猪肉和鸡肉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素酶联免疫吸附检测方法的建立

为保障动物源性食品安全,本研究建立了分别检测猪肉和鸡肉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素残留的间接竞争酶联免疫吸附法.结果显示,该方法在猪肉和鸡肉样本中DON的检测限分别为34.9和43.5 μg/kg,添加回收率为72.7%~97.1%,变异系数小于8.7%;T-2毒素的检测限分别为33.7和28.7 μg/kg,添加回收率为72.1%~95.0%,变异系数小于11.3%.该方法灵敏度高、准确、简便,适用于猪肉和鸡肉中DON和T-2毒素残留的快速检测.     

产气荚膜梭菌B型C58-1株β1毒素基因的克隆表达

利用PCR技术,从B型产气荚膜梭菌中国标准株C58-1株扩增出β1毒素基因,连接pMD18-T 载体筛选阳性克隆,然后用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ对其进行酶切,回收927 bp的β1毒素基因片段,将其定向克隆到载体pET-32a中,获得重组质粒pETβ927。将pETβ927转化至受体菌BL21(DE3)中,其表达产物经His-Trap FF预装柱纯化、SDS-PAGE 检测目的蛋白大小和分布及Western blotting检测其反应原性。结果表明,完整的β1毒素基因大小为1 011 bp,与GenBank发表的B型和C型产气荚膜梭菌β1毒素蛋白序列同源性达99.4%以上;SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白大小为 54 ku,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但以包涵体为主。Western blotting检测结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体发生免疫反应,表明β1毒素蛋白具有较好的反应原性。     

自然霉变玉米和玉米蛋白粉对仔猪生长性能、养分表观消化率及血清酶水平的影响

试验旨在研究自然霉变玉米和玉米蛋白粉(M)对仔猪生长性能、养分表观消化率及血清酶水平的影响.选用28日龄平均体重(9.59±0.79)kg的健康三元杂交(杜×长×大)仔猪15头,随机分为3组,每组5个重复,每个重复1头仔猪.对照组饲喂基础日粮,50% M组和100% M组分别用自然霉变玉米和玉米蛋白粉替代基础日粮中50%和100%优质的玉米及玉米蛋白粉.预试期7 d,正试期15 d.结果表明:①随着自然霉变玉米和玉米蛋白粉替代比例的增加,仔猪平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)呈线性或二次曲线降低(P <0.05),其中,50% M、100% M组仔猪ADG显著降低,100% M组ADFI显著降低(P <0.05).②随着自然霉变玉米和玉米蛋白粉替代比例的增加,仔猪日粮总能(GE)、有机物(OM)、干物质(DM)、粗蛋白质(CP)和粗脂肪(EE)的表观消化率呈线性或二次曲线降低(P <0.05).③随着自然霉变玉米和玉米蛋白粉替代比例的增加,血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)水平呈线性或二次曲线降低(P <0.05),丙氨酸转氨酶(ALT)水平呈线性或二次曲线升高(P <0.05),碱性磷酸酶(ALP)水平呈先降后升的二次曲线变化(P <0.05).综上所述,在本试验条件下,饲喂自然霉变玉米和玉米蛋白粉可降低仔猪生长性能,降低日粮总能、有机物、干物质、粗蛋白质、粗脂肪的表观消化率,影响机体血清酶的正常水平.     

产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备

本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和Hind Ⅲ的双酶切,将得到的1125 bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys宿主菌中,37 ℃、1.0 mmol/L IPTG诱导该片段获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为46.1 ku,与预期大小一致。Western blotting结果显示,该重组α毒素蛋白可被A型产气荚膜梭菌定型血清识别,表明该重组α毒素蛋白具备与天然毒素相似的反应原性。重组α毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和超声波裂解沉淀中均有分布,且以包涵体表达为主,表明重组α毒素蛋白可同时在胞外、周质和胞浆表达。小鼠毒力试验结果表明,重组α毒素蛋白不具有毒性。毒素—抗毒素中和试验结果表明,该抗血清具有α毒素特异性。以重组α毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明每1 mL重组α毒素蛋白抗血清可以中和100 MLD的A型毒素。     

