草菇低温诱导蛋白的初步研究

低温诱导草菇（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ ｖｏｌｖａｃｅａ）菌丝体一时间后,发现草菇在低温胁迫中产生了新的可溶性蛋白质。应用电泳分离制备技术,分离纯化了草菇菌丝体中的一个低温诱导蛋白。     

草菇蛋白酶的鉴定

草菇是我国食用菌主要栽培品种之一,属于典型高温真菌。低温将诱导草菇细胞内的蛋白质降解;造成草菇菌丝自溶、死亡。蛋白酶在草菇低温自溶过程中起了重要作用。在分离、纯化草菇蛋白酶的基础上,采用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白酶的分子量为23KD,并测定了蛋白酶不同温度下的活性变化曲线,为草菇低温自溶与蛋白酶之间关系 的研究奠定了基础。     

草菇子实体提取物的抗氧化活性

为考察草菇(Volvariella volvacea)子实体提取物(VBS)的抗氧化活性,测定了对两种自由基的清除率及其总还原力,结果表明:对羟自由基和DPPH自由基的清除率以及总还原力均与VBS的浓度存在正相关的量效关系,IC50值分别为1.40、0.67、0.63mg/mL。以ICR雄性小鼠为研究对象,灌胃给药12d,再用CCl4花生油溶液灌胃,8h后分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活力及丙二醛(MDA)的含量,各项指标在血清中的结果表明,VBS中剂量组(200 mg/kg)的抗氧化活性较好,而在肝脏中则表明VBS高剂量组(400mg/kg)的抗氧化活性较好。     

TV1草菇主要生物学特性研究

对ＴＶ１草菇菌丝在不同培养基,不同温度,不同ｐＨ值上生长速度和生长势进行了比较与测定,同时对阳畦生料栽培ＴＶ１草菇内出菇时间,产量及子实体形态进行了观察与测定。结果表明ＴＶ１草菇菌丝生长的最适母种培养在与马铃薯综合培养基和棉籽皮综合培养基;菌丝在３４～３８℃条件下生长最好;菌丝生长的最适ｐＨ值为７～８。阳畦栽培结果发现ＴＶ１草菇在棉籽皮培养料上生长快,耐高温,每百千克干料可产鲜菇４０ｋｇ以上,子实     

草菇多酚氧化酶基因的克隆与表达分析

【目的】解析草菇多酚氧化酶基因家族序列信息,明确其特征和表达模式。【方法】通过转录组测序找出含有酪氨酸酶结构域的基因,并根据搜索得到的序列设计引物,以不同发育时期的草菇 v26 菌株,以及草菇蛋形期外菌膜、菌盖、菌柄等不同组织为材料提取 RNA,经反转录为 cDNA,扩增获得草菇多酚氧化酶基因序列。采用在线生物信息学网站预测草菇多酚氧化酶的理化性质。采用 RT-PCR 的方法,检测草菇不同发育时期和不同组织部位多酚氧化酶的表达模式。【结果】获得 4 个草菇多酚氧化酶基因家族的 CDS 序列,依次命名为 VvPPO1、VvPPO2、VvPPO3、VvPPO4,其中 VvPPO1 CDS 全长 1 596 bp、编码 531 个氨基酸,VvPPO2 CDS 全长 2 685 bp、编码 894 个氨基酸,VvPPO3 CDS 全长 1 593 bp、编码 530 个氨基酸,VvPPO4 CDS 全长2 067 bp、编码 688 个氨基酸。生物信息学分析表明,4 个基因编码的蛋白均含有 2 个铜离子结合区,为亲水性蛋白;RT-PCR 结果显示,4 个基因在草菇发育的菌丝期、原基期、蛋形期、成熟期均有表达,VvPPO1、VvPPO3 和VvPPO4 的表达量在子实体时期高于菌丝期,在蛋形期 VvPPO1 和 VvPPO4 在外菌膜的表达量比在菌柄和菌盖中的表达量高。【结论】在草菇中搜索得到 4 个多酚氧化酶基因,均含有 2 个铜离子结合区,4 个基因在各个发育时期均有表达。     

