CRISPR/Cas9技术敲除酿酒酵母gpd2基因对产2,3-丁二醇的影响

旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除酿酒酵母甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2),探究其对2,3-丁二醇产量的影响。根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W5甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2)设计供体片段及gRNA片段,将gRNA片段与可表达Cas9蛋白的敲除载体相连,之后将重组质粒及供体DNA片段转化到S. cerevisiae W5细胞中,根据表型筛选及PCR验证获得gpd2基因缺失菌株。结果表明目的基因gpd2敲除成功,基因缺失菌株与原始菌株经发酵实验相比,甘油产量下降22.01%,乙醇产量提高24.65%,2,3-丁二醇产量下降10.60%。gpd2基因的敲除并没有提高2,3-丁二醇的产量,原因可能是逐渐积累的NADH会优先被细胞内大量的乙醇脱氢酶所氧化,作用于乙醇的产生,而不是优先作用于2,3-丁二醇的合成。本实验构建了适用于酿酒酵母的基因敲除系统,该系统对进一步探究酿酒酵母其他代谢产物与2,3-丁二醇合成之间的关系具有实际的借鉴意义。     

淮安米市网建设探讨

通过对淮安米市网建设的探讨,提出了创办淮安米市网特色网站的目标、着力点和实质内容,完善了网站功能,提升了网络效益,促进了淮安米业发展。     

木薯金属硫蛋白基因的克隆和表达分析

金属硫蛋白(metallothionein,MT)分子量小,半胱氨酸含量高,具有消除离子自由基,减弱重金属毒性和减少体内活性氧积累等功能。为探究木薯金属硫蛋白基因(MeMT)的原核表达能力和对活性氧的耐受性,本研究通过木薯cDNA克隆获取MeMT并将其连接至pET-28a,在BL21(DE3)菌株中成功诱导其表达。H2O2耐受性分析发现,与空载菌株相比,表达MeMT蛋白的DE3菌株对H2O2的耐受水平较高。RT-qPCR技术检测显示,在H2O2胁迫下,3 h时木薯叶片中MeMT的表达水平明显升高,但6 h时恢复甚至略低于对照组,证明MeMT在木薯中参与ROS应答过程。该结果对研究木薯抗逆性和产量的提高具有重要意义。     

基于供应网络能力研究框架分析我国乡村旅游供应链发展现状

游客需求的多样化、旅游目的地功能强化、信息技术影响加剧都在表明传统的旅游模式已经 无法再满足的客户的需求与市场的变化，旅游供应链的构建与优化是发展旅游业的大势所趋。本文 将借助供应网络能力的研究框架，从网络定位、网络构造、网络管理三个方面分析我国旅游供应链的 发展现状。     

机电设备安装的现场深化设计与施工

我国机电设备运营系统凸显了一系列问题,在很大程度上制约了其发展。文章通过对机电设备安装的论述,分析了现场深化的要求和作用,总结出机电设备安装的现场深化设计与施工的注意事项。     

高职英语ESP课堂教学模式改革与师资队伍建设

专门用途英语（ESP）是一种新型教学模式，能够增强学生英语实用能力，使其适应职业岗位的需求。阐述ESP课堂教学的实施办法，对ESP师资队伍建设提出要求，以期为高职院校英语教学向注重学生职业能力培养方向改革提供参考。     

小型低维护景观设计探析

通过对国内外低维护景观的实践案例分析,认为植物景观因其独特的美学和生态价值已然成为生活中不可或缺的一部分。探讨了低维护景观的概念,以及小型低维护景观设计的必要性、可行性和发展前景。将景观维护成本的影响因素归结为植物更替、设备维护,进而从低维护植物设计和种植容器设计两方面探讨了小型景观维护成本的控制问题。通过构建从雨水收集到自动循环利用的系统,根据植物生长特点,合理搭配种植,建立一个美观实用的小型低维护景观。     

海盐县农房建设GIS信息系统研究与开发

以浙江省海盐县为例,对我国农房建设GIS信息系统的建设内容、技术路线、实现方法等进行了阐述,通过此项目实现了对农房建设项目信息申报、项目审批和农房空间可视化等系统功能,为农房建设规范化、可控化、权力下放等提供了技术支持,也可为其他地区农房建设信息化管理提供项目经验和技术参考。     

陕北丘陵沟壑区畜牧业发展问题研究

陕北丘陵沟壑区是陕北水土流失最严重的区域,也是国家黄土高原综合治理的主要区域。由于生态建设的需要,以放牧为主的畜牧业面临挑战。本文在对陕北丘陵沟壑区畜牧业发展现状和存在问题调查研究的基础上,分析了该区粮食生产对畜牧业的影响,提出了陕北丘陵沟壑区不同种类家畜发展的方向及畜牧业发展总体思路：陕北丘陵沟壑区应以舍饲养羊为主,全面发展各种适宜舍饲的畜禽品种;以生态建设和经济发展为目标,促进陕北畜牧业可持续发展。     

NLRP3炎症复合体的体外构建

为体外构建NLRP3炎症复合体,利用PCR方法扩增目的基因NLRP3、IL-1β、ASC和Pro-Caspase-1,分别连接到相应的载体中,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA,利用Lipofectamine2000试剂转染到HEK293T细胞后,采用Western blot方法验证各蛋白的表达情况;通过质粒共转染体外构建NLRP3炎症复合体,采用ELISA方法检测IL-1β生成情况。结果显示,3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA重组质粒均被成功构建,各蛋白于HEK293T细胞内均被成功表达;质粒共转染后ELISA检测到高水平的IL-1β生成,表明NLRP3炎症复合体体外构建成功。NLRP3炎症复合体在体外的成功构建,为进一步研究其激活机制奠定了基础。