镰刀菌毒素对断奶仔猪血清酶、肝脏抗氧化功能及组织病理学的影响

试验旨在研究镰刀菌毒素污染日粮对断奶仔猪血清酶、肝脏抗氧化功能及组织病理学的影响。选择35日龄体重为(8.45±0.94) kg的健康三元杂交(杜×长×大)断奶雌性仔猪40头,随机分为2组,每组20个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂用霉变玉米和霉变玉米蛋白粉替代基础日粮中50%的玉米和玉米蛋白粉配制而成的镰刀菌毒素污染日粮(玉米赤霉烯酮(ZEN) 0.90 mg/kg,呕吐毒素(DON) 1.43 mg/kg,烟曲霉毒素(FUM) 5.85 mg/kg)。仔猪单栏饲喂,预试期7 d,正试期35 d。结果表明:①与对照组相比,试验组断奶仔猪血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性均显著升高(P<0.05),肝脏相对重显著降低(P<0.05);②与对照组相比,试验组断奶仔猪血清和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性均显著降低(P<0.05),而丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);③病理组织学观察发现,试验组断奶仔猪肝脏出现一定程度的组织损伤,部分肝小叶边缘发生明显的炎性细胞浸润,肝细胞发生局部空泡变性。由此可知,镰刀菌毒素污染日粮(0.90 mg/kg ZEN,1.43 mg/kg DON,5.85 mg/kg FUM)饲喂断奶仔猪可引起仔猪血清酶活性改变,肝脏抗氧化功能降低,肝脏组织出现一定程度的病理损伤,从而影响肝脏功能的发挥。     

降解多种真菌毒素的芽孢杆菌的筛选鉴定及其发酵饲料应用

粮食作物在生长及其收获储存过程中,极易被有害真菌感染导致存在黄曲霉毒素（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）这3种真菌毒素污染,严重危害人和动物的健康。研究旨在筛选一种可以同时降解饲料原料中这3种真菌毒素的菌株,首次使用亚甲基蓝褪色作为降解真菌毒素筛选方法,再以过氧化物酶复筛最终获得一株蜡样芽孢杆菌BL-17,该菌株对AFB1、ZEN、DON 3种毒素同时存在的降解率分别达74.38%、98.31%和39.66%。后续将BL-17与两株乳酸菌混合对饲料原料进行发酵,在有氧条件下大幅度降解了饲料中这3种有毒物质,对AFB1、ZEN和DON的降解率分别高达86.72%、100%和43.19%。菌株BL-17不仅提高了发酵饲料的安全性,同时也可增加对非常规饲料原料的利用,具有很好的应用前景。     

新型柱前衍生-高效液相荧光检测法检测水产品中河豚毒素

在稀碱条件下,河鲀毒素(TTX)与次溴酸钠和尿素于一定温度下反应生成具有荧光性能的物质,该反应与已报道的TTX在强碱下生成C-9碱的碱解不同。本研究拟对该衍生反应所需条件进行详细研究,并尝试依据该反应建立一种新型的河鲀毒素荧光检测方法。荧光扫描光谱显示,产物最大激发波长(EX)为233 nm,最大发射波长(EM)为370 nm。该反应对p H要求比较严格,反应最适p H在11.6~11.9之间。对样品进行衍生检测获得最强荧光信号的条件为:次溴酸钠0.036~0.09 mol/L、尿素10~50 g/L、碳酸钠0.2~0.3 mol/L,温度75℃。样品检测结果显示,此衍生反应具有高度专一性,信号强度与TTX含量成正比,在0.01~10μg/m L质量浓度范围内线性方程为y=109.17x+0.3965,线性相关系数为0.999。依据该衍生反应建立柱前衍生–高效液相色谱荧光检测法检测水产品中河鲀毒素含量,检测限达到20μg/kg,平行样品检测相对标准偏差为0.44%~7.25%,准确度高。对河鲀、虾虎鱼和织纹螺产品检测表明,该反应特异性强,不易出现假阳性,可用于河鲀毒素检测的确证。     

黄曲霉毒素及其解毒剂在畜禽营养上的研究进展

黄曲霉毒素是畜禽饲料中危害最严重的生物类毒素,作者综述了黄曲霉毒素在畜禽体内的代谢及其对畜禽生长性能、抗氧化系统、免疫系统和肝脏的毒性作用,并介绍了物理吸附类、化学反应类、生物降解类和联合应用类黄曲霉毒素解毒剂及其作用效果,为饲料行业研究如何避免黄曲霉毒素污染提供参考。     

T-2毒素毒性作用研究进展

T-2是A类单端孢霉烯族化合物中毒性最强的一种,对动物机体具有较强的危害,可造成多个系统出现中毒效应。作者主要对T-2毒素对动物的广泛毒性作用进行论述,且对下一步的研究方向进行了展望。     

流式细胞术在霉菌毒素研究中的应用

世界范围内受霉菌毒素污染的农作物越来越多,这不仅造成巨大的经济损失,也给人和动物健康带来严重危害.近年来,由于流式细胞术能够对混合物中的单个细胞进行快速准确的分析,而逐步成为研究霉菌毒素细胞毒性作用的一种合理可行的方法.作者主要介绍了流式细胞术在检测霉菌毒素及其细胞毒性作用研究中的应用,以期为进一步探究霉菌毒素的毒性作用机制提供参考.