日本血吸虫GSK3蛋白编码cDNA的克隆、表达及其重组蛋白的免疫保护研究

本研究利用生物信息学分析了日本血吸虫(Schistosoma japonicum,sj)Glycogen synthase kinase 3(GSK3)蛋白,并对其中一个GSK3蛋白的编码cDNA进行了克隆和原核表达,制备了特异性的多克隆抗体.同时,还初步评估了重组蛋白的免疫保护效果.生物信息学分析表明在日本血吸虫数据库存在两种GSK3蛋白,且其中一个SjGSK3在日本血吸虫不同发育时期均有转录.Western blot结果表明本研究制备的抗体能特异性识别日本血吸虫SjGSK3重组蛋白,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性.动物实验表明免疫SjGSK3重组蛋白的动物与佐剂对照组比较分别获得了平均10.6％减虫率和40.5％肝脏减卵率.     

西洋百合“卢浮宫”的组培技术研究

以鳞片为外植体、MS为基本培养基,以不同激素成分及不同质量浓度水平下诱导西洋百合"卢浮宫"的小鳞茎状突起,进行组培试验。结果表明:"卢浮宫"百合的诱导以取其完整的鳞片为外植体、并以鳞片背部突起处紧贴于MS 6 BA2 0mg·L-1 NAA0 2mg·L-1的培养基上诱导效果为最好。"卢浮宫"百合的诱导是由外植体(鳞片)产生小鳞茎状突起而分化成苗的,并不经愈伤组织分化产生。筛选出的最佳继代增殖培养基为MS 6 BA0 7mg·L-1 IBA0 3mg·L-1,生根培养基为1 2MS 6 BA0 3mg·L-1 IBA0 7mg·L-1。移植基质选择河泥和珍珠岩(体积比7∶3)混合,成活率达98%。     

珍稀濒危植物连香树种子萌发的研究

进行了濒危植物连香树种子萌发特性的研究,探讨不同光照条件(12 h,1 500 lux和黑暗)、不同温度(15℃、20℃、25℃和30℃)、不同浓度的赤霉素(0.5 mg.L-1、1 mg.L-1、2 mg.L-1、4 mg.L-1)浸泡连香树种子不同时间(2 h、4 h6、h、8 h)、50℃温水预处理15 min以及不同储藏条件对连香树种子萌发的影响。结果表明:25℃是连香树种子发芽的最适温度;在光照条件下连香树种子的发芽势高,光照可以促进连香树种子发芽迅速、整齐;经过赤霉素处理的干藏种子的发芽率和发芽势比没经过其处理的干藏种子的发芽率和发芽势高,且在一定浓度范围内随着赤霉素浓度的增大和处理时间的延长,发芽率和发芽势逐渐提高;湿藏有助于连香树种子萌发;50℃温水预处理15 min对种子的萌发有促进作用。     

珍稀濒危树种连香树造林试验

本文通过对连香树造林成活率、中幼龄林生长情况调查,结果表明,连香树在前期生长较快,病虫害少,树体大小中等,适宜作为城市行道树和园林、庭院绿化树种,影响栽植成活率和生长量的主导因子是水分,苗期和幼树易发生日灼危害,平原地区栽植应以4～5年生的大苗为主,栽植幼苗应适当遮荫。     

施肥对普陀樟苗木生长及养分吸收利用的影响

为了解不同施肥水平对普陀樟Cinnamomum japonicum var.chenii苗木生长及养分吸收利用情况的影响,设置了3个水平的田间试验,即不施肥(ck),常规施肥(T50,50 g·m-2)和增量施肥(T100,100 g·m-2),于2012年6月至9月观测苗高和地径,定期采集分析土壤和植物样品。结果表明:普陀樟苗木的苗高、地径、根部和茎部生物量均随施肥量的增加而增加(P<0.05);而叶生物量和总生物量在6月时随施肥量增加而升高(P<0.05),到9月时则呈先升后降的趋势(P<0.05)。苗木体内养分质量分数和单株养分含量随施肥量的增加而增加(P<0.05),不同处理均以叶片养分质量分数最高;养分吸收及利用率随着施肥的增加而降低(P<0.05),T50和T100处理各元素的吸收利用效率均为氮>磷>钾。到试验结束时,T50处理土壤养分质量分数与试验开始时持平,T100处理钾积累,ck引起钾亏缺。从移栽成活来看,T50苗木体内养分积累,有利于移栽成活,保持土壤养分平衡;而T100养分浪费。综合判断,普陀樟苗木最适需养量应为50 g·m-2到100 g·m-2,且较接近50 g·m-2。     

