羊绒生长期、休止期陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因的表达

【目的】研究角蛋白相关蛋白9.2基因(KAP9.2)和Hoxc13基因在羊绒生长不同阶段皮肤组织中的表达量对产绒量的影响,为羊绒生长的调控机理研究奠定基础。【方法】以陕北白绒山羊为研究对象,以奶山羊作为对照,利用qRT-PCR方法,检测羊绒生长期和休止期高产、低产绒量陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因的表达量。【结果】 对于KAP9.2基因,在羊绒生长期高产绒量陕北白绒山羊的相对表达量极显著低于低产绒量陕北白绒山羊（P＜0.01）,而在羊绒休止期高产绒量陕北白绒山羊的相对表达量却显著高于低产绒量陕北白绒山羊和奶山羊（P＜0.05）;对于Hoxc13基因,在羊绒休止期高产和低产绒量陕北白绒山羊的相对表达量极显著高于奶山羊（P＜0.01）。高产和低产绒量陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因在生长期、休止期平均相对表达量的变化趋势相似,均表现为生长期极显著低于休止期（P＜0.01）。【结论】KAP9.2对绒毛生长有抑制作用;Hoxc13对KAP9.2基因的表达可能具有调控作用。     

A 57‐bp deletion in the ovine KAP6‐1 gene affects wool fibre diameter

High glycine–tyrosine keratin‐associated proteins (HGT‐KAPs) are predominantly present in the orthocortex of wool fibres. They vary in abundance in different wools and have been implicated in regulating wool fibre properties, but little is known about the functional roles of these proteins in the fibre matrix. In this study, we used polymerase chain reaction – single‐strand conformational polymorphism (PCR‐SSCP) analysis to screen for variation in a gene encoding the ovine HGT‐KAP6‐1 protein. We identified three gene variants (A, B and C). Variants A and B were similar to each other, with only three nucleotide differences occurring downstream of the coding sequence. However, variant C had a 57‐bp deletion that would notionally result in a loss of 19 amino acids in the protein. The presence of C was found to be associated with an increase in mean fibre diameter (MFD), fibre diameter standard deviation (FDSD), coefficient of variation of fibre diameter (CVFD) and prickle factor (percentage of fibres over 30 microns; PF). Sheep of genotype BC produced wool of greater MFD, FDSD and PF than sheep of genotypes AA, AB and BB. The CVFD was greater in the BC sheep than the AB sheep. The results suggest that variation in ovine KRTAP6‐1 affects wool fibre diameter‐associated traits and that the 57‐bp deletion in this gene would lead to coarser wool with greater FDSD, CVFD and PF.     

新疆南疆和田羊、卡拉库尔羊毛囊KAP7基因的原核表达及多克隆抗体制备

本研究旨在制备新疆南疆平原型和田羊、山区型和田羊与卡拉库尔羊3个地方品种（系）绵羊毛囊角蛋白关联蛋白7（keratin associated protein 7,KAP7）基因多克隆抗体,为探索毛囊KAP7基因对半粗毛羊羊毛产量与质量的影响奠定基础。以3个品种绵羊的皮肤毛囊为试验材料,提取总RNA,反转录得到cDNA,PCR扩增获得绵羊毛囊KAP7基因,构建pMD19-T-KAP7克隆质粒,对重组质粒进行PCR、酶切鉴定和序列分析,再构建pET-28a（+）-KAP7原核表达重组质粒,并在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表达,SDS-PAGE电泳检测原核表达的绵羊毛囊KAP7蛋白,经提取、纯化、回收得到目的蛋白,用其免疫家兔得到绵羊毛囊KAP7多克隆抗体血清,并用间接ELISA法检测其抗体效价。结果表明,与美利奴羊比对,平原型与山区型和田羊KAP7基因序列的同源性达99%,但平原型和田羊KAP7基因第22位碱基由G变为C,造成其KAP7蛋白第8位氨基酸由Gly变为Arg;山区型和田羊第70位碱基由A变为C,造成其24位氨基酸由Thr变为Ala;卡拉库尔羊毛囊KAP7基因与美利奴羊同源性达100%,其KAP7蛋白氨基酸序列与美利奴羊没有差异。绵羊毛囊KAP7基因原核表达重组质粒pET-28a（+）-KAP7可以在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表达目的蛋白,其大小约为10 ku。利用绵羊毛囊KAP7蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体阳性血清具有免疫活性和特异性,其抗体效价达到1：10 000。     