草菇厚垣孢子形成条件的研究

本文报道有关草菇厚垣孢子形成的条件.其中,营养丰歉状况直接地影响孢子产生的迟早与数量,磷、镁的存在,弱酸性条件和30～35℃温度范围有利于孢子的产生。     

杀虫杀螨剂对草菇菌丝生长的影响

采用修正的琼脂玻皿法研究了四种杀虫杀螨剂对草菇菌丝生长的影响.结果表明,不同药剂对草菇菌丝生长的影响程度存在着显著差异.其中敌敌畏对草菇菌丝生长的影响最大,其平均抑制率为-65.55%;中西溴氟菊酯影响最小,平均抑制率为-11.40%,且在25.00×10~(-6)和20.00×10~(-6)的低浓度下对草菇菌丝的生长还有促进作用,促进率分别为 11.25%和 17.75%;灭螨灵和氯氰菊酯的平均抑制率分别为-29.20%和-29.60%.药剂的浓度与草菇菌丝的生长率成显著或极显著的负相关,即草菇菌丝的生长率随药剂处理浓度的增大而降低.本研究结果还表明,药剂对草菇菌丝生长的影响不仅表现在生长率上,还表现在草菇菌丝密度、分枝次数、厚垣孢子数量及菌丝色泽上.     

草菇基因文库的构建(英文)

应用基因重细技术,我们建立丁一个草菇总DNA的部分基因文库。通过限制性内切酶Sau 3AI部分酶切纯化的草菇总DNA,得到小于4kb的DNA片段。这些DNA片段插入到经Bam HI酶切及碱性磷酶酯酶处理的pUC18质粒,转化感受态细胞DH5α。在此研究中。我们比较了两种转化方法(氯化钙转化法和电转化法)的转化效率,电转化法的转化效率高于氯化钙转化法数千倍,达到2×10(2)CFU/μg DNA。在此实验中DNA重组率是64%,这个草菇总DNA的部分基因文库由8000个克隆组成,平均每个克隆含有1.5kb的草菇DNA。此基因文库含有15%的草菇总DNA。可作为分子标记用于DNA指纹图谱分析及作为遗传学标记用于RFLPs的遗传图谱分析。     

菇类增产细菌864菌株若干特性及其在菇类栽培上的应用效果

本文报道了草菇培养料中分离得到的一株对菇类有益的细菌(暂称864菌)。研究结果表明,该菌株系革兰氏阴性杆菌,细胞大小为0.5～0.8×0.9～1.1μm,细胞外壁有荚膜,周身鞭毛;在Ashby氏无氮培养基上,菌落呈圆形,中稍突,面包状,表面光滑,边缘整齐,有闪光,粘稠;好氧、最适生长pH为7,最适生长温度为30℃;能固定空气中的氮素,供菇类菌丝利用;菌液含有多糖、蛋白质、纤维素等菇类营养;分泌物含有刺激素,能促进菌丝扭结,子实体发育,添加864菌液培养料的产量与传统发酵培养料的相比:草菇提高了20.33～42.67%;姬松茸菇提高了54.3%;蘑菇提高了40.7～83.27%;金针菇提高了14.38％。     

应用iTRAQ结合2D LC-MS/MS技术分析草菇同核和异核菌丝蛋白质组

首次利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱对草菇(Volvariella volvacea)同核和异核菌丝蛋白质组进行研究。采用QExactive质谱鉴定并经MASCOT软件搜库,对所有鉴定蛋白进行主成分分析(principal component analysis,PCA)、层次聚类(hierarchical clustering)分析和GO(gene ontology)注释,并进行生物信息学分析。结果共获得2335个不同肽段,鉴定到1039个蛋白,其中1030个蛋白具有定量信息。在同核菌丝中显著上调蛋白83个,下调蛋白97个,表明iTRAQ标记技术结合二维液相色谱串联质谱可有效地分离和鉴定草菇菌丝蛋白质组。该研究结果为更深入全面地研究草菇菌丝蛋白质组学奠定基础。