鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离和鉴定

为研究鹅源鸭疫里默氏杆菌的生化特性、药敏情况、血清型和致病性,从扬州郊区发病鹅场分离到1株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定、玻片凝集试验,确定为Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌。对病料进行病毒分离试验,经过血凝试验和琼脂扩散试验,没有发现鹅新城疫病毒、禽流感病毒和小鹅瘟病毒。动物致病性试验结果表明,鸭疫里默氏杆菌分离菌株可以通过静脉注射、皮下注射和滴鼻3种途径感染鹅,出现100%的死亡率,说明分离株对扬州鹅具有很强的致病性,同时提示在鹅的免疫计划中也应该充分考虑到鸭疫里默氏杆菌的致病和传播。     

獭兔链球菌的分离与鉴定

对通辽市某獭兔种免场采集到的病死兔组织进行细菌分离,通过形态鉴定、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验等一系列诊断,证实链球菌感染是引起兔死亡的主要原因。根据药敏试验结果,对免群进行针对性治疗．使病情得到有效控制。     

家兔临床型乳腺炎病理模型的血液学检验

本试验选取16只3~4 kg健康泌乳家兔,通过人工造模的方法诱发其乳腺发炎,建立临床型乳腺炎模型。然后分别在造模前1 h和造模后4、12、24、36、487、2 h采集血液0.5 mL、血清1 mL,进行血常规、血生化检测和炎性细胞因子测定(ELISA)。结果显示:①外周血白细胞总数在造模后4 h显著高于造模前水平(P0.05),12~72 h内极显著高于造模前水平(P0.01);红细胞总数、红细胞压积、血红蛋白含量在造模前至造模后72 h内无显著差异(P0.05)。②血清磷离子含量、血清总胆红素含量、血清直接胆红素含量在造模前至造模后72 h内无显著差异(P0.05);血清钙离子含量在造模后4 h显著低于造模前水平(P0.05),12~72 h内极显著低于造模前水平(P0.01)。③血清TNF-α和IL-6含量造模后开始升高,12~72 h内极显著高于造模前水平(P0.01)。结果证明白细胞总数、血清钙离子含量、血清TNF-α和IL-6含量的变化可作为急性乳房炎炎症发展情况的指标。     

气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。     

Carrier rate of the c.235G>C mutation in the bovine isoleucyl-tRNA synthetase (IARS) gene of Japanese Black cows at Kagoshima prefecture, Japan,and analysis of the metabolic profiling and reproductive performance of heterozygous cows

Bovine isoleucyl-tRNA synthetase (IARS) disorder, a major cause of weak calf syndrome, is caused by a homozygous missense (c.235G>C) mutation in the bovine IARS gene of Japanese Black (JB) cattle, which was identified in 2013. However, the extent to which the carrier rate has changed at Kagoshima prefecture, Japan, and whether the carrier status is associated with any clinical or reproductive problems, have yet to be ascertained. In this study, using a real-time polymerase chain reaction-based genotyping assay, we determined the carrier rate in a regional JB cow population at Kagoshima prefecture. Comparative analyses were performed on the metabolic profile test (MPT) results and reproductive performance data obtained for heterozygous carrier and homozygous wild-type cows. In 2009 and 2018, DNA samples were collected from 130 and 462 clinically healthy JB cows, respectively, in Kagoshima prefecture. MPT results and reproductive performance data were evaluated for 62 cows, comprising four heterozygous carriers and 58 wild-type cows. Genotyping revealed that the carrier rate was 6.9% in 2009 and 1.5% in 2018, the difference of which was statistically significant (P<0.005). There were no statistically significant differences between the carrier and wild-type cows with respect to either MPT results or reproductive performance, indicating that the carrier cows have necessary IARS activity to maintain minimal health and reproductive potential.     

