Evaluation of a high-throughput nucleic acid extraction method for the detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in bovine fecal samples by PCR

Johne’s disease (paratuberculosis) is an economically important disease of cattle worldwide. The disease is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), a fastidious gram-positive bacterium. PCR is increasingly used in diagnostic laboratories for the detection of MAP in fecal samples given the rapid test turnaround time and sensitivity and specificity comparable to fecal culture. However, efficient extraction of DNA for sensitive detection of MAP by PCR is affected by the complex lipid-rich cell wall of MAP and the presence of PCR inhibitors in feces. We evaluated a high-throughput nucleic acid extraction method (MagMAX core nucleic acid purification kit with mechanical lysis module) in conjunction with an hspX gene PCR for the detection of MAP from bovine fecal samples, which resulted in correct identification of all negative (13 of 13) and positive (35 of 35) proficiency test samples obtained from the National Veterinary Services Laboratories. In addition, all 6 negative and 50 of 51 positive diagnostic specimens tested were categorized correctly.     

基于AHP-CRITIC法的正交设计优选贞芪颗粒提取工艺及促生长作用初步研究

（目的）开发一种具有促生长作用的新中兽药贞芪颗粒,优化其提取工艺并对其促生猪生长作用进行初步研究,为其工业化生产提供参考。（方法）以总多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷、红景天苷、干膏得率作为评价指标,采用层次分析法（AHP）、基于指标相关性的权重确定方法（CRITIC）、AHP-CRITIC混合加权法确定各评价指标的权重系数,根据其正交试验结果优化贞芪颗粒提取工艺参数。将100头保育猪随机分为5组,通过在日粮中添加不同剂量的颗粒,连续喂养30天,与空白组和阳性对照组对比,计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料肉比（F: G）。（结果）AHP-CRITIC混合加权法科学优选出最佳提取工艺参数为复方药材加12-13倍质量的水提取3次（第一次13倍）,每次2.5 h。3批验证试验综合评分均值为98.91,RSD为0.79%。经过30天饲喂,高、中、低剂量组和阳性对照组的料重比无显著性差异（P>0.05）,但都显著低于空白对照组（P<0.05）,其中中剂量组的料重比最低。（结论）AHP-CRITIC混合加权法确定的权重系数客观、真实,优选出的贞芪颗粒提取工艺经验证,合理、稳定,重复性好,此工艺条件下制备的颗粒对生猪具有促进生长的作用。     

微波辅助提取山豆根多糖工艺的优化

采用正交试验筛选山豆根多糖的最佳提取工艺.结果表明,山豆根多糖的最佳提取工艺为料液比1∶10(m/V,g∶mL),提取2次,提取时间90 min,此条件下山豆根多糖提取率为3.62％.该方法简便、准确、灵敏度高,适用于山豆根多糖的提取.     

高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

针对柑橘老熟组织中富含多糖、多酚、色素和其它次生代谢产物的特点,以柑橘老叶老皮为试材,在传统CTAB提取法的基础上通过添加增效剂并优化配方,建立了一种快速、简便的提取植物老熟组织及其内部病原总核酸的CTAB-Triton提取法。新的提取液对细胞的裂解能力更强,且解决了传统CTAB溶液因低温析出而致DNA得率损失的弊端。比较了该法和微量葡聚糖柱纯化法制备模板时韧皮部杆菌的检出率,并用该法制备模板,分析了韧皮部杆菌在柚子叶片中的分布情况,及对其它几种柑橘病原菌进行PCR/RT-PCR检测。结果表明,CTAB-Triton方法能有效提取柑橘老熟叶片的DNA,所得DNA质量高,产量比商品化试剂盒大,提高了韧皮部杆菌的检出率,且可用于柑橘其他病原真菌、细菌,以及DNA或RNA病毒病害的PCR/RT-PCR检测,也可用于定量PCR检测和病原种群多态性分析。     