牦牛KAP1家族基因长度多态研究

试验旨在研究牦牛角蛋白关联蛋白1（keratin associated protein 1,KAP1）家族基因长度多态与重复序列特点。研究对牦牛和黄牛KAP1家族基因进行测序,并与绵羊已知序列进行比较分析。结果发现,牛KAP1家族位于19号染色体,根据绵羊KAP1家族基因在染色体上的位置与相似性,重新命名了牛KAP1家族基因B2D、B2A、KAP1-1和B2C为KAP1-4、KAP1-1、KAP1-2、KAP1-3（按照染色体上的基因顺序）。KAP1家族基因之间在3'和5'端区域高度保守,中间有重复序列长度差异,其中牦牛KAP1-KAP4基因发现有30 bp的长度多态。研究其蛋白序列发现5个氨基酸为基序的重复序列B（CCQTS）A₁（CCQPT）,以及一个新的重复序列C（SIQTS）。本研究结果说明重复序列是KAP1家族基因间和基因内的主要差异区域,这可能与其角蛋白结合螺旋数相关。     

Free‐Roaming Dogs in Nepal: Demographics,Health and Public Knowledge,Attitudes and Practices

In Nepal, most dogs are free to roam and may transmit diseases to humans and animals. These dogs often suffer from malnutrition and lack basic health care. Minimal information is available about their demographics and about public attitudes concerning dogs and diseases. We carried out a study in Chitwan District (central Nepal), to collect baseline data on free‐roaming owned dog demographics, assess knowledge, attitudes and practices of dog owners concerning dogs and rabies, evaluate rabies vaccination coverage and anthelmintic treatment of dogs, measure dogs' response to rabies vaccination and assess dog health through body condition scores and parasites. We conducted household interviews with owners of free‐roaming female dogs (n = 60) and administered dogs with rabies vaccination and anthelmintics. Dog owners regularly fed free‐roaming dogs but provided minimal health care; 42% of respondents did not claim ownership of the dog for which they provided care. We collected skin, faecal and blood samples for parasite identification and for measuring rabies virus‐specific antibodies. Ninety‐two per cent of dog owners were aware of the routes of rabies virus transmission, but only 35% described the correct post‐exposure prophylaxis (PEP) following a dog bite. Twenty‐seven per cent of the dogs had measurable rabies virus‐specific antibody titres and 14% had received anthelmintics in the previous year. Following rabies vaccination, 97% of dogs maintained an adequate antibody titre for ≥6 months. Most dogs appeared healthy, although haemoprotozoans, endoparasites and ectoparasites were identified in 12%, 73% and 40% of the dogs, respectively. Poor skin condition and parasite load were associated. Seventy‐four per cent of the females had litters in 1 year (mean litter size = 4.5). Births occurred between September and February; we estimated 60% mortality in puppies. We concluded that vaccination coverage, PEP awareness and anthelmintic treatment should be emphasized in educational programmes focussed on animal welfare, veterinary and public health.     

