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241.
家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2~ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0~ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右 相似文献
242.
从动物耳皮肤组织采样 ,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养 ,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到 10 0 %。根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5 %的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化 ,可将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。通过脂质体介导 ,以BLG -hINS(含乳球蛋白调控基因的人胰岛素原基因 )基因作为目的基因、GFP(绿色荧光蛋白 )基因作为标记基因共转染绵羊成纤维细胞 ,经G - 4 18筛选后 ,得到转染细胞。对转染的细胞分别用单细胞显微操作法和有限稀释法进行细胞克隆 ,两种方法均可得到克隆细胞。选形态正常、生长均匀的 5个细胞克隆进行PCR检测 ,结果 5个克隆均转有GFP基因 ,其中两个转有BLG -hINS基因。高代培养细胞、转染细胞和克隆细胞经核型分析后 ,染色体数目均为 2 7对 ,表明绵羊耳的成纤维细胞建立细胞株后 ,可以作为外源基因转染的有效供体细胞。 相似文献
243.
244.
禽大肠杆菌高密度发酵与溶氧关系的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用GUJS—10C小型发酵罐分批培养禽大肠杆菌,通过平板计数、比浊计数的方法,对大肠杆菌高密度发酵中细菌生长与溶氧的关系进行分析。结果表明:溶氧的规律性变化能够反映大肠杆菌生长的规律,即在细菌生长的适应期细菌数量较少,耗氧量少,溶氧曲线最高;随着发酵时间的增加,细菌不断增多,耗氧量也随之增加,溶氧曲线下降;达到对数生长期,曲线最低;进入稳定期,曲线趋于平稳;到发酵后期,细菌进入衰老期,溶氧曲线略有上升,这时可终止发酵。 相似文献
245.
Six cats with an advanced stage squamous cell carcinoma (SCC) of the nasal planum were treated with a combination of superficial radiotherapy and intralesional carboplatin therapy. This multimodality protocol was well tolerated by the majority of cats and resulted in complete responses in all cats (100%). Median follow‐up for all cats is 268 days, and the median time‐to‐recurrence, time‐to‐progression and overall survival have not yet been reached. Our study, although limited in number of animals and with a relatively short median follow‐up compared to other studies for this disease, suggests that a combination of radiotherapy and intralesional carboplatin is a useful treatment option for an advanced stage SCC of the nasal planum in cats and warrants further application of the multimodality approach presented here. 相似文献
246.
提取实验室保存禽副粘病毒-2标准毒株Yucaipa株和3株分离毒株F4、F6、F8株的RNA,经RT—PCR,获得4株毒株的HN基因,同时测得F基因与HN基因之间的序列。序列分析结果表明,HN基因的ORF全长为1743 nt,编码一个由580个氨基酸组成的蛋白。运用DNAMAN软件分析,4株毒株与GenBank上已发表毒株的HN基因的核苷酸和氨基酸之间的同源性相比,同源率分别为99.89%和99.69%。分析F基因与HN基因间序列发现两基因间序列与副粘病毒科其他病毒的基因间序列相似,含有基因起始信号和终止信号,但不含3个碱基的连接序列。通过序列分析,在分子水平上进一步证实分离于同一批进口七彩文鸟的F4、F6株是抗原性存在差异的两个毒株。毒株间的血清学关系与分子水平的核苷酸序列、氨基酸序列的比较关系一致。 相似文献
247.
Experiments evaluated the effect of glyphosate rate and Anoda cristata density, on crop and weed biomass and weed seed production in wide (70 cm) and narrow rows (35 cm) glyphosate‐resistant soyabean (Glycine max). Soyabean density was higher at 35 cm row spacing as an increase in planting rate in narrow‐row soyabean is recommended for producers in Argentina. Soyabean biomass at growth stage V4 (four nodes on the main stem with fully developed leaves beginning with the unifoliate leaves) was higher when grown on narrow than in wide‐rows but was not affected by the presence of A. cristata. At growth stage R5 (seed initiation – seed 3 mm long in a pod at one of the four uppermost nodes on the main stem, with a fully developed leaf and full canopy development), crop biomass was greater in narrow rows compared with wide rows with 12 plants m?2 of A. cristata. In narrow‐row soyabean, a single application of a reduced rate of glyphosate maintained soyabean biomass at R5 and provided excellent weed control regardless of weed density. In wide‐row soyabean control was reduced at the high weed density. Regardless of row spacing, A. cristata biomass and seed production were severely reduced by half of the recommended dose rate of glyphosate but the relationship between biomass and seed production was not altered. Glyphosate rates as low as 67.5 g a.e. ha?1 in narrow rows or 540 g a.e. ha?1 in wide rows provided excellent control of A. cristata. To minimize glyphosate use, planting narrow‐row soyabean are effective where A. cristata density is low. 相似文献
248.
F.J. López-Escudero C. del Río J.M. Caballero M.A. Blanco-López 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》2004,110(1):79-85
Resistance of 23 important olive cultivars to Verticillium dahliae has been evaluated in four experiments under controlled conditions. Nine-month-old nursery olive plants were inoculated with a cotton non-defoliating (ND) (V4) or a cotton defoliating (D) (V117) isolate of V. dahliae. Resistance was evaluated by assessing symptom severity using a 0–4 rating scale and estimating the area under disease progress curves. The percentage of plants killed and of those which recovered from the disease were used as additional parameters for including a particular cultivar into a defined category. Most of the evaluated cultivars were susceptible, although at different levels, to both isolates of V. dahliae. All cultivars were more susceptible to the D pathotype than to the ND one. A group of 11 cultivars, including several important Spanish cultivars, were susceptible or extremely susceptible to both pathotypes of V. dahliae. A second group showed differences of resistance depending on the pathotype used. They were susceptible or extremely susceptible to the D pathotype but resistant or moderately susceptible to the ND one. Finally, 'Frantoio', 'Oblonga' and 'Empeltre' were moderately susceptible to the D isolate of V. dahliae and resistant to the ND one. The resistance of 'Empeltre' was evident by the plant ability to recover from infection with either isolates. 'Empeltre' is considered to be a valuable cultivar for inclusion in breeding programmes for resistance to Verticillium wilt. 相似文献
249.
250.
通过对重庆近郊的沙坪坝区、北碚区、九龙坡区、永川市、璧山县、铜梁县的7个养鸭场病死鸭的病原分离,分离到三株细菌,经染色镜检、生化鉴定、动物回归实验,确诊为鸭里氏杆菌。药敏试验结果显示对庆大霉素、青霉素、链霉素、土霉素等高度敏感。在临床上交替使用这些药物,收到较好治疗效果。将分离菌制成灭活苗免疫1周龄的健康鸭,20日龄时用分离菌进行攻毒,平均保护率达83.3%。 相似文献