松材线虫自然侵染后对不同松树组织结构的影响

 利用滑走切片技术从显微水平研究松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）在自然状态下入侵,对马尾松（Pinus massoniana）和黑松（Pinus thunbergii）显微结构的影响。结果表明,马尾松和黑松的组织结构在感病初期即表现出病变特征,并随感病时间推移病变加剧。马尾松在感病初期皮层薄壁细胞开始木质化,伴有细胞破裂并融合成空腔;至感病中期周皮的栓内层细胞、皮层薄壁细胞以及韧皮部薄壁细胞均发生木质化,细胞内含物增多,甚至形成层细胞也发生一定程度的木质化现象,树脂道因周围细胞破裂而变形;至感病晚期,木材以外所有部分完全被木质化、大量细胞破裂。黑松发病症状与马尾松大致相同但发病时间稍晚,发病程度也较轻,这可能是因为两者对松材线虫病的抗性强弱有差异。同一时期的组织病理学特征在空间上也存有差异,这与松材线虫入侵的位置及其在树体内的分布有关。     

杀灭松材线虫的高效药物筛选与毒性测定

为筛选出对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus具有高效快速杀灭作用的药物,采用线虫悬浮液 + 农药的直接触杀法,选择了22种药物处理松材线虫1 h,测定了对松材线虫的半致死浓度（LC₅₀）。结果表明：不同药物对松材线虫表现出不同的杀灭作用,供试的22种药物中,甲基阿维菌素（甲维盐）杀灭效果最好,1 h 半致死浓度仅为0.3 mg·L^－1;杀螟丹效果最差,1 h 半致死浓度达21 053 mg·L^－1。另外,苦参碱、抑太保、溴氰菊酯和阿维菌素等4种药物对松材线虫具有很强的毒杀作用,其1 h半致死浓度分别为1.2,2.5,4.2和4.5 mg·L^－1。甲维盐和阿维菌素能高效快速杀灭松材线虫;这些对松材线虫高效敏感药物的筛选成功,为开发树干注射剂防治松材线虫病提供了基础。图1表3参25     

松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白基因全长cDNA克隆与分析

[目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56（登录号为FG589472）、BMCl20（登录号为FG589351）,采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白的全长cDNA克隆Bxl4-3-3a和Bml4-3-3a,并对克隆片段序列进行分析。[结果]Bx14-3-3a全长1039bp,包含一个756bp的开放阅读框,编码蛋白含有251个氨基酸残基,包含2个14-3-3蛋白标签,编码蛋白分子量为61．43kD,等电点为4．88。Bx14-3-3a基因组结构中包含4个外显子和3个内舍子序列。Bm14-3-3a全长992bp。有与Bx14-3-3a编码完全相同的氨基酸序列。序列比对结果表明,14-3-3在真核生物间高度保守,Bx14-3-3A和Bm14-3-3A蛋白在系统进化上与线形动物门（Nematomorpha）的物种近缘关系较近,与植物线虫南方根结线虫（Meloidogyneincognita）系统发育关系上最为亲近。[结论]Bx14-3-3a和Bm14-3-3a的成功克隆,为进一步研究其功能及其调控因子对形态、致病力、繁殖力和环境适应性等方面的分子调控机制奠定了重要基础。     

松材线虫两种实用分子检测技术

为检验已开发的SCAR标记与实时PCR两种分子检测方法鉴定松材线虫的可靠性,本文选用线虫未知种样品7个以及已知种样品3个为实验材料,采用上述两种分子检测方法进行检测,并且对7个线虫未知种样品进行形态鉴定。结果表明：1）运用SCAR标记检测,第2、3、4、7号4个未知种样品与8号松材线虫样品出现了一条清晰、明亮的860b...     

