奶牛场荧光定量PCR检测实验室建设实践与思考——以原生态牧业奶牛场实验室建设为例

荧光定量PCR技术用于病原微生物基因表达、基因组变异和多态性检测等,具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,已广泛用于临床诊断和畜禽疫病诊断。本文以黑龙江原生态牧业奶牛场荧光定量PCR检测实验室建设为例,从设计规划、配套设备、人员配备、环境控制及存在问题解决五大方面进行论述,提出PCR实验室建设要根据奶牛场场地实际情况,规划适合PCR实验检测区域;根据PCR检测需求及奶牛场费用预算配置实验设备;根据奶牛场预计检测样品量配备检测人员及培养储备人员;在建立严格的操作规范基础上,严格执行实验分区管理及检测过程中消毒流程,避免实验过程中产生气溶胶污染环境。     

浅谈高尔夫球场建造的成本控制

高尔夫球场建造项目经济利润是高尔夫施工单位存在和长期发展的基础,也是施工单位追求的最终目标.高尔夫施工单位项目利润主要来源于建造工程成本的控制.随着市场经济的深入发展,高尔夫项目建造竞争越来越激烈,施工单位的利润空间越来越低.通过有效措施来控制高尔夫球场建造的成本,成为施工单位获得最大盈利的重点.本研究通过阐述高尔夫球...     

利用CRISPR/Cas9系统编辑日本结缕草ZjSGR基因技术研究

日本结缕草(Zoysia japonica)是一种常见的具有众多优良性状的暖季型草种,秋冬季节在我国北方地区会较早出现叶片脱绿现象,在一定程度上限制了日本结缕草在北方的大面积使用。ZjSGR是从结缕草中分离出来的一种衰老诱导基因,负调控叶片滞绿性状。本研究利用CRISPR/Cas9系统,通过基因枪介导的遗传转化方法实现对日本结缕草ZjSGR基因的编辑,经测序验证获得1株单碱基缺失突变植株。突变植株叶片深绿,在正常生长温度(28～30℃)条件下,和对照相比,叶绿素含量更高(P <0.05)。本研究为进一步阐述ZjSGR基因在日本结缕草滞绿性状调控中的作用机理提供了基础研究材料,也为培育日本结缕草滞绿品种育种工作奠定了基础。     

中国水土流失问题的初探

长期以来,水土流失直接威胁着人们赖以生存的环境,在所有的生态破坏中,水土流失称之为“环境破坏第一杀手”。针对我国山地丘陵面积大、地质条件复杂、人为破坏加速、水土流失严重的实际情况,通过丰富的历史资料和整治经验及野外工作所积累的大量数据分析,以生态恢复学为指导,总结了水土流失的基本特点,研究了水土流失治理与经济可持续发展的关系,探讨了水土流失给生态安全造成的巨大危害,展望了水土保持的预期目标,根据中国的实际情况,提出了综合治理的基本思路。     

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建与鉴定

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ酶切法、ＰＣＲ和核酸探针法进行了鉴定，证明插入的基因来自ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵ－ＣＬａＦｃ，插入的位置和方向都正确。这２个载体的构建为Ｆｃ基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。     

NLRP3炎症复合体的体外构建

为体外构建NLRP3炎症复合体,利用PCR方法扩增目的基因NLRP3、IL-1β、ASC和Pro-Caspase-1,分别连接到相应的载体中,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA,利用Lipofectamine2000试剂转染到HEK293T细胞后,采用Western blot方法验证各蛋白的表达情况;通过质粒共转染体外构建NLRP3炎症复合体,采用ELISA方法检测IL-1β生成情况。结果显示,3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA重组质粒均被成功构建,各蛋白于HEK293T细胞内均被成功表达;质粒共转染后ELISA检测到高水平的IL-1β生成,表明NLRP3炎症复合体体外构建成功。NLRP3炎症复合体在体外的成功构建,为进一步研究其激活机制奠定了基础。     

社会需求与兽医系统实验室能力提升

兽医系统实验室在指导动物疫病防控、维护公共卫生安全等方面占有举足轻重的地位。随着动物疫病防控工作的不断深化,加强兽医系统实验室能力建设显得尤为紧迫。本文着重介绍了近年来重庆市兽医实验室体系建设的一些实践措施,以期为其他省份兽医系统实验室的进一步发展提供参考。     

党的先进性建设如何借鉴国际共产主义运动的基本经验教训

前苏联及东欧共产党丧失执政地位使国际共产主义运动遭受重大挫折的原因有很多，最重要的因素是苏东共产党蜕化变质。没有按照党的先进性来建设党，丧失了党的思想、理论、阶级基础、群众基础、前进方向的先进性，从而失去了它作为无产阶级先锋队的作用，削弱乃至丧失了执政能力，最终葬送了社会主义事业也葬送了党的自身。国际共产主义的经验教训对中国共产党人在全党开展先进性建设的启示是深刻而巨大的：在新的形势下必须坚持党在指导思想上与时俱进；必须从严治党，建立党的先进性建设长效机制；必须加强党的执政能力建设。巩固党的执政基础；必须加大反腐败力度。永葆党的先进性。     

小反刍兽疫病毒H、F基因转基因苜蓿表达载体的构建

为了有效预防小反刍兽疫,试验以pBI121为载体,PPRV-H、PPRV-F为目的基因,并插入绿色荧光蛋白(GFP)基因、MAR序列,构建5种小反刍兽疫病毒(PPRV)苜蓿表达载体。结果表明:成功构建小反刍兽疫表达载体,再将表达载体转入苜蓿,饲喂动物,选择其中免疫效果最好的表达载体,为该病的预防工作提供有效的技术支持。     

2000-2050年中国草地资源综合生产能力预测分析

分析了中国草地资源的面积变化动态和生产力现状及主要问题，探讨了未来50年中国草地资源综合生产能力增长的主要途径和措施。在此基础上预测分析了至2010年、2030年和2050年中国草地资源生产能力的增长趋势和潜力空间及其地域分布状况，并简要论述了中国草地畜牧业在未来50年国民经济发展、西部开发和解决人民吃饭问题中所应具有的地位。