东亚砂藓甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆及表达分析

[目的]克隆东亚砂藓甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因RjGAPDH,并对其进行生物信息学和表达分析。[方法]通过分析东亚砂藓转录组测序数据,利用RT-PCR技术克隆该基因的全长序列,并通过荧光定量PCR分析RjGAPDH基因在不同干旱胁迫时间的表达情况。[结果]该基因全长为1 208 bp,开放阅读框1 053 bp,编码350个氨基酸,预测蛋白分子量为38.66 kD,等电点pI为6.02,不稳定系数为23.97,为稳定蛋白;该基因编码的蛋白无跨膜区和信号肽序列,定位于细胞质。在快速干旱胁迫处理过程中,东亚砂藓RjGAPDH基因的表达量高于正常生长的材料(CK),能被诱导表达。[结论]RjGAPDH基因可能参与东亚砂藓对干旱的胁迫反应,为后续进一步研究其功能特征奠定基础。     

普陀樟SRAP-PCR反应体系的建立

以舟山群岛的普陀樟（Cinnamomum japonicum var.chenii）新鲜叶片为实验材料,采用L16（45）正交试验设计,对影响普陀樟SRAP-PCR反应的Mg2+浓度、dNTPS、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素组合进行了筛选。结果表明：适于普陀樟的SRAP-PCR反应体系（20μL）为2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、1.5 U Taq DNA聚合酶、0.4μmol/L引物、10 ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,该体系位点清晰,扩增稳定;利用该反应体系从100对SRAP引物组合中筛选出多态性好的引物24对。     

Effect of Inoculant Rate on Nodulation and Various Agronomic Traits of Soybean

In a soil lacking indigenous Bradyrhizobium japonicum , soybean ( Glycine max [L.] Merr.) nodulation depends upon the number of rhizobia applied with the inoculum. This field study reports the effect of different rates of applied rhizobia on nodulation, dry matter and nitrogen content in soybean in a Mediterranean soil lacking B. japonicum.
Treatments included six rates of B. japonicum , ranging from 2.5 × 10⁴ to 6.075 × 10⁶ rhizobia cells per seed applied to the seed as peat inoculant at planting, 100 kg N ha⁻¹ and an uninoculated control. The experiment was conducted in an Entisol soil. Regression analysis showed linear relationship between the rate of applied rhizobia and the number of the nodules per plant or the dry weight per nodule. In early stages of development (32 and 68 days after planting) plant dry weight was not affected by inoculation rate. At harvest a rate of 7.5 × 10⁴ rhizobia cells per seed was necessary for maximum total and stover dry weight. A higher rate, 6.75 × 10⁵ rhizobia cells per seed, was required to obtain maximum grain yield, total N content in plant tops and grain N content. Grain percentage N was increased up to 2.025 × 10⁶ rhizobia cells per seed. Nitrogen application increased grain yield, total N content and grain N content at the same level as the lower inoculation rate.     

以luxAB为报告基因的大豆根瘤菌的竞争结瘤研究

将来自pHN101的luxAB基因和来自pTR102的parCBA /DE基因,经过一系列中间载体整合到PLAFR3上构建成广宿主、稳定性质粒PHN158。通过三亲本杂交将pHN158导入费氏中华根瘤菌得到4株能在癸醛的激发下发出荧光的转移接合子WZRL、HWRL、HZRL和WWRL。将它们与3株大豆慢生根瘤菌WHB1、WHB2和WWB组配成12对组合,并以黑龙33和Williams为宿主以luxAB为报告基因进行竞争结瘤试验。结果表明,费氏中华根瘤菌与大豆慢生根瘤菌之间的平均竞争结瘤能力相当;同类型根瘤菌不同菌株之间的竞争结瘤能力存在着显著的差异;同时根瘤菌的竞争结瘤能力也明显受到宿主的影响。表明费氏中华根瘤菌与大豆慢生根瘤菌之间的竞争结瘤是一个菌株之间、菌植之间复杂的相互作用的过程。     

日本血吸虫体γ－氨基丁酸的检测

用高压液相色谱技术（ＨＰＬＣ）和同位素示踪技术确认日本血吸虫体内含有谷氨酸（Ｇｌｕ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）和琥珀酸（ＳＡ）。ＧＡＢＡ的含量为１２．７０±３．２７μｇ／ｇ（以虫湿重计）。虫体具有摄取外源性ＧＡＢＡ的能力。虫体不能将３Ｈ－ＧＩＡ转化为３Ｈ－ＧＡＢＡ，也不能将３Ｈ－ＧＡＢＡ转化为３Ｈ－ＳＡ。初步表明：虫体内ＧＡＢＡ的合成和降解与哺乳动物体内由Ｇｌｕ→ＧＡＢＡ→ＳＡ的代谢过程不同。