饲粮半胱氨酸水平对獭兔生产性能、氮代谢、毛皮品质及KAP6.1基因时序表达的影响

本研究旨在研究饲粮半胱氨酸水平对獭兔生产性能、氮代谢及毛皮品质和KAP6.1基因时序表达的影响.选取120只90日龄健康獭兔随机分为4组(每组30个重复,每个重复1只兔),对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础饲粮中添加0.25％、0.35％、0.45％水平的半胱氨酸的试验饲粮,预饲期7d,正式期40 d.结果,饲粮半胱氨酸水平0.25％、0.45％组末重显著高于0％、0.35％组(P＜0.05).饲粮半胱氨酸水平0.35％、45％组采食量(P＜0.05)显著高于0％、0.25％组,对平均日增重、料重比无显著影响(P＞0.05);半胱氨酸0.35％组食入氮、可消化氮极显著高于其他组(P＜0.01),0.45％组的沉积氮显著高于对照组(P＜0.05),对粪氮、尿氮、表观消化率、氮利用率、氮生物效价均无显著影响(P＞0.05);饲粮半胱氨酸水平0.45％组处理40 d皮张面积显著大于其余各组(P＜0.05).饲粮半胱氨酸水平0.45％、0.35％组处理30 d被毛密度显著高于0％、0.25％水平组(P＜0.05),对皮张厚度无显著性影响(P＞0.05);饲粮半胱氨酸水平0.45％处理20 d,KAP6.1基因在软骨、皮肤中表达量均显著高于其他组(P＜0.05),而对处理10、30、40 dKAP6.1基因在软骨、皮肤中表达量无显著影响(P＞0.05).综上所述,獭兔饲粮中半胱氨酸适宜添加量为0.45％,且110～120日龄使用效果最佳.     

天津市布鲁氏菌病高发区高危人群“知信行”调查

为了解天津市布鲁氏菌病高发区高危人群的布鲁氏菌病防控知识、态度和行为水平及其相关影响因素,以便为下一步宣传干预工作提供参考,基于问卷调查和电话回访的横断面调查研究,对天津市4个布鲁氏菌病高发区牛羊养殖户、基层兽医人员进行抽样调查,然后调查数据录入Excel,使用SPSS软件进行统计分析,查找影响布鲁氏菌病"知信行"水平的因素。结果显示:高危人群的布鲁氏菌病平均知晓率为44.93%,大部分高危人群对布鲁氏菌病防控态度积极,部分基层兽医人员和养殖户对布鲁氏菌病防控存在不良行为和不良防护习惯;单因素Logistic回归分析可见,布鲁氏菌病高危人群的"知信行"水平与职业、性别、学历、工作年限有关(P <0.05);多因素Logistic回归分析显示,牛羊养殖户、工作年限小于10年的高危人群"知信行"水平较低(P<0.05),模型拟合度较好(P> 0.05),ROC曲线下面积(AUC)为0.732(95%CI:0.673～0.791)。结果表明,牛羊养殖户、工作年限小于10年的高危人群,其布鲁氏菌病"知信行"水平有待提高,需要在未来宣传干预中,提高培训的针对性、实用性、专业性,拓展渠道,注重效果。     

五个绵羊群体KAP11-1基因核苷酸序列变异分析

为了分析绵羊KAP11-1基因的核苷酸序列变异,采用PCR-SSCP方法和DNA测序技术检测了欧拉羊、甘肃高山细毛羊、滩羊、湖羊和青海细毛羊5个群体(749只个体)KAP11-1基因的单核苷酸多态性,同时分析了等位基因频率、遗传杂合度、有效等位基因数和多态信息含量等群体遗传特征。结果表明,5个绵羊群体的KAP11-1基因中共检测到c.93C/T、c.240G/A、c.285C/G/A和c.331A/G 4个单核苷酸多态位点,且c.331A/G为非同义突变。等位基因A在5个群体中出现的频率最高(87.70%),为优势等位基因,其次为等位基因B(基因频率为11.03%),等位基因C和D的频率最低(分别为0.53%和0.74%)。群体遗传学分析结果表明,滩羊KAP11-1基因的遗传杂合度、有效等位基因数和多态信息含量均高于其余4个群体。KAP11-1基因作为羊毛经济性状的主要候选基因之一,其核苷酸序列的变异导致KAP11-1中相应氨基酸的改变,最终可能会影响羊毛纤维的结构和羊毛主要经济性状。     

