墨兰茎腐病病原及防治研究

[目的]研究墨兰假鳞茎腐烂病病原及防治方法,以明确其发病原因和采取有效的防治措施。[方法]2005～2007年从广东顺德、番禺采集墨兰假鳞茎腐烂病害标本,进行病原菌分离、致病性测定和鉴定。同时测定致病菌在14种温度下的生长发育情况和对8种杀菌剂的敏感性。[结果]从选用的18份墨兰假鳞茎腐烂病标本组织中均分离出尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.),在假鳞茎基部伤口接种该茵发病率100%。该菌生长发育的温度范围为6～34℃,适宜温度20～32℃。多菌灵、多-硫、恶霉灵、百菌清、甲基托布津等杀菌剂对该菌菌丝生长有较强的抑制作用。人工接种试验表明,用有效浓度为1000gμg/ml的多菌灵或甲基托布津溶液浸泡墨兰假鳞茎预防茎腐病效果很好。[结论]Fusarium oxysporum Schl.是导致墨兰茎腐病的病原,假鳞茎基部伤口是该菌入侵的重要途径,多菌灵、甲基托布津是预防墨兰分株移栽时病菌从伤口入侵的有效药剂。     

LED不同光质对墨兰×大花蕙兰 F1代组培苗生长及生理指标的影响

以墨兰‘绿墨素’×大花蕙兰‘世界和平’F1代组培苗为试材,采用LED光源不同光质配比组合,以普通荧光光源为对照,研究LED光源对组培苗生长及生理指标的影响。结果表明：(1)单色红光(R)处理下株高、叶长、干重达到最高值,与对照组CK相比差异显著,红蓝复合光(2RB)有利于促进生根;(2)2RB处理下总叶绿素、叶绿素a、类胡萝卜素含量均最高,且与其他光源处理下差异显著,红蓝白复合光(RBW)照射下,叶绿素b的含量高于其他处理,单色蓝光(B)处理下,叶绿素a/b比值最高;(3)红蓝复合光(2RB)有利于组培苗可溶性糖合成;LED白光光源(W)处理下游离氨基酸含量最高,差异显著(p＜0.05)。说明LED不同光质对组培苗生长影响明显,综合比较各项指标,LED红蓝复合光(2RB)可作为墨兰‘绿墨素’×大花蕙兰‘世界和平’ F1代组培苗生长的理想光源。     

建兰炭疽病拮抗放线菌的筛选及防治效果

为筛选获得对建兰炭疽病菌胶孢炭疽菌具有良好抑菌效果的放线菌,以野生山地兰花表层土壤为分离样本,从土壤样品中分离获得25株放线菌,初筛出6株对建兰炭疽病菌胶孢炭疽菌具有明显抑制作用的菌株,其中菌株SVFJ-07的抑菌效果最好,抑菌率达83.64%。经形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,确认菌株SVFJ-07为酒红链霉菌。该菌对多种真菌具有良好的抑菌效果。对建兰炭疽病的室内防效为70.06%,田间防效66.27%～68.54%。可见,酒红链霉菌SVFJ-07对建兰炭疽病菌胶孢炭疽菌具有较好的拮抗作用,生防应用前景良好。     

春兰种子非共生萌发的研究

对春兰种子进行了非共生萌发。培养基中使用葡萄糖时葫发率高于蔗糖；种皮经过手术刀片切割的种子5个月后萌发率达到22．4％；使用0．5％NaOCl溶液对种子进行不同时间的处理，在4～6min时得到了最高的葫发率。种子预处理是提高春兰萌发率的关键，种皮是抑制萌发的主要原因之一。     

墨兰与大花蕙兰种间杂种原球茎的诱导及增殖研究

 利用墨兰与大花蕙兰进行种间杂交, 成功获得了5 个组合的杂种原球茎和植株。墨兰×大花蕙兰及大花蕙兰×墨兰, 均以原球茎方式萌发。以墨兰×大花蕙兰的杂种原球茎为材料, 通过L₉ (3⁴ ) 正交设计研究了NH₄NO₃ 、KH₂ PO₄ 、6-BA 和NAA 等因素对杂种原球茎增殖的影响, 发现NAA 对原球茎的增殖影响不大, NH₄NO₃ 1650 mg·L^-1 (MS 正常浓度水平) , 提高KH₂PO₄ 浓度(170～850 mg·L^-1 ) 和6-BA 浓度(1～10 mg·L ^-1) 有利于原球茎的增殖。9 个培养基中以MS + NH₄NO₃ 1650 mg·L ^-1 + KH₂PO₄340 mg·L ^-1 + 6BA 10 mg·L ^-1效果最好。     

墨兰、春兰变种和品种间同工酶分析

 通过酯酶( EST) 、苹果酸酶(ME) 、磷酸葡萄糖异构酶;PGI ( NADP) 、磷酸葡萄糖变位酶PGM( NAD) 、超氧化物歧化酶( SOD) 5 种酶系统研究墨兰和春兰17 个变种及品种的同工酶多样性, 并探讨这些材料间的亲缘关系。5 种酶系统所得的11 个位点中7 个是多态性位点。EST、PGM( NAD) 和SOD具有多态性。上述5 种酶系统能够把供试品种和变种区分开, 并划分为墨兰和春兰类。     

