氯化汞对草地贪夜蛾sf9细胞及核型多角体病毒的损伤与致突变研究

目的试验以草地贪夜蛾细胞sf9作为受体,检测氯化汞对其生长发育的影响。方法采用台盼兰染料排斥法测定细胞活力,苏木素-伊红染色法检测细胞中的微核,对经氯化汞处理诱变的病毒AcMNPV的DNA进行PCR扩增,产物经测序后进行分子突变分析。结果sf9细胞在4μg·ml-1的氯化汞浓度作用下,其细胞表面变得粗糙,分裂生长减慢,当剂量增大到7μg·ml-1时,便可观察到一些细胞的细胞膜破裂,在9μg·ml-1时,某些细胞的完整性受到破坏。用苏木素-伊红染色法检测细胞中的微核现象时,9μg·ml-1氯化汞处理区的微核率高达6.8%,有些细胞出现三核甚至多核的核裂现象,反映部分细胞的完整性受到一定程度的损伤。AcMNPV病毒经氯化汞短时间处理后接种于sf9细胞,多角体在sf9细胞中的形成数目较对照区少,异常多角体的比例增加,抽提经氯化汞处理的AcMNPV的DNA,采取PCR技术进行扩增反应,对获得的扩增产物进行测序分析,发现DNA序列上的碱基有2处G→C、T→C的转换和碱基缺失的现象。结论一定剂量的氯化汞将会引起草地贪夜蛾sf9细胞及核型多角体病毒的损伤与致突变。     

八字地老虎核型多角体病毒对原始寄主及交互寄主甘蓝夜蛾幼虫的毒力测定

分别用５种浓度的八字地老虎核型多角体病毒（Ｘｃ－ｎＮＰＶ）悬液接种２龄八字地老虎幼虫和２龄甘蓝夜蛾幼虫。结果表示,两者的ＬＧ_（５０）和 ＬＴ_（５０）相差不大,可见Ｘｃ－ｎＮＰＶ对两者的毒力和潜伏期相当。用感染Ｘｃ－ｎＮＰＶ后致死的甘蓝夜蛾幼虫体内分离的病毒回接２龄八字地老虎幼虫,发现这一病毒对八字地老虎幼虫的毒力不高。     

AcMNPV chiA基因表达产物对棉铃虫围食膜的破坏及对Bt和NPV的增效作用

采用PCR方法扩增出苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcMNPV)几丁质酶基因(chiA)编码区1.6kb全长片段,并将该片段分别克隆至原核表达载体pET30a和杆状病毒BactoBac表达系统转移载体pFastBac中,分别在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)和草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞系Sf-9中进行了表达。SDS-PAGE分析表明,在大肠杆菌和昆虫细胞中均有效表达了60kD的蛋白。将表达产物饲喂5龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫后取其围食膜,扫描电镜结果显示,围食膜结构遭到破坏形成大量孔洞。生物测定结果表明,以上两种表达产物对苏云金芽孢杆菌(Bt)和核型多角体病毒(NPV)均具有增效作用。以AcMNPVChiA在大肠杆菌和细胞系Sf-9中的表达产物分别与BtCry2Ac蛋白混合饲喂棉铃虫初孵幼虫,增效率分别为33.4%和54.5%,其LT50较对照处理分别缩短了17.8和20.6h;当AcMNPVChiA在大肠杆菌和细胞系Sf-9中的表达产物分别与甘蓝夜蛾(Mamestra brassica)核型多角体病毒(MbNPV)混合处理棉铃虫初孵幼虫时,其LT50与对照比较分别缩短了16.6和22.4h。     