虾肉中氯霉素sol-gel柱显色快速检测技术研究

试验旨在建立灵敏、快速、特异的氯霉素（CAP）检测方法,基于免疫亲和色谱技术和酶联免疫技术,研究了一种新型快速检测虾肉中CAP的免疫亲和色谱柱（ICTC）检测方法。采用溶胶-凝胶（sol-gel）法制备ICTC柱的检测层和控制层,优化检测层、控制层、酶标物（CAP-HRP）稀释度等条件,制备ICTC柱。测定ICTC柱的灵敏度、特异性等性能参数,并对虾肉样本前处理方法和基质干扰效应进行优化。本研究确定ICTC柱条件为：检测层,anti-CAP sol-gel：空白sol-gel为10：1 000（V/V）;控制层,anti-HRP sol-gel：空白sol-gel为13：1 000（V/V）;CAP-HRP的稀释度为1：10⁵。采用检测层消色法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中CAP的检测限为0.5 μg/L,该方法与甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺同类药物或代谢产物均无可见交叉反应,在虾肉样本中的检测限为0.75 μg/kg。本研究建立的ICTC柱检测方法快速、灵敏,使用方便,为现场快速检测虾肉中CAP残留提供了新的技术手段。     

伊维菌素控制春乏期羊狂蝇蛆病试验

目的为有效预防和控制羊狂蝇蛆病的发生。方法选用伊维菌素在羊狂蝇成虫完全消失的11月进行驱杀羊狂蝇蛆试验,并以敌敌畏熏蒸作为对照。结果在来年羊狂蝇成蝇出现之前的长达7个月的冬春枯草季节,伊维菌素组驱虫率和驱净率均保持100％,而敌敌畏熏蒸组驱虫率保持94．69％,驱净率仅保持60％。结论选择每年11月份用伊维菌素驱虫一次,可使羊在冬春季节无任何阶段羊狂蝇幼虫寄生。     

夏秋品种两广二号引进试验初报

石泉县蚕种场2011年春季引进两广二号与秋丰×白玉这两对品种的原种进行试繁,夏季对生产的一代杂交种进行对比试验。试验表明:两广二号繁育系高,体质强健好养,单位质量桑叶的产茧量及产值高,丝质优,可作为陕南蚕区夏秋用家蚕品种的更新换代品种。     

应用鸡胚接种试验研究中草药的抗新城疫病毒作用

为了筛选出高效的抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)中草药,采用鸡胚接种试验测定了常用清热解毒中草药的体外抗NDV作用.结果表明矮地茶、侧柏叶、贯众、诃子、虎杖、白蔹、夏枯草、黄连对新城疫病毒具有较好的杀灭作用.     

基于AHP-CRITIC法的正交设计优选贞芪颗粒提取工艺及促生长作用初步研究

（目的）开发一种具有促生长作用的新中兽药贞芪颗粒,优化其提取工艺并对其促生猪生长作用进行初步研究,为其工业化生产提供参考。（方法）以总多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷、红景天苷、干膏得率作为评价指标,采用层次分析法（AHP）、基于指标相关性的权重确定方法（CRITIC）、AHP-CRITIC混合加权法确定各评价指标的权重系数,根据其正交试验结果优化贞芪颗粒提取工艺参数。将100头保育猪随机分为5组,通过在日粮中添加不同剂量的颗粒,连续喂养30天,与空白组和阳性对照组对比,计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料肉比（F: G）。（结果）AHP-CRITIC混合加权法科学优选出最佳提取工艺参数为复方药材加12-13倍质量的水提取3次（第一次13倍）,每次2.5 h。3批验证试验综合评分均值为98.91,RSD为0.79%。经过30天饲喂,高、中、低剂量组和阳性对照组的料重比无显著性差异（P>0.05）,但都显著低于空白对照组（P<0.05）,其中中剂量组的料重比最低。（结论）AHP-CRITIC混合加权法确定的权重系数客观、真实,优选出的贞芪颗粒提取工艺经验证,合理、稳定,重复性好,此工艺条件下制备的颗粒对生猪具有促进生长的作用。