杀线虫真菌Sr18发酵液对松材线虫超微结构的影响

Sr18真菌是一株自主分离获得的具有广谱杀线虫活性的生防菌。为探明该菌的杀线虫作用机理,以松材线虫为靶标,借助场发射高分辨扫描电镜及透射电镜,对1/2浓度的Sr18发酵液小分子活性组分处理后的线虫及未处理的正常线虫进行了超微观察。高分辨率扫描电镜观察结果表明,小分子物质对松材线虫头部、体壁和尾部均有损伤,并观察到内容物外溢的现象。透射电镜观察结果显示,线虫表皮和体腔分离,细胞核受损严重,形状不规则,粗面内质网核糖体聚集,线粒体空泡样变,肌纤维受损。这些现象从形态结构角度证实了该发酵液小分子活性成分对线虫的损伤是整体性的毒杀作用,排除了表面触杀的机制。这为进一步揭示Sr18的杀线虫机理以及线虫生防制剂的开发提供了重要理论依据。      

恩施市松材线虫病扩散规律研究

利用恩施市历年的松材线虫病除治资料,对该疫区松材线虫病的扩散趋势和发生规律进行了初步分析。结果表明：恩施市松材线虫病的发生范围随着时间的推进,发生地块逐年增多,发生程度逐年加重,发生范围逐年向外围推移。发生面积由最初的2．54km^2扩展到900．00km^2之多,疫木数量呈逐年上升趋势。由于受到山脊阻拦,南北方向的扩散速度与范围远大于东西方向。公路沿线、河流沿岸远重于地势较高的山脊等地。在该病害除治时采用皆伐的方式极易导致环境条件较差的森林群落生境片段化。该研究为恩施市松材线虫病的除治和抑制马尾松群落片段化提供了重要的理论依据。     

Suppression of pine wilt disease by an antibacterial agent,oxolinic acid

BACKGROUND: Pine wilt disease (PWD) is very complex and has been reported to be caused by pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner & Buhrer) Nickle, and its accompanying bacteria. However, there is no report on the control of PWD by antibacterial agent. The present study was performed to investigate disease control efficacy of antibacterial agents against PWD. RESULTS: Among six antibacterial antibiotics tested, oxolinic acid (OA) showed the strongest antibacterial activity against five bacteria isolated from three strains of pine wood nematode. In in vivo assay, it effectively suppressed the development of PWD in three‐year‐old seedlings of Pinus densiflora Sieb. & Zucc.; it showed 71% control when injected at 3 mg per seedling. A mixture of OA and the nematicidal agent abamectin (Ab) showed higher disease control efficacy against PWD than either OA or Ab alone. In addition, OA alone and a mixture of OA and Ab also controlled PWD in approximately 20‐year‐old pine trees under field conditions. CONCLUSION: This is the first report on the suppression of PWD by OA. The result strongly indicates that PWD could be controlled by antibacterial antibiotic alone and a combination of antibacterial and nematicidal agents. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

松材线虫伴生细菌宏基因组fosmid文库构建及特征分析

 松材线虫是松材线虫病的病原,且与其伴生细菌之间存在互作。为研究松材线虫和伴生细菌的互作关系,本研究用Nycodenz介质离心和SDS裂解法富集松材线虫的伴生细菌,以酚/氯仿抽提法提取DNA,构建了松材线虫伴生细菌fosmid宏基因组文库。文库克隆的插入片段大小分布在30~45kb,平均长度为40kb。该文库包含19200个克隆,共计包含7680000kb DNA。文库稳定性检测表明插入的DNA片段能够在fosmid质粒中稳定遗传,没有发现插入片段丢失或重排。随机挑选96个克隆进行末端测序,BLAST分析表明:该文库中松材线虫序列占5.2%,细菌序列占64.6%,无同源序列14.6%。对伴生细菌多样性分析表明:Stenotrophomonas为优势种群,Sphingomonas、Cupriavidus和Pseudomonas为次优势种群。该文库的建立为揭示松材线虫与其伴生细菌的互作关系及伴生细菌的生态功能奠定了基础。     

云南省松墨天牛地理分布及危害程度调查

松墨天牛是松材线虫的主要传播媒介昆虫,为了预防松材线虫病,采用路线调查法、查迹调查法和样地调查法调查云南省松墨天牛的地理分布与危害程度。在云南省129个县市区中,尚未发现松墨天牛的县市区13个,占10．1％;有松墨天牛分布的县市区116个,占89．9％。其中轻度危害的县市区85个（65．9％）,中度危害的县市区16个（12．4％）,重度危害的县市区15个（11．6％）;松墨天牛的垂直分布范围为649～3255m,海拔高差2606m;危害的寄主树种有云南松、思茅松、高山松、马尾松和华山松。