西安市居民食品安全KAP状况调查

调查西安市居民对食品安全知识的认知、态度与行为的现状,并讨论其影响因素。采取问卷调查的方式,在西安市随机抽取了600份西安市及周边乡镇居民进行问卷调查。529份调查结果显示,西安市居民对食品安全知识的掌握程度一般,其周边城镇乡村居民对食品安全知识的掌握程度较差,但是广大居民对于了解食品安全知识的态度是积极的;学历、年龄都是影响因素,学历越高,食品安全知识掌握程度越好。49.15%的城乡居民对日常生活中的食品表示担忧,农民、低学历、高年龄群体应该是食品安全普及活动的重点对象。     

慢病毒介导小鼠K26/KAP26.1基因过表达对相关基因的调控作用

【目的】利用慢病毒介导过表达技术,明确小鼠K26和KAP26.1基因过表达后对角蛋白关联蛋白基因KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1和对骨形态发生蛋白基因BMP-4、BMPR-IB的影响,探究小鼠绒毛细度变化的影响机制,达到人为调控(如慢病毒载体技术)使相关基因过表达,改善动物绒毛品质的目的,为哺乳动物绒毛细度调控的研究奠定理论基础,【方法】试验在辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室完成,小白鼠采自大连医科大学实验动物中心,选取出生后5周龄昆明种雄鼠。在Genebank查找到小鼠基因K26(Gene ID:NM_001033397)及KAP26.1(Gene ID:NM_027105.2)序列,根据目的基因序列设计引物,将质粒转入生长状态良好的293T细胞,构建小鼠K26和KAP26.1基因慢病毒过表达载体,将含有目的基因K26及KAP26.1的慢病毒表达载体分别转染小鼠皮肤成纤维细胞,用荧光显微镜观察其转染情况,确定慢病毒表达载体转染成功后,从病毒感染后的细胞中抽提总RNA,将RNA反转录成c DNA后放入Eppendorf Realplex荧光定量PCR仪,检测K26和KAP26.1基因过表达对KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1、BMP-4和BMPR-IB基因表达的影响。【结果】经RT-PCR检测,证明小鼠慢病毒载体p Lenti6.3-K26-IRES-EGFP和p Lenti6.3-K26.1-IRES-EGFP构建成功。经荧光场对比,发现目的慢病毒载体转染293T细胞72h时转染率最高。经PCR检测,证实包装好的目的慢病毒K26及KAP26.1转染小鼠成纤维细胞72 h后转染成功。经RT-PCR检测与SPSS Statistics 19软件分析目的基因表达量与阳性对照组(空载体质粒组,BLACK)、阴性对照组(小鼠表皮成纤维细胞,NC)表达量之间的显著性差异,发现K26基因过表达会导致KAP26.1基因上调,反之亦然,说明K26和KAP26.1基因之间存在一定的协同作用;K26和KAP26.1基因过表达后,均能导致KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1基因下调;K26基因过表达能使BMP-4基因表现为上调,而BMPR-IB基因表现为下调;KAP26.1基因过表达时,BMP-4和BMPR-IB基因均表现为上调。【结论】K26与KAP26.1基因在毛囊的内根鞘中起到协同作用,K26和KAP26.1基因的高表达会抑制KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1基因的表达,影响m TOR下游蛋白合成信号,进而起到调节绒毛粗细的作用;K26和KAP26.1基因过表达均能使BMP-4基因表现为上调,BMP-4是BMP信号通路的激活剂,能够激活BMP信号通路向下游转导,进而影响到毛囊的发育周期;K26基因过表达下调BMPR-IB基因的表达,而KAP26.1基因过表达上调BMPR-IB基因的表达,BMPR-IB基因是BMP信号的Ⅰ型受体,当BMPR-IB受体减少时,会抑制BMP信号向下游转导,从而使绒毛生长周期重新开始;当BMPR-IB受体增加时,会促进下游信号分子转录,进而影响毛囊发育周期。说明K26和KAP26.1基因过表达均能激活BMP信号通路,并由BMP和m TOR信号调节KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1、BMP-4和BMPR-IB基因的表达,但K26与KAP26.1基因对BMPR-IB基因的相反调节作用有待深入研究。