紫罗兰色素的提取和稳定性研究

以紫色紫罗兰花瓣为原料,采用溶剂提取法,通过单因素试验和正交实验,对紫罗兰色素的提取工艺进行优化,并对色素的稳定性进行了研究。结果表明:紫色紫罗兰花瓣色素最佳提取工艺为:丙酮为提取剂、1∶40料液比、3.0h提取时间、55℃温度下效果最好;该色素不耐高温,耐氧化性较弱,紫外光有明显减色作用,中性偏弱酸性下能保持稳定,葡萄糖、柠檬酸对其有保护作用;Fe3+对色素有较大影响。     

围栏封育对退化灌丛草地群落土壤特性和植被的影响

以雅鲁藏布江中游半干旱河谷山地灌丛草地群落为研究对象,采用野外调查和室内试验结合的方法,研究了围栏封育对灌丛草地植被及土壤养分含量的影响,以期为有效修复雅鲁藏布江中游河谷山地植被退化提供科学参考。结果表明:围栏封育3年土壤有机质、全磷、速效磷、速效钾含量均高于围栏外,土壤表层(0～10cm)养分含量增加显著(P<0.05),随着土壤深度的增加,土壤养分含量与围栏外逐渐趋于一致,至30～40cm到达相同水平;围栏封育后灌丛草地群落高度和产量显著增加(P<0.05),分别比围栏外增加了74%和101%,高度、产量增加主要是由禾本科和莎草科引起;围栏封育对群落组成和物种重要值产生不同程度的影响,主要表现为生物多样性增加,禾本科、莎草科等适口性好的物种重要值增加,杂草类不可食物种重要值相对下降;Rarefaction曲线法结果显示,围栏内物种多样性大于围栏外,与传统多样性指数方法结果一致。     

萃取大红袍花椒挥发油的研究

利用超临界CO2萃取装置，采用动态萃取的方法，研究了压力、温度、萃取时间等因子对花椒挥发油萃取的影响，为规模化生产及其相关研究提供了科学依据。研究表明，样品200g粒度40目，最佳的萃取条件为：压力33MPa，温度55℃，时间1．0h，花椒挥发油萃取率为10．2％。气-质联用分析花椒挥发油结果表明，挥发油为3-甲基-2氮杂芴、γ-萜品烯、3-蒈烯等31种化舍物组成。其中3-甲基-2-氮杂芴含量最高，达到18．63％。     

纤维素酶法提取山药多糖的工艺研究

优选并确立纤维素酶法提取山药多糖的最佳工艺。在单因素试验的基础上,采取正交试验,以山药多糖含量为指标,对影响多糖提取的4个因素(酶用量、温度、时间和pH值)进行优化研究。结果显示,提取温度是影响山药多糖提取率最重要的因素,其次是酶用量和pH值,在实验范围内,酶提取时间对实验结果的影响较小。纤维素酶法提取山药多糖的最佳参数为:酶用量为0.2%,提取温度为55℃,提取时间为3h,pH值为7.0。     

南瓜籽油溶剂法提取工艺及脂肪酸成分的研究

研究了南瓜籽油的溶剂提取法,分别使用乙醚、石油醚和正己烷提取南瓜籽油,确定南瓜籽油的提取工艺为:提取溶剂为乙醚,提取温度54℃,提取时间5h,南瓜籽的出油率为47.29%。气相色谱分析南瓜籽油表明,南瓜籽油中主要含有4种脂肪酸,分别是棕榈酸、亚油酸、油酸和硬脂酸。     

Application on Extracting Feature in State Monitoring and Fault Diagnosis

With the development and application of information and internet and virtual instrument technology ,the virtual globular company based on internet arises .To study remote state monitoring, remote fault detection and diagnosis about large scale, complicated and integrative equipment become very important. In the whole fault diagnosis system , the detecting ,data acquisition is original ,processing; transform and extracting features with the signal detected is a key factor. The theories and methods used in mechanical fault diagnosis is stated. The application of signal process and its feature extracting methods is introduced which are time domain, frequency domain and time frequency domain analysis, in state monitoring and fault diagnosis with its signal analysis. The processing method of random time variant special signal is given also.