核型多角体病毒杀虫剂的开发

本文概述了核型多角体病毒杀虫剂在害虫生物防治中的筛选、生产、产品检测及应用方面的试验程序及步骤。     

SpltNPV和SeNPV几丁质酶基因大肠杆菌表达产物对病毒的增效作用

为明确杆状病毒几丁质酶对病毒杀虫剂的增效作用,采用PCR扩增获得斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltNPV)不含N-端信号肽序列的几丁质酶基因片段SpltNPVChiA/S-和甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)几丁质酶基因编码区全序列SeNPVChiA,分别克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达,表达蛋白的分子量为62 kD和66 kD.将含有表达产物SphNPVChiA/S-和SeNPVChiA的大肠杆菌菌液分别与SphNPV或SeNPV一起加入人工饲料,饲喂3龄斜纹夜蛾或甜菜夜蛾幼虫,两种幼虫取食后致死时间均显著缩短,其中,SpltNPV Spit-NPVChiA/S-和SphNPV SeNPVChiA的LT50比SphNPV对照处理缩短0.90天和0.89天,LT90缩短1.90天和1.97天;SeNPV SphNPVChiA/S-和SeNPV SeNPVChiA的LT50比SeNPV对照处理缩短0.47天和0.50天,LT90缩短0.57天和0.59天;而pET-28a/BL21对病毒的侵染无明显增效作用.两种病毒几丁质酶基因的大肠杆菌表达产物对病毒早期侵染均有明显的增效作用,但同源几丁质酶和异源几丁质酶对病毒的增效作用没有显著差异.     

景中村的管理对策分析——以西湖风景区为例

从西湖风景名胜区景中村的现状入手,分析了其特点及典型问题,从人口调控、经营模式、村民素质、人才培养等方面提出了有效增进景中村管理和发展的对策.最后,将国内其他风景名胜区景中村的情况与西湖风景名胜区景中村进行了对比,指出了其他景区景中村可以借鉴和关注的管理思路.     

Ns NPV杂交瘤抗体的研究

本文研究了抗纯化N.Sertifer NPV的杂交瘤抗体。病毒的包涵体是通过K-系列离心而提纯,由Frank Lewis博士提供。每个BALB/C小白鼠每次用200μg抗原免疫。最后一次注射是在细胞融合之前4～7天。取2×10~8脾细胞与2×10~7骨髓瘤细胞(NS-1或P_3×63)在50％PEG 4000(Sigma)存在下进行融合,用HAT来选择杂交瘤细胞。用间接ELISA法来筛选阳性的杂交瘤细胞。 13个细胞系已筛选成功,并对其产生的免疫球蛋白进行了分型。选择三种Lepidopteran NPVs用于交叉保护试验。除三种杂交瘤抗体外,其他10种对这三种病毒均有不同程度的交叉反应。     

棉铃虫过氧化物还原酶基因Prx4的鉴定及功能分析

为探究过氧化物还原酶（peroxiredoxin,Prx）在棉铃虫Helicoverpa armigera幼虫体内的功能,利用转录组数据鉴定得到了棉铃虫Prx4基因,并对其进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）测定该基因在棉铃虫不同发育阶段和5龄幼虫不同组织中的相对表达,利用原核表达和RNA干扰方法探究该基因的功能。结果表明,Prx4基因开放阅读框长为744 bp,编码248个氨基酸,系统进化树和同源序列多重比对结果显示该基因属于典型的2-Cys过氧化物酶家族;Prx4基因广泛分布于棉铃虫幼虫各组织和发育阶段中;当感染核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus,NPV）后,棉铃虫Prx4基因相对表达量上调;重组蛋白的体外试验表明Prx4蛋白具有一定的抗氧化活性;与对照相比,小干扰RNA处理6、8和10 d后感病棉铃虫的死亡率分别较对照显著提高了4.46%、22.42%和38.68%。表明Prx4基因作为一种抗氧化酶保护棉铃虫免受氧化损伤,同时在抵御NPV感染过程中发挥着重要的免疫作用。     

不同树种林分造林经济效益评价研究

以柳杉(Cryptomeria fortunei)、杉木(Cunninghamia lanceolata)和福建柏(Fokienia hodginsii)3个不同人工林分为研究对象,首先对3个林分蓄积量和出材量进行了分析讨论,接着应用净现值、内部收益率、收益成本比、土地期望值和净效益投资比等动态经济指标对3个林分的造林经济效果进行评价。结果表明,在3个林分中,杉木林分平均单株材积、蓄积量和经济材出材量最高,杉木林的NPV、IRR、LEV、B/C、N/K最大。     

家蚕对核型多角体病的抗性及遗传规律的研究

试验研究了家蚕对ＮＰＶ病的抵抗性及其遗传规律，结果表明：家蚕品种间存在抗性差异，幼虫期的攻毒发病率与全龄虫蛹率成极显著的负相关，抗性对感性呈不完全显性，是由两对以上基因控制的，至少有一对为主效基因，再一次证明有偏父遗传现象，其狭义遗传力为３６．１％。