋和弱筋小麦品种选育,应结合蛋白质含量、沉降值和亚基组成进行改良。