提高无核葡萄胚挽救中幼胚成苗率的研究

 【目的】提高无核葡萄胚挽救中幼胚的成苗率。【方法】以7个杂交组合的胚珠为试材,研究不同基因型、不同胚珠发育培养基、添加不同氨基酸及低温处理采后幼果对无核葡萄胚成苗率的影响。【结果】在无核葡萄胚离体发育中,母本和父本对胚的成苗均有影响;在二倍体无核葡萄作母本的杂交组合中,以二倍体无核葡萄作父本比以四倍体有核葡萄作父本更有利于胚的成苗。在3种不同配方的培养基中,适宜于无核葡萄离体幼胚发育和成苗的培养基是MM4。ER添加4 mmol?L-1脯氨酸培养基最有利于无核葡萄胚的发育。低温处理3 d对红宝石无核×森田尼无核和红宝石无核×黑奥林胚的成苗促进最大。【结论】无核葡萄胚挽救的适宜培养基是ER+4 mmol?L-1脯氨酸或MM4培养基,低温处理幼果3 d能有效提高二倍体无核葡萄×二倍体无核葡萄胚挽救中胚的成苗率。     

禽腺联病毒全基因组的克隆及感染性病毒的拯救

为了克隆禽腺联病毒(Avian adeno-associated virus,AAAV)全基因组用于构建基因转移载体研究,以鸡胚致死孤儿病毒(CELO)作为辅助病毒与AAAV共接种SPF鸡胚进行AAAV的增殖,将AAAV约4.7kb双链基因组DNA与pCR2.1载体连接,构建了含AAAV全基因组的重组质粒pAAAV并进行了测序。序列分析表明,AAAV YZ-1株的基因组为4684bp,两端具有141bp的末端倒置重复序列和Rep蛋白结合位点特征序列,与GenBank中收录的AAAV DA-1株和VR-865株的核苷酸序列同源性分别为95.0%和92.2%。将pAAAV质粒转染CELO病毒感染的鸡胚肝细胞系,获得了感染性AAAV病毒粒子,结果证明克隆的AAAV基因组中存在与病毒复制和包装相关的正确关键序列,可用于重组AAAV载体的构建。     

Evaluation of a multi‐agent chemotherapy protocol combining lomustine,procarbazine and prednisolone (LPP) for the treatment of relapsed canine non‐Hodgkin high‐grade lymphomas

The standard of care treatment for canine lymphoma is multi‐agent chemotherapy containing prednisolone, cyclophosphamide, vincristine and an anthracycline such as doxorubicin (CHOP) or epirubicin (CEOP). Lomustine, vincristine, procarbazine, and prednisone (LOPP) has been evaluated as a rescue, with encouraging results; however, resistance to vincristine is likely in patients relapsing on CHOP/CEOP, and this agent may enhance LOPP toxicity without improving efficacy. The aim of this study was to evaluate responses to a modified‐LOPP protocol that does not include vincristine (LPP) and is administered on a 21‐day cycle. Medical records of dogs with high‐grade multicentric lymphoma from 2012 to 2017 were reviewed. Dogs with relapsed lymphoma that received LPP as a rescue protocol were enrolled. Response, time from initiation to discontinuation (TTD) and toxicity of LPP were assessed. Forty‐one dogs were included. Twenty‐five dogs (61%) responded to LPP including 12 complete responses (CR) and 13 partial responses (PR). Responders had a significantly longer TTD (P < .001) compared to non‐responders with 84 days for CR and 58 days for PR. Neutropenia was documented in 20 dogs (57%): 12 grade I to II, 8 grade III to IV. Thrombocytopenia was infrequent (20%): 5 grade I to II, 2 grade III to IV. Twelve dogs developed gastrointestinal toxicity (30%): 10 grade I to II and 2 grade III. Nineteen dogs had elevated ALT (59%): 9 grade I to II, 10 grade III to IV. Treatment was discontinued due to toxicity in 8 dogs (19%). The LPP protocol shows acceptable efficacy and toxicity‐profile and minimizes in‐hospital procedures.     