几种花叶线艺兰叶片色斑色素组成和叶绿体超微结构研究

以墨兰Cym bidium sinense3个花叶线艺兰品种金嘴、阳明锦和大石门为材料,分析了叶片色斑区叶绿素和类胡萝卜素的质量分数,对其解剖结构和叶绿体超微结构进行了观察,并同叶片正常绿色区进行了比较.结果表明:线艺兰叶斑的形成与叶绿素和类胡萝卜素的质量分数有直接的关系,叶片绿色区金嘴、阳明锦和大石门叶绿素质量分数分别为1.680、1.279和1.584 mg.g-1,类胡萝卜素质量分数分别为0.185、0.159和0.195 mg.g-1,绿色区金嘴、阳明锦和大石门类胡萝卜素与叶绿素质量分数的比值分别为0.110、0.124和0.123;而在叶片黄色区,金嘴、阳明锦和大石门叶绿素质量分数分别为0.693、0.465和0.540 mg.g-1,类胡萝卜素的质量分数分别为0.145、0.136和0.164 mg.g-1,类胡萝卜素与叶绿素质量分数的比值分别为0.209、0.292和0.304.即黄色区类胡萝卜素相对质量分数较高.绿色区和黄色区的叶绿素a与b比值变化不大,但在3个品种中都以绿色区稍高.在叶片绿色部分的细胞中,可以明显看到较多的叶绿体,叶绿体中基粒较发达,类囊体膜垛叠较紧密,有较多较大的淀粉粒;而在叶片黄斑部分的细胞中,基本上看不到完整叶绿体,淀粉粒逐渐消失,基质中存在很多嗜锇滴.     

春兰基因组DNA提取方法的研究

本文以春兰(Cymbidiumgoeringii(Rchb.f.)Rchb.f.)为研究试材,对植物基因组DNA提取方法中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析,试图找出春兰基因组DNA提取的最佳方法。结果表明:采用进口的CTAB提取效果比国产的CTAB要好,特别适用于花药的提取,蛋白质去除效果很好;SDS提取缓冲液配制方法很重要,不同的SDS缓冲液配制方法,其提取效果差异较大。春兰花苞的DNA提取得率较叶片高,但是叶片DNA的纯度则相反,叶片较花苞高。在提取花苞基因组DNA过程中,增加氯仿/异戊醇抽提次数,对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用,但是对DNA的损失也是很明显的。从实验效果来看,氯仿/异戊醇抽提次数以2次为宜。提取基因组DNA在异丙醇沉淀时,采取挑取絮状沉淀的方法,也可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响,从而提高DNA纯度。无论是叶片还是花苞材料,采用异丙醇沉淀5min,一般析出的以核酸基因组DNA为主,蛋白质为次,核酸析出量在80%以上。继续沉淀(15min)的产物中DNA含量明显较低,而且沉淀的纯度相对不高,因此异丙醇沉淀时间可以缩短到10min之内以提高DNA的纯度。使用CTAB法提取DNA时,水浴时间至少需要30min,过短的水浴时间会造成DNA得率的下降,同时过长的水浴时间,如超过1h,则可能会引起DNA的降解,或者最后产物中增加其他杂质,因此,适宜的水浴时间当为40￣60min。     

墨兰舌瓣总RNA提取方法比较研究

为获得墨兰舌瓣总RNA最佳提取方法,以墨兰"南菊"舌瓣为材料,利用CTAB法、华舜植物叶总RNA提取试剂盒、Trizol法、天根RNAsimple总RNA提取试剂盒、Bioteke通用植物总RNA提取试剂盒、Bioteke通用植物总RNA提取试剂盒DNaseI过柱消化法、宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue及宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取舌瓣总RNA。通过RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR等分析,确立适用于墨兰舌瓣RNA分离的方法。结果表明:宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取的RNA除了28S,18S,5SrRNA清晰条带外,RNA的得率和纯度优于其他供试方法。RT-PCR结果进一步证实宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取的总RNA可用于进一步的分子生物学试验。     

春兰根内生细菌分离培养方法的初步研究

探讨了春兰根表面灭菌的最佳条件,以及改良察氏琼脂、淀粉铵营养琼脂、YG、R2A、LB、金氏、TSA和根系分泌物8种培养基对春兰根内生细菌的分离效果。结果表明:春兰根的最佳表面灭菌条件为:75%乙醇浸泡3 min,3%次氯酸钠溶液处理2 min,75%乙醇浸泡30 s,最后用无菌水冲洗。不同培养基对内生细菌的分离存在一定差异,R2A培养基和根系分泌物培养基分离出的内生细菌数量较多,而YG培养基和R2A培养基分离出的内生细菌种类总数最多。此8种培养基对春兰根内生细菌的优势菌群的分离效果是相同的。研究结果可为选择合适的表面灭菌条件及培养基分离兰花内生细菌提供参考。