全文获取类型
收费全文 | 2146篇 |
免费 | 99篇 |
国内免费 | 99篇 |
专业分类
林业 | 258篇 |
农学 | 97篇 |
基础科学 | 31篇 |
245篇 | |
综合类 | 974篇 |
农作物 | 184篇 |
水产渔业 | 29篇 |
畜牧兽医 | 153篇 |
园艺 | 327篇 |
植物保护 | 46篇 |
出版年
2024年 | 19篇 |
2023年 | 83篇 |
2022年 | 99篇 |
2021年 | 54篇 |
2020年 | 54篇 |
2019年 | 59篇 |
2018年 | 53篇 |
2017年 | 81篇 |
2016年 | 106篇 |
2015年 | 61篇 |
2014年 | 124篇 |
2013年 | 140篇 |
2012年 | 138篇 |
2011年 | 163篇 |
2010年 | 157篇 |
2009年 | 153篇 |
2008年 | 134篇 |
2007年 | 138篇 |
2006年 | 100篇 |
2005年 | 89篇 |
2004年 | 48篇 |
2003年 | 39篇 |
2002年 | 33篇 |
2001年 | 34篇 |
2000年 | 24篇 |
1999年 | 20篇 |
1998年 | 16篇 |
1997年 | 18篇 |
1996年 | 21篇 |
1995年 | 11篇 |
1994年 | 15篇 |
1993年 | 17篇 |
1992年 | 7篇 |
1991年 | 7篇 |
1990年 | 12篇 |
1989年 | 5篇 |
1988年 | 5篇 |
1987年 | 4篇 |
1984年 | 1篇 |
1981年 | 1篇 |
1978年 | 1篇 |
排序方式: 共有2344条查询结果,搜索用时 15 毫秒
101.
【目的】利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法。【方法】针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin引物,将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99 以上, 检测极限约为1.0E+01拷贝数质粒DNA;特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线;批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%;用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%。【结论】本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法。 相似文献
102.
【目的】建立一种快速、准确检测金黄色葡萄球菌tst 基因的方法,为预防和控制金黄色葡萄球菌感染提供检测手段。【方法】采用一段特异识别金黄色葡萄球菌的DNA探针来识别基因组DNA,通过识别荧光染料SYBR Green I的信号来实现检测。通过对此方法的可行性、单壁碳纳米管最适浓度、目标链最适浓度、特异性等进行验证,建立产TSST-1金黄色葡萄球菌tst 基因的检测体系。【结果】在仅加入终浓度为1.07 nmol/L目标DNA的条件下,荧光值的恢复率达91%,荧光值的增强值为4.764。最适碳纳米管浓度为30 μg/mL,最适目标DNA浓度与探针DNA浓度相等,为1.07 nmol/L。特异性检测结果表明,该检测方法可以区分具有高相似性的序列(2-或12-nt的区别)。【结论】SYBR Green I结合碳纳米管适用于环境、食品及临床检验中对携带tst 基因的金黄色葡萄球菌的快速检测。 相似文献
103.
本研究以胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factors-Ⅰ, IGF-Ⅰ)基因作为候选基因,运用PCR-RFLP法检测基因变异,并分析其变异与鸡末期产蛋性能的相关性。以绿壳蛋鸡(n=113)作为试验材料,对IGF-Ⅰ基因5'调控区进行遗传多样性研究。研究结果表明,该调控区扩增产物经PstⅠ酶切后出现AA、AB、BB共3种基因型,经χ2检验绿壳蛋鸡在IGF-Ⅰ位点上符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。相关分析表明,IGF-Ⅰ基因5'调控区PstⅠ位点对于产蛋末期(14和15月龄)的产蛋性能没有显著影响(P>0.05)。 相似文献
104.
基于环保理念的“绿色图书馆”建设 总被引:1,自引:0,他引:1
齐珊 《农业图书情报学刊》2010,22(7):41-43
国家"十一五"规划中,将建设节约环保型社会作为重点内容,实行限制与鼓励性政策并举的方式,制定建筑节能环保措施,提高建筑物能源利用效率和环保功能。图书馆作为公共文化建筑物,是现代文化的标志性建筑物,理应践行绿色环保理念,引导时代潮流。本文提出了"绿色图书馆"的构建理念,并从建筑理念、建筑模式以及建筑原则等多方面进行论述,以探究"绿色图书馆"在未来社会中的价值。 相似文献
105.
绿叶蔬菜工厂化生产关键技术研究 总被引:3,自引:0,他引:3
围绕绿叶蔬菜的清洁高效生产和均衡供应需求,借鉴日本、荷兰等国家植物工厂发展的先进经验,针对绿叶蔬菜工厂化生产的关键环节和技术突破点,以小白菜的工厂化生产为例,综述了品种选择、基质研发、肥水运筹、节能生产、绿色防控、物流加工、质量管理等关键设备与技术研究进展,探索符合中国国情的有机生态型绿叶蔬菜工厂化生产的可行性。 相似文献
106.
表达新城疫病毒融合蛋白基因禽痘病毒重组体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光信号的重组病毒rFPVFGFP。通过二次转染,利用Cre-loxP位点特异性重组将重组病毒基因组的GFP自动去除,结果获得了只含新城疫病毒F基因表达盒的重组禽痘病毒rFPVF。试验结果表明,rFPVF复制稳定,表达的F蛋白具有免疫原性,能够刺激鸡只产生抗新城疫病毒的中和抗体。 相似文献
107.
近年来,real-tim e PCR技术作为一种敏感、快速、简便、重复性好的检测技术已广泛出现在生物学研究领域。real-tim e polym erase chain reaction(RT-PCR)是Kary M ullis在二十世纪八十年代在PCR的基础上发展革新的一项新技术,它能使小量DN A片段扩增一百万倍。这项技术推动了分子生物学技术的发展,简便的操作不仅可应用于普通实验,还可用于人类基因组工程。根据2003年调查的406位科学工作者,48%的研究人员近年来正在使用这项技术。随着使用这项技术的人数增多,各类相关的论文也相继增多。real-tim e PCR将会影响PCR技术的发展,并… 相似文献
108.
目的:应用SYBR G reen I染料法建立检测Mad2 mRNA表达的实时荧光定量PCR的方法,并探讨小鼠卵母细胞减数分裂成熟中Mad2 mRNA的表达。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,以SYBR G reen I为荧光染料,梯度稀释的重组质粒为模板制作标准曲线,并以此方法分析了小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中Mad2 mRNA表达的动态变化。结果:建立了实时荧光定量检测方法分析小鼠卵母细胞中Mad2 mRNA的表达,该方法灵敏、特异,扩增效率接近100%。进行了标准曲线的制作,以及对目的基因Mad2转录水平的绝对定量。结论:实时荧光定量PCR是检测基因表达水平的理想选择,在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中Mad2 mRNA表达存在动态变化。 相似文献
109.
110.
以豆瓣菜葡匐茎的上,中、下三段的试材,进行不同茎段的扦插繁殖试验结果表明,中段成活率高,分枝快,适于做扦插材料。 相似文献