枣树免去雄杂交育种的设计与实践

在枣树杂交育种中,因其花朵很小去雄难、坐果率低、胚败育严重,常规人工授粉杂种得率通常只有万分之一左右,致使杂交育种长期徘徊不前,至今未有人工杂交枣新品种问世。作者历时10余年,以解决去雄难和胚败育严重两大瓶颈问题为突破口,在系统研究枣树不同种质结实特性和花粉育性并攻克幼胚挽救技术的基础上,探索建立枣树免去雄杂交育种的高效技术体系,并在育种实践中加以改进和完善。通过人工控制杂交,成功获得了2 个组合的211 个杂种后代。从育种目标、亲本选配、免去雄控制杂交、授粉方法、胚培养及杂种的分子标记鉴定等方面提出了枣树杂交育种的设计方案与实现途径。并对今后枣树杂交育种的攻关重点和发展前景进行了分析讨论。     

热不对称PCR(TAIL-PCR)和Tn5转座子质粒拯救法快速分离水稻条斑病菌致病相关基因

构建植物病原菌突变体库是进行新基因发掘和功能基因组学研究的有效途径之一.为快速准确地鉴定Tn5的插入位点和相应的功能基因,研究采用热不对称PCR(TAIL-PCR)和Tn5转座子质粒拯救两种技术,鉴别了在筛选水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)Tn5插入突变体库过程中获得的8个在水稻(Oryza sativa)上毒性减弱的突变体.结果显示,TAIL-PCR和Tn5质粒拯救结合使用,可有效地鉴别Tn5的插入位点和相应的功能基因.TAIL-PCR鉴别的5株突变体是Tn5分别插入在分泌系统结构蛋白F基因(gspF)、cAMP调控蛋白、膜镶嵌蛋白酶酶原、S-蛋硫氨酸脱羧酶亚基和gspJ基因上;Tn5质粒拯救法鉴别的3株突变体是Tn5分别插入在致病性蛋白、功能未知的保守蛋白和鞭毛特异性ATP合酶基因上.序列同源性分析发现,8株突变体Tn5插入的基因与基因组测序的BLS256菌株中的对应基因同一性达100%.这表明,TAIL-PCR和Tn5质粒拯救技术可有效地应用于植物病原菌Tn5突变体库的鉴别和目标基因的分离.     

不同成熟期桃胚培养的相关影响因子研究

以不同成熟期的桃品种为试材,对影响桃胚培养的基本培养基和糖浓度、成熟期、采样时期、种皮划伤方式和光暗处理等因子研究表明:①WPM培养基的萌芽率优于1/2MS和MS培养基;随着蔗糖浓度的增高,早熟桃的胚萌芽率增大,中晚熟品种是先增大后降低;②不同成熟期的晶种低温处理时间、萌芽率和污染率不同;③同一晶种不同采样时期低温处理时间、萌芽率和污染率亦不同;④综合种胚的萌芽率和污染率,种皮划伤优于剥种皮和不剥种皮;⑤黑睛条件下生长的胚培养苗比光下培养的有利于胚轴的再生.     

早熟甜樱桃胚挽救研究

以早熟甜樱桃为主要试材,调查了胚发育及败育过程,研究了影响胚挽救的主要因子,建立了简单高效的胚挽救技术程序。     

从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究

以携带猪瘟病毒Thiverval株全长cDNA克隆的pAC/F101/T1-7载体质粒为模板,在体外转录病毒基因组RNA,并转染PK-15和BHK-21细胞,通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,成功地在两种细胞中拯救出具有感染性的病毒粒子。同时,通过2种细胞转染效率的对比试验,成功建立了利用高转染效率的其它真核细胞作为病毒拯救的过渡细胞,然后再在猪肾细胞系上进行增殖的病毒拯救方式,极大提高了猪瘟病毒拯救的效率。     

山地灾害与水土流失

我国山地灾害主要以崩塌、滑坡及泥石流为主(称崩滑流灾害).长期以来严重威胁人民生命财产和社会经济安全,广泛破坏资源环境,造成大量水土流失,已成为社会发展的重大制约因素.     

木纳格葡萄胚挽救苗的获得及其无核性状分子鉴定

以木纳格葡萄败育型胚珠为材料进行胚挽救,按照已建立的适合白木纳格葡萄败育型胚珠培养体系进行实验,获得了大量木纳格葡萄胚挽救幼苗,炼苗后移栽到大田中种植。并结合已有分子标记技术,对胚挽救幼苗进行鉴定,结果显示45株胚挽救幼苗中,有21株扩增获得了目的片段,初步确定为具有无核性状